BAFF-var jako biomarker odpowiedzi na leczenie zubożeniem B w toczniu rumieniowatym układowym i reumatoidalnym zapaleniu stawów (PREDICT)

TŁO

Toczeń rumieniowaty układowy (SLE) i reumatoidalne zapalenie stawów (RZS) to wieloukładowe choroby o podłożu immunologicznym charakteryzujące się złożoną patogenezą, w której kluczową rolę odgrywa nieprawidłowa aktywacja humoralnej odpowiedzi immunologicznej z nadprodukcją autoprzeciwciał.

Stymulator limfocytów B (BAFF) jest celem dla cytokin i leków, który jest wytwarzany głównie przez monocyty i neutrofile. Jest niezbędny do aktywacji, różnicowania i przeżycia komórek B. Wykazano, że nadekspresja BAFF jest związana z cięższym typem SLE i koreluje z częstszym dodatnim wynikiem anty-Sm (OR 1,7; 95% CI 1,3, 2,2), wysokim mianem anty-dsDNA (OR 1,5; 95% CI 1,1, 2,2), niższym C3 (OR 1,3; 95% CI 1,0; 1,8), większym białkomoczem (OR 1,8; 95% CI 1,4; 2,4) i zwiększonym ryzykiem zaostrzenia (HR 1,86; 95% CI 1,29; 2,68). Podobnie wysokie poziomy BAFF obserwowano we krwi i płynie maziowym pacjentów z RZS i wykazano, że korelują one z wyższą aktywnością choroby w RZS.

Belimumab i rytuksymab są prototypowymi postaciami terapii ukierunkowanych na komórki B, obecnie zatwierdzonych odpowiednio dla SLE i RA.

Belimumab, w pełni humanizowane przeciwciało monoklonalne skierowane przeciwko BAFF, jest pierwszym lekiem biologicznym zarejestrowanym i zatwierdzonym do stosowania w połączeniu ze standardowymi lekami immunosupresyjnymi w SLE. Dane z RCT wykazały, że wyższa aktywność choroby, dodatni wynik anty-dsDNA, niski poziom dopełniacza i leczenie kortykosteroidami mogą przewidywać większe korzyści ze stosowania belimumabu. Jednak około 40% badanych nie uzyskało odpowiedniej odpowiedzi.

Rytuksymab (RTX) jest chimerycznym przeciwciałem monoklonalnym, które selektywnie hamuje receptor CD20 na powierzchni limfocytów B. Stosowanie RTX, najlepiej w skojarzeniu z metotreksatem, jest wskazane u chorych na RZS niereagujących na leczenie tradycyjnymi lekami immunosupresyjnymi. Chociaż większą skuteczność odnotowano u pacjentów z dodatnim wynikiem autoprzeciwciał (np. czynnik reumatoidalny i peptyd antycytrulinowy), również w tym przypadku około 30-40% pacjentów nie reaguje odpowiednio.

Wariant genu TNFSF13B kodującego BAFF (BAFF-var), szczególnie powszechny na Sardynii (częstość alleli, 26,5%) i coraz mniej powszechny w południowej (5,7% we Włoszech, 5,0% w Hiszpanii i Portugalii) i północnej Europie (1,8% w Wielkiej Brytanii i Szwecji) wiązano z chorobami autoimmunologicznymi, w tym SLE i RZS. Wariant przyczynowy został zidentyfikowany jako wariant insercyjno-delecyjny, dający krótszy transkrypt, który uniknął hamowania mikroRNA i zwiększonej produkcji rozpuszczalnego BAFF, co z kolei zwiększyło odporność humoralną. W szczególności BAFF-var był związany ze zwiększonym poziomem rozpuszczalnego BAFF (wielkość efektu 0,77 odchylenia standardowego (SD); P=8,47 x10-150), IgG (0,31 SD, p=1,68x10-12), IgA (0,31 SD, p=7,64x10-9), IgM (0,31 SD, p=4,70x10-8), a także zwiększona liczba komórek B ogółem (0,18 SD, P=4,23x10-12) i kilka podtypów, w tym CD24+CD27+ (obejmujący pamięć niekomutowaną i przełączaną ) (0,22 SD, P=2,94x10-10) jako silnie związane. Ponadto dane transkryptomu wykazały BAFF-var jako locus cechy ilościowej ekspresji, które zwiększa ekspresję TNFSF13B ( P = 2, 37 × 10-13). Jednak podwyższone poziomy mRNA mogły wyjaśnić tylko 24-27% wpływu na białko, co wskazuje, że prawdopodobnie zaangażowany był również wzrost poziomu translacji. Pod tym względem dane wskazują, że BAFF-var podnosi poziomy rozpuszczalnego BAFF, sprzyjając wytwarzaniu krótszego transkryptu, który jest mniej hamowany przez mikroRNA, takie jak miR-15a6.

Znajomość skutecznego wpływu BAFF-var na modyfikacje immunologiczne, molekularne i kliniczne indukowane hamowaniem BAFF ma kluczowe znaczenie w perspektywie spersonalizowanej medycyny u pacjentów z SLE i RZS.

