BAFF-var som en biomarkør for respons på B-depletiv behandling ved systemisk lupus erythematosus og revmatoid artritt (PREDICT)

BAKGRUNN

Systemisk lupus erythematosus (SLE) og revmatoid artritt (RA) er multisystem-immunmediert sykdom karakterisert ved en kompleks patogenese, hvor en unormal aktivering av den humorale immunresponsen, med overproduksjon av autoantistoffer, har vist seg å ha en sentral rolle.

B-lymfocyttstimulator (BAFF) er et cytokin- og medikamentmål som primært produseres av monocytter og nøytrofiler. Det er avgjørende for B-celleaktivering, differensiering og overlevelse. Overekspresjon av BAFF ble vist å være assosiert med et mer alvorlig mønster av SLE og korrelerer med hyppigere positivitet for anti-Sm (OR 1,7; 95 % CI 1,3, 2,2), anti-dsDNA med høy titer (OR 1,5; 95 % CI 1,1, 2,2), lavere C3 (OR 1,3; 95 % KI 1,0, 1,8), høyere proteinuri (OR 1,8; 95 % KI 1,4, 2,4) og økt risiko for oppblussing (HR 1,86; 95 % KI 1,29, 2,68). På samme måte har høye nivåer av BAFF blitt observert i blod og leddvæske hos RA-pasienter og ble vist å korrelere med høyere sykdomsaktivitet ved RA.

Belimumab og rituximab er den prototypiske formen for B-cellemålrettede terapier som for tiden er godkjent for henholdsvis SLE og RA.

Belimumab, et fullt humanisert monoklonalt antistoff rettet mot BAFF, er det første biologiske legemidlet som er lisensiert og godkjent for bruk i kombinasjon med standard immunsuppressiva ved SLE. Data fra RCT viste at høyere sykdomsaktivitet, anti-dsDNA-positivitet, lavt komplement og kortikosteroidbehandling kan forutsi en høyere fordel for belimumab. Rundt 40 % av forsøkspersonene oppnådde imidlertid ikke tilstrekkelig respons.

Rituximab (RTX) er et kimært monoklonalt antistoff som selektivt hemmer CD20-reseptoren på overflaten av B-lymfocytter. Bruk av RTX, fortrinnsvis i kombinasjon med metotreksat, er indisert hos pasienter med RA som ikke reagerer på behandling med tradisjonelle immunsuppressiva. Selv om større effekt ble registrert hos pasienter med positivitet for autoantistoffer (f. revmatoid faktor og anti-citrullinert peptid), også i dette tilfellet er ca. 30-40 % av pasientene utilstrekkelig responsive.

En variant av TNFSF13B-genet som koder for BAFF (BAFF-var), spesielt vanlig over Sardinia (allelfrekvens, 26,5 %) og gradvis mindre vanlig i sørlige (5,7 % i Italia, 5,0 % i Spania og Portugal) og Nord-Europa (1,8 % i Storbritannia og Sverige), var assosiert med autoimmune sykdommer, inkludert SLE og RA. Årsaksvarianten ble identifisert som en insersjon-delesjonsvariant, noe som ga et kortere transkripsjon som slapp mikroRNA-hemming og økt produksjon av løselig BAFF, som igjen oppregulerte humoral immunitet. Spesielt var BAFF-var assosiert med økt nivå av løselig BAFF (effektstørrelse 0,77 standardavvik (SD); P= 8,47 x10-150), IgG (0,31 SD, p=1,68x10-12), IgA (0,31 SD, p=7,64x10-9), IgM (0,31 SD, p=4,70x10-8), samt økt antall totale B-celler (0,18 SD, P=4,23x10-12) og flere undertyper, inkludert CD24+CD27+ (som omfatter ikke-svitsjet og svitsjet minne ) (0,22 SD, P=2,94x10-10) som den sterkt assosierte. Videre demonstrerte transkriptomdata BAFF-var som et ekspresjonskvantitativt egenskapslokus som øker TNFSF13B-ekspresjonen (P = 2,37 × 10-13). Imidlertid kunne de forhøyede mRNA-nivåene bare forklare 24-27 % av effekten på protein, noe som indikerer at en økning i translasjonsnivå også sannsynligvis var involvert. I denne forbindelse indikerer data at BAFF-var øker oppløselige BAFF-nivåer ved å favorisere produksjonen av et kortere transkripsjon som er mindre hemmet av mikroRNA, slik som miR-15a6.

Å kjenne til den effektive påvirkningen av BAFF-var i de immunologiske, molekylære og kliniske modifikasjonene indusert av BAFF-hemming har en avgjørende betydning i potensialet for en personlig medisin hos SLE- og RA-pasienter.

