宫颈持续感染和肿瘤发生的 HPV 免疫标志物 (HPVImmuno)
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条件
详细说明
本研究的终点是分析影响鳞状上皮内病变 (SIL) 发病和进展的宿主因素，包括病毒特异性免疫和 HPV 相关参数，以确定风险分层和定制治疗，开发可广泛使用且非-具有高预测价值的侵入性检测免疫评分。
还将评估子宫颈抹片异常女性 2 年时鳞状上皮内病变 (H SIL) 的进展（主要终点），以及患有鳞状上皮内病变和患有鳞状上皮内病变的女性在接种抗 HPV 预防性和治疗性疫苗接种后的免疫宿主概况。将分析感染的持续性（次要终点）。
我们将在诊断后每六个月至两年内对前瞻性入组的子宫颈抹片检查异常的患者进行分析。 在阴道镜检查期间的每个时间点，将收集外周血（30 mL）和宫颈样本（阴道冲洗、宫颈活检和子宫颈抹片检查），以表征局部和外周免疫反应。 病毒载量、HPV 整合将根据诊断和/或治愈性手术时从患者获得的细胞学和组织样本进行评估。
对于次要终点，我们将招募确诊 HPV 感染并接受治疗性和预防性 HPV 疫苗接种的患者。 HPV 病变诊断后立即进行疫苗接种。 随访计划意味着每六个月进行一次阴道镜检查，持续两年。 我们将每六个月分析一次 HPV 特异性免疫反应，并在诊断时和随访结束时分析病毒载量和 HPV 整合。
为了评估抗原特异性增殖反应，将在 96 孔圆底板中用 HPV-16 和 -18 的抗原 L1、E6、E7 蛋白和人肌动蛋白肽库刺激 PBMC 7 天，一式三份。 培养基为 RPMI 1640，补充有 2 mM L-谷氨酰胺、100 U/mL 青霉素和 100 µg/mL 链霉素溶液、10% 热灭活 FBS、1 mM 丙酮酸钠、100 µM 非必需氨基酸和 50 µM 2 -巯基乙醇。 培养后，将洗涤细胞，用活/死可固定紫罗兰染料染色，然后用 CD3、CD4、CD8、CD25、CD278 (ICOS) 染色。 最后，洗涤细胞并重悬于 PBS 1% 多聚甲醛中。
抗原特异性扩增 T 细胞的细胞增殖指数 (CPI) 将通过从 CD25+ICOS+ T 细胞的百分比中减去在与肌动蛋白肽一起孵育的 PBMC 中检测到的 CD25+ICOS+ CD3+CD4+ 或 CD3+CD8+ 的百分比来确定在与 HPV 肽一起孵育的 PBMC 中检测到的亚群。 CPI <1.5% 将被视为负值，而 ≥1.5% 将被视为正值。
使用FACS Canto II流式细胞仪和BD DIVA软件进行流式细胞术分析。
为了分析 HPV 相关特征，将使用分子方法。 对组织进行特定裂解处理后，将使用自动化系统从活检和病变拭子中提取 HPV DNA。
然后将使用针对 L1/E2 和 E6 区域的实时 PCR 来定量 HPV DNA；具体而言，将使用L1基因的MY 09/11片段。 结果将表示为拷贝数/100.000 个细胞，并使用管家基因进行标准化。
对于整合型或附加型 HPV DNA 的差异定量，将使用用于扩增 ORF E2 和 E6 的特定标准化系统。
研究类型
注册 (实际的)
联系人和位置
学习地点
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Pavia、意大利
- Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo
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参与标准
资格标准
适合学习的年龄
- 成人
- 年长者
接受健康志愿者
取样方法
研究人群
描述
纳入标准：
- 年龄>18岁。
- PAP 测试异常
- HPV DNA 阳性
排除标准：
- 无法遵守协议的要求。
学习计划
研究是如何设计的？
设计细节
研究衡量的是什么？
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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主要终点分析计划
大体时间：时间0（入组）、时间1（阴道镜检查后6个月）、时间2（阴道镜检查后12个月）、时间3（阴道镜检查后18个月）和T4（阴道镜检查后24个月）
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单变量和多变量区间删失 Cox 模型将根据诊断时测量的 HPV 特异性 T 细胞反应和 HPV 病毒载量，用于估计 2 年进展（晚期高级别病变）的风险比 (HR)。
将根据准确度、灵敏度、特异性和曲线下面积 (AUC) 选择最佳模型。
从最佳模型得出的 LogRR 将四舍五入到最接近的整数，并用于创建预测分数。
聚类三明治估计器将用于估计标准误差，以考虑患者内部的相关性。
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时间0（入组）、时间1（阴道镜检查后6个月）、时间2（阴道镜检查后12个月）、时间3（阴道镜检查后18个月）和T4（阴道镜检查后24个月）
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次要结果测量
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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次要终点分析计划
大体时间：随访计划意味着每六个月进行一次阴道镜检查，持续 2 年
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将在接种疫苗后六个月通过单变量和多变量间隔删失 Cox 模型分析 HPV 疫苗对进展的影响。
疫苗将作为时间依赖性协变量进行分析。
所有分析均使用 Stata 软件（版本 16，StataCorp，College Station，TX，USA）进行。
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随访计划意味着每六个月进行一次阴道镜检查，持续 2 年
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合作者和调查者
调查人员
- 首席研究员：Barbara Gardella, MD、Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, Pavia, Italy
研究记录日期
研究主要日期
学习开始 (实际的)
初级完成 (估计的)
研究完成 (估计的)
研究注册日期
首次提交
首先提交符合 QC 标准的
首次发布 (实际的)
研究记录更新
最后更新发布 (估计的)
上次提交的符合 QC 标准的更新
最后验证
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