CELE

• Główny cel: Zbadanie immunologicznych podstaw potencjalnej roli BAFF-var jako prognostycznego biomarkera odpowiedzi na belimumab lub rytuksymab u pacjentów odpowiednio z SLE i RZS. Bardziej szczegółowo, badanie ma na celu ocenę, czy stan nosiciela BAFF-var wpływa na związane z lekiem modyfikacje zmiennych immunologicznych i molekularnych, takich jak: (a) rozpuszczalna cytokina BAFF (BAFFs), (b) mRNA-BAFF (c ) miRNA-15a ( d ) Subpopulacje komórek B.
• Cele drugorzędne: Zbadanie wpływu BAFF-var na odsetek odpowiedzi klinicznych na belimumab lub rytuksymab, oceniany za pomocą różnych miar wyników.

PROJEKT BADAŃ I METODOLOGIA

• Projekt badania: Proponowany projekt to obserwacyjne badanie podłużne
• Populacja: Dystrybucja BAFF-var i modyfikacje zmiennych immunologicznych, molekularnych i klinicznych, po rozpoczęciu leczenia środkiem anty-BAFF, zostanie przeanalizowana na rzeczywistej monocentrycznej sardyńskiej kohorcie pacjentów z SLE i RA. Pod tym względem Sardyńczycy reprezentują najbardziej odpowiednią populację do tego rodzaju analizy ze względu na wyższą częstość występowania BAFF-var; rzeczywiście stan nosiciela BAFF-var można się spodziewać u 50-60% pacjentów. Zrekrutowanych zostanie około 30 kolejnych patentów SLE i 30 kolejnych RZS skierowanych do Oddziału Reumatologii na Wydziale Nauk Medycznych i Zdrowia Publicznego Uniwersytetu i Kliniki Uniwersyteckiej w Cagliari.
• Gromadzenie danych: demograficzne (np. płeć, wiek w momencie włączenia, wiek zachorowania i rozpoznania), kliniczne (np. skumulowane i aktywne objawy choroby, pomiary klinimetryczne), serologiczne (np. zostaną zebrane autoprzeciwciała, w tym anty-dsDNA, C3 i C4, IgG, IgA, IgM, RF, ACPA) oraz terapeutyczne (np. przeszłe i obecne terapie).
• Genotypowanie BAFF: W przypadku genotypowania BAFF podczas rejestracji zostaną pobrane próbki krwi pełnej na EDTA. gDNA zostanie wyekstrahowany metodą wysalania zgodnie ze standardowym protokołem. Test Customs TaqMan (Thermo Fisher Scientific) specjalnie zaprojektowany do genotypowania interesujących wariantów BAFF zostanie użyty we wszystkich próbkach z PCR w czasie rzeczywistym specyficznym dla alleli.
• Fenotypowanie komórek B: Cytometria przepływowa zostanie zastosowana do profilowania subpopulacji komórek B u 30 włączonych pacjentów z SLE. Liczba limfocytów B (CD45+CD19+) oraz bezwzględna i względna liczba limfocytów B przejściowych (CD24+CD38+), wydzielających przeciwciała (ASC, CD27+CD38+), przełączanych z pamięcią B (CD27+IgD-), pamięci B niewyłączone (CD27+IgD+), naiwne komórki B (IgD+CD27-CD24-) i regulatorowe B (CD24+CD27+) zostaną ocenione za pomocą protokołu Lyse-No-Wash przy użyciu BD TruCountTM (Becton Dickinson).
• Rozpuszczalny BAFF: będzie mierzony za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA)
• Badanie ekspresji genów: mRNA zostanie wyekstrahowane z pełnej krwi za pomocą odczynnika Trizol, a analiza ilościowa mRNA-BAFF i miRNA-15a zostanie przeprowadzona metodą Real-Time PCR przy użyciu specyficznych sond TaqMan, po odwrotnej transkrypcji w cDNA.
• Analiza statystyczna. Analiza statystyczna zostanie przeprowadzona przy użyciu oprogramowania statystycznego SPSS®. Porównanie średnich poziomów sBAFF, mRNA-BAFF, miRNA-15a i różnych fenotypów komórek B pomiędzy pacjentami z BAFF-var + i BAFF-var - podczas każdej wizyty zostanie przeprowadzone za pomocą testu T-Studenta lub testu Manna Whitneya, jeśli to właściwe. Porównanie średniej różnicy poziomów sBAFF, mRNA-BAFF, miRNA-15a i subpopulacji komórek B pomiędzy BAFF-var + i BAFF-var - pacjenci w różnych odstępach czasu między wizytami zostaną przeprowadzone za pomocą testu T-Studenta lub testu Manna Whitneya , w razie potrzeby. Wpływ BAFF-var na modyfikację poziomów powyższych zmiennych immunologicznych i molekularnych będzie dalej oceniany za pomocą regresji wielokrotnej, w tym jako zmienne niezależne, towarzyszące leczenie i podstawowe cechy choroby. Dokładny test Fishera i analiza regresji logistycznej zostaną przeprowadzone w celu porównania odsetka odpowiedzi, ocenianego za pomocą różnych miar skuteczności, u pacjentów z BAFF-var + i BAFF-var-.