子宮頸部持続感染および発癌の HPV 免疫学的マーカー (HPVImmuno)
調査の概要
状態
条件
詳細な説明
この研究の最終目標は、リスク層別化と患者に合わせた治療法を定義するために、扁平上皮内病変（SIL）の発症と進行に影響を与えるウイルス特異的免疫やHPV関連パラメータなどの宿主因子を分析し、広く利用可能で非効率的な治療法を開発することである。 -侵襲的アッセイによる高い的中率の免疫スコア。
異常なパプスメアを有する女性における2年後の扁平上皮内病変（H SIL）の進行も評価され（主要評価項目）、扁平上皮内病変を有する女性および抗HPVワクチン接種後の免疫宿主プロフィールも評価される予定である。感染の持続性が分析されます（二次エンドポイント）。
私たちは、診断後最長 2 年まで 6 か月ごとに、パプスメア異常を認めて前向きに登録された患者を分析します。 各時点で、コルポスコピー中に、局所および末梢免疫応答の特性評価のために、末梢血 (30 mL) および子宮頸部サンプル (膣洗浄、子宮頸部生検およびパプスメア) が収集されます。 ウイルス量、HPV の組み込みは、診断および/または治癒手術時に患者から採取した細胞学的および組織サンプルで評価されます。
二次評価項目として、HPV 感染が確認され、治療用および予防用の HPV ワクチン接種を受けている患者を登録します。 ワクチン接種はHPV病変の診断後直ちに実施されます。 フォローアップ プログラムでは、2 年間にわたって 6 か月ごとにコルポスコピーが行われます。 HPV特異的免疫反応を6か月ごとに分析し、診断時と追跡調査終了時のウイルス量とHPVの組み込みを分析します。
抗原特異的増殖応答を評価するために、HPV-16および-18の抗原L1、E6、E7タンパク質およびヒトアクチンペプチドプールを用いて、96ウェル丸底プレート内でPBMCを3連で7日間刺激します。 培地は、2 mM L-グルタミン、100 U/mL ペニシリンおよび 100 μg/mL ストレプトマイシン溶液、10% の熱不活化 FBS、1 mM ピルビン酸ナトリウム、100 μM 非必須アミノ酸、および 50 μM 2 を添加した RPMI 1640 でした。 -メルカプトエタノール。 培養後、細胞を洗浄し、Live/Dead Fixable Violet Dye で染色し、続いて CD3、CD4、CD8、CD25、CD278 (ICOS) で染色します。 最後に、細胞を洗浄し、1% パラホルムアルデヒドを含む PBS に再懸濁します。
抗原特異的に増殖した T 細胞の細胞増殖指数 (CPI) は、CD25+ICOS+ T 細胞のパーセンテージから、アクチン ペプチドとインキュベートした PBMC で検出された CD25+ICOS+ CD3+CD4+ または CD3+CD8+ のパーセンテージを差し引くことによって決定されます。 HPVペプチドとインキュベートしたPBMCで検出されたサブセット。 CPI <1.5% はマイナスとみなされ、値 ≥1.5% はプラスとみなされます。
フローサイトメトリー分析は、FACS Canto II フローサイトメーターおよび BD DIVA ソフトウェアを使用して実行されました。
HPV関連の特徴の解析には、分子的アプローチが使用されます。 HPV DNAは、組織に対する特別な溶解処理の後、自動化システムを使用して生検材料および病変綿棒から抽出されます。
次に、L1/E2 および E6 領域に特異的なリアルタイム PCR を使用して HPV DNA を定量します。詳細には、L1 遺伝子の MY 09/11 フラグメントが使用されます。 結果はコピー数/100,000細胞として表され、ハウスキーピング遺伝子を使用して正規化されます。
組み込まれた HPV DNA またはエピソーム HPV DNA の示差定量には、ORF E2 および E6 の増幅のための特定の標準化システムが使用されます。
研究の種類
入学 (実際)
連絡先と場所
研究場所
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Pavia、イタリア
- Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
- 大人
- 高齢者
健康ボランティアの受け入れ
サンプリング方法
調査対象母集団
説明
包含基準:
- 年齢 > 18 歳。
- PAP検査の異常
- HPV DNA陽性
除外基準:
- プロトコルの要件を遵守できない。
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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主要エンドポイントの分析計画
時間枠：タイム 0 (登録)、タイム 1 (コルポスコピー後 6 か月)、タイム 2 (コルポスコピー後 12 か月)、タイム 3 (コルポスコピー後 18 か月)、T4 (コルポスコピー後 24 か月)
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単変数および多変数の間隔打ち切りCoxモデルを適用して、診断時に測定されたHPV特異的T細胞反応およびHPVウイルス量に基づいて、2年後の進行（進行性高悪性度病変）のハザード比（HR）を推定します。
精度、感度、特異性、曲線下面積 (AUC) に基づいて最適なモデルが選択されます。
最良のモデルから導出された LogRR は最も近い整数に丸められ、予測スコアの作成に使用されます。
患者内相関を考慮するために、クラスター化サンドイッチ推定量を使用して標準誤差を推定します。
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タイム 0 (登録)、タイム 1 (コルポスコピー後 6 か月)、タイム 2 (コルポスコピー後 12 か月)、タイム 3 (コルポスコピー後 18 か月)、T4 (コルポスコピー後 24 か月)
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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二次エンドポイントの分析計画
時間枠：フォローアップ プログラムでは、2 年間にわたって 6 か月ごとにコルポスコピーが行われます。
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進行に対する HPV ワクチンの効果は、ワクチン接種後 6 か月後に単変量および多変量の間隔打ち切り Cox モデルによって分析されます。
ワクチンは時間依存の共変量として分析されます。
すべての分析は、Stata ソフトウェア (リリース 16、StataCorp、カレッジ ステーション、テキサス州、米国) を使用して実行されます。
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フォローアップ プログラムでは、2 年間にわたって 6 か月ごとにコルポスコピーが行われます。
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協力者と研究者
捜査官
- 主任研究者：Barbara Gardella, MD、Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, Pavia, Italy
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (推定)
研究の完了 (推定)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (推定)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
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