FORMÅL

• Primært mål: Å utforske det immunologiske grunnlaget for en potensiell rolle av BAFF-var som en prognostisk biomarkør for respons på belimumab eller rituximab i behandling av henholdsvis SLE- og RA-pasienter. Mer detaljert tar studien sikte på å evaluere om tilstanden til BAFF-var-bærer påvirker de medikamentrelaterte modifikasjonene av immunologiske og molekylære variabler, slik som: (a) løselig BAFF (BAFF) cytokin, (b) mRNA-BAFF (c) ) miRNA-15a (d) B-celle subpopulasjoner.
• Sekundære mål: Å utforske effekten av BAFF-var på den kliniske responsraten på belimumab eller rituximab, vurdert ved forskjellige utfallsmål.

FORSKNINGSDESIGN OG METODOLOGI

• Studiedesign: Det foreslåtte prosjektet er en observerende longitudinell studie
• Populasjon: Fordeling av BAFF-var og modifikasjoner på immunologiske, molekylære og kliniske variabler, etter oppstart av behandling med anti-BAFF-middel, vil bli analysert på en reell monosentrisk sardinsk kohort av SLE- og RA-pasienter. I denne forbindelse representerer sardineren den best egnede populasjonen for denne typen analyser på grunn av den høyere frekvensen av BAFF-var; faktisk tilstanden til BAFF-var-bærer forventes hos 50-60 % av pasientene. Omtrent 30 påfølgende SLE- og 30 påfølgende RA-patenter henvist til revmatologienheten ved Institutt for medisinske vitenskaper og folkehelse ved universitetet og universitetsklinikken i Cagliari vil bli rekruttert.
• Datainnsamling: Demografisk (f.eks. kjønn, alder ved innmelding, debutalder og diagnose), klinisk (f.eks. kumulative og aktive sykdomsmanifestasjoner, klinimetriske mål), serologiske (f.eks. autoantistoffer, inkludert anti-dsDNA, C3 og C4, IgG, IgA, IgM, RF, ACPA) og terapeutiske (f.eks. tidligere og nåværende terapier) vil bli samlet inn.
• BAFF-genotyping: For BAFF-genotyping vil fullblodsprøver bli samlet inn i EDTA ved påmeldingen. gDNA vil bli ekstrahert ved utsaltingsmetoden i henhold til standardprotokoll. Customs TaqMan-analyse (Thermo Fisher Scientific) spesielt utviklet for å genotype BAFF-variantene av interesse, vil bli brukt med allelspesifikk sanntids-PCR i alle prøver.
• B-celle fenotyping: Flowcytometri vil bli brukt til å profilere B-celle subpopulasjoner i de 30 registrerte SLE pasientene. Antallet B-celler (CD45+CD19+), samt det absolutte og relative antallet B-overgangs (CD24+CD38+), antistoffutskillende (ASC, CD27+CD38+), B-minne svitsjet (CD27+IgD-), B-minne u-svitsjede (CD27+IgD+), B-naive (IgD+CD27-CD24-) og B-regulatoriske (CD24+CD27+) celler vil bli vurdert ved Lyse-No-Wash-protokollen ved bruk av BD TruCountTM (Becton Dickinson).
• Løselig BAFF: det vil bli målt ved enzymkoblet immunosorbentanalyse (ELISA)
• Genekspresjonsstudie: mRNA vil bli ekstrahert fra fullblod med Trizol Reagent og den kvantitative analysen av mRNA-BAFF og miRNA-15a vil bli utført ved sanntids PCR ved bruk av spesifikke TaqMan-prober, etter revers transkripsjon i cDNA.
• Statistisk analyse. Statistisk analyse vil bli utført ved å bruke SPSS® statistisk programvare. Sammenligning av gjennomsnittlige nivåer av sBAFF, mRNA-BAFF, miRNA-15a og forskjellige B-celle fenotyper mellom BAFF-var + og BAFF-var - pasienter ved hvert besøk vil bli utført med T- Student test eller Mann Whitney test, hvis det er aktuelt. Sammenligning av gjennomsnittlig forskjell av nivåer av sBAFF, mRNA-BAFF, miRNA-15a og B-celle subpopulasjoner mellom BAFF-var + og BAFF-var - pasienter ved de forskjellige besøksintervallene vil bli utført med T- Student test eller Mann Whitney test , hvis det passer. Effekten av BAFF-var på modifikasjon av nivåene av de immunologiske og molekylære variablene ovenfor vil bli ytterligere vurdert ved multippel regresjon, inkludert som uavhengige variabler, samtidige behandlinger og sykdomstrekk ved baseline. Fishers eksakte test og logistisk regresjonsanalyse vil bli utført for å sammenligne responsraten, vurdert ved ulike effektmål, hos BAFF-var + og BAFF-var - pasienter.