자궁 경부 지속 감염 및 종양 발생의 HPV 면역 표지자 (HPVImmuno)
연구 개요
상태
정황
상세 설명
본 연구의 최종 목표는 편평상피내병변(SIL)의 발병과 진행에 영향을 미치는 바이러스 특이적 면역과 HPV 관련 매개변수를 포함한 숙주 요인을 분석하여 위험 계층화 및 맞춤형 치료를 정의하고 널리 접근 가능하고 비적용적인 치료법을 개발하는 것입니다. - 예측 가치가 높은 침습적 분석 면역 점수.
비정상적인 자궁경부암 검사를 받은 여성에서 2년차 편평상피내병변(H SIL)의 진행도 평가될 예정이며(1차 종료점), 편평상피내병변이 있고 감염의 지속성을 분석합니다(2차 종료점).
우리는 진단 후 최대 2년까지 6개월마다 비정상적인 자궁경부 세포진 검사로 전향적으로 등록된 환자를 분석할 것입니다. 각 시점에서 질경검사 중에 말초 혈액(30mL)과 자궁경부 샘플(질 세척, 자궁경부 생검 및 자궁경부암 검사)을 수집하여 국소 및 말초 면역 반응을 특성화합니다. 바이러스 부하, HPV 통합은 진단 및/또는 치료 수술 시 환자로부터 얻은 세포학적 및 조직 샘플에 대해 평가됩니다.
2차 평가변수로는 치료 및 예방 HPV 백신 접종을 받은 HPV 감염이 확인된 환자를 등록할 것입니다. HPV 병변 진단 후 즉시 예방접종을 실시합니다. 추적관찰 프로그램은 2년 동안 6개월마다 질경검사를 하는 것을 의미합니다. 6개월마다 HPV 특이적 면역반응을 분석하고, 진단 당시와 추적 관찰 종료 시 바이러스 수치와 HPV 통합을 분석할 예정이다.
항원 특이적 증식 반응을 평가하기 위해 PBMC를 HPV-16 및 -18의 항원 L1, E6, E7 단백질과 인간 액틴 펩타이드 풀을 사용하여 96웰 둥근 바닥 플레이트에서 7일 동안 3회 자극합니다. 배양 배지는 2mM L-글루타민, 100U/mL 페니실린 및 100μg/mL 스트렙토마이신 용액, 10% 열 불활성화 FBS, 1mM 피루브산나트륨, 100μM 비필수 아미노산 및 50μM 2 가 보충된 RPMI 1640이었습니다. -메르캅토에탄올. 배양 후 세포를 세척하고 Live/Dead Fixable Violet Dye()로 염색한 다음 CD3, CD4, CD8, CD25, CD278(ICOS)로 염색합니다. 마지막으로, 세포를 세척하고 PBS 1% 파라포름알데히드에 재현탁합니다.
항원 특이적 확장 T 세포에 대한 세포 증식 지수(CPI)는 CD25+ICOS+ T 세포의 백분율에서 액틴 펩타이드와 함께 배양된 PBMC에서 검출된 CD25+ICOS+ CD3+CD4+ 또는 CD3+CD8+의 백분율을 빼서 결정됩니다. HPV 펩타이드와 함께 배양된 PBMC에서 검출된 하위 집합. CPI가 1.5% 미만이면 부정적인 것으로 간주되고, 1.5% 이상이면 긍정적인 것으로 간주됩니다.
FACS Canto II 유세포 분석기 및 BD DIVA 소프트웨어를 사용하여 유세포 분석을 수행했습니다.
HPV 관련 특징 분석을 위해 분자 접근법이 사용됩니다. HPV DNA는 조직에 대한 특정 용해 처리 후 자동화 시스템을 사용하여 생검 및 병변 면봉에서 추출됩니다.
그런 다음 L1/E2 및 E6 영역에 특이적인 실시간 PCR을 사용하여 HPV DNA를 정량화합니다. 자세하게는 L1 유전자의 MY 09/11 단편이 사용됩니다. 결과는 복사본 수/100,000개 세포로 표시되며 하우스키핑 유전자를 사용하여 정규화됩니다.
통합된 또는 에피솜 HPV DNA의 차등적 정량화를 위해 ORF E2 및 E6의 증폭을 위한 특정 표준화 시스템이 사용될 것입니다.
연구 유형
등록 (실제)
연락처 및 위치
연구 장소
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Pavia, 이탈리아
- Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo
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참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
- 성인
- 고령자
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
샘플링 방법
연구 인구
설명
포함 기준:
- 연령>18세.
- 비정상적인 PAP 테스트
- HPV DNA 양성
제외 기준:
- 프로토콜의 요구 사항을 준수할 수 없습니다.
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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1차 평가변수 분석 계획
기간: 0회(등록), 1회(질확대경검사 후 6개월), 2회(질확대경검사 후 12개월), 3회(질확대경검사 후 18개월), T4(질확대경검사 후 24개월)
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일변량 및 다변량 간격 검열 Cox 모델을 적용하여 진단 시 측정된 HPV 특이적 T 세포 반응 및 HPV 바이러스 부하에 따라 2년 후 진행(진행된 고급 병변)의 위험 비율(HR)을 추정합니다.
정확도, 민감도, 특이성 및 곡선 아래 면적(AUC)을 기준으로 최상의 모델이 선택됩니다.
최고의 모델에서 파생된 LogRR은 가장 가까운 정수로 반올림되어 예측 점수를 생성하는 데 사용됩니다.
환자 내 상관관계를 설명하기 위해 군집 샌드위치 추정기를 사용하여 표준 오류를 추정합니다.
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0회(등록), 1회(질확대경검사 후 6개월), 2회(질확대경검사 후 12개월), 3회(질확대경검사 후 18개월), T4(질확대경검사 후 24개월)
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2차 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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2차 평가변수 분석 계획
기간: 추적 프로그램은 2년 동안 6개월마다 질경검사를 하는 것을 의미합니다.
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HPV 백신이 진행에 미치는 영향은 백신 접종 후 6개월에 일변량 및 다변량 간격 검열 Cox 모델을 통해 분석됩니다.
백신은 시간 의존적 공변량으로 분석됩니다.
모든 분석은 Stata 소프트웨어(릴리스 16,StataCorp, College Station, TX, USA)를 사용하여 수행됩니다.
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추적 프로그램은 2년 동안 6개월마다 질경검사를 하는 것을 의미합니다.
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공동 작업자 및 조사자
수사관
- 수석 연구원: Barbara Gardella, MD, Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, Pavia, Italy
연구 기록 날짜
연구 주요 날짜
연구 시작 (실제)
기본 완료 (추정된)
연구 완료 (추정된)
연구 등록 날짜
최초 제출
QC 기준을 충족하는 최초 제출
처음 게시됨 (실제)
연구 기록 업데이트
마지막 업데이트 게시됨 (실제)
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마지막으로 확인됨
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