虚弱のバイオマーカーとしての代謝調節不全: ミトコンドリア機能不全の役割 (FRAMITO)
この観察研究の目的は、酸化ストレスに関連するミトコンドリア機能不全の存在と、多疾患の有無にかかわらずフレイルにおけるミトコンドリア機能不全の考えられる役割を評価し、ミトコンドリア機能不全と相関する可能性のあるフレイルバイオマーカーを特定することです。 回答することを目的とした主な質問は次のとおりです。
- 多疾患併存症との相互作用を考慮した、虚弱における酸化ストレス関連のミトコンドリア機能不全の役割は何ですか。
- フレイルの評価においてミトコンドリア機能不全に関連する具体的なバイオマーカーは何でしょうか。
研究目標を達成するために、次の 3 つのカテゴリーの高齢者を登録します。
- 多疾患を伴わない非虚弱（NFWoM）。
- 多疾患を伴う虚弱（FWM）;
- 多疾患を伴わない虚弱性 (FWoM)。
各個人は虚弱表現型と多発性疾患の評価を受け、末梢血単核球 (PBMC) を分離するための血液サンプルの収集を受けます。 参加者の各グループにおける虚弱バイオマーカーの同定は、非標的メタボロミクスベースのアプローチと、PBMC とその亜集団に対して行われた特定のミトコンドリア機能不全に関する機能研究を組み合わせることによって行われます。 多変量統計および機械学習技術により、分子データに基づいて 3 つの臨床表現型グループが特徴付けられます。
調査の概要
状態
条件
詳細な説明
研究の種類: 観察的前向き研究。 主な目的は、酸化ストレスに関連するミトコンドリア機能不全の存在と、多疾患の有無にかかわらず、フレイルにおけるミトコンドリアの機能不全の可能性を評価することです。
主要評価項目: 虚弱におけるミトコンドリア機能不全。 第 2 の目的: PBMC および PBMC 亜集団 (B リンパ球、T リンパ球、単球) に対して実行される特定のミトコンドリア機能不全に関する非標的メタボロミクス ベースのアプローチと機能研究を組み合わせる。
研究活動は次のタスクで構成されます。
- タスク 1、患者の登録: 老人外来クリニックまたは老人病棟の 65 歳以上の個人を登録します。 各個人について、虚弱性と多発性疾患の評価を実施し、末梢血単核球 (PBMC) を分離するために血液サンプルを収集します。 3 つのカテゴリーの個人が登録されます: 複合疾患のない虚弱でない個人 (NFWoM) 25 名、複合疾患のある虚弱な個人 (FWM) 25 名、および複合疾患のない虚弱な個人 (FWoM) 25 名。
- タスク 2、PBMC 部分集団の分離: 蛍光活性化セルソーティング (FACS) 分離用セルソーティング施設および MoFlo Astrios セルソーターを使用して、凍結 PBMC から T リンパ球、B リンパ球、および単球を分離します。 CD45+/CD3+/CD19-/CD14- Tリンパ球、CD45+/CD3-/CD19+/CD14- Bリンパ球、CD45+/CD3-/CD19-/CD14+単球の分析。
- タスク 3、PBMC および PBMC 部分集団のミトコンドリア機能不全分析: 各個人について、mtDNA 損傷 (リアルタイム PCR による)、ミトコンドリア質量変化 (Mitotracker 染色による)、および細胞内およびミトコンドリアの活性酸素種 ( DCF および MitoSOX 染色による)。 さらに、Agilent Seahorse 細胞外フラックス アナライザー XFe96 を使用して、解糖代謝とミトコンドリア代謝の変化を評価します。
- タスク 4、PBMC および PBMC 部分集団の非ターゲット メタボロミクス: PBMC および部分集団の代謝サインを評価し、虚弱に関連する代謝調節異常を明らかにするために、PBMC、T リンパ球、B リンパ球、および単球に対して非ターゲット LC-MS ベースのメタボロミクスを実行します。 極性メタボロームの分析により、ミトコンドリアの調節不全に関連する代謝変化をより深く理解できるようになります。
- タスク 5、虚弱のバイオマーカーと分子機構の特性評価: 分子、代謝、および臨床データに関する統計および機械学習技術を使用して、虚弱の潜在的なバイオマーカーとミトコンドリア機能不全に関与する分子機構を研究します。 このステップは、分子測定に基づいて臨床表現型を特徴付けるのに役立ちます。
研究の種類
入学 (推定)
連絡先と場所
研究連絡先
- 名前：Caterina Trevisan, PhD
- 電話番号：00393896743650
- メール：caterina.trevisan@unife.it
参加基準
適格基準
就学可能な年齢
- 高齢者
健康ボランティアの受け入れ
サンプリング方法
調査対象母集団
説明
包含基準:
- 年齢 65 歳以上
- 安定した臨床状態
- 研究に参加する意欲（インフォームドコンセントの提供）
- イタリア語に堪能であること
除外基準:
- 急性または不安定な臨床状態
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
コホートと介入
グループ/コホート |
|---|
|
多疾患を伴わない非虚弱 (NFWoM)
65 歳以上で虚弱性がなく、複数の疾患を抱えていない個人。
このグループは、虚弱ではなく、複数の慢性疾患を抱えていない参加者の参考として役立ちます。
|
|
多疾患を伴う虚弱 (FWM)
65 歳以上で多発性疾患を患っている虚弱な人。
このグループには、虚弱性を示し、2 つ以上の慢性疾患を患っている参加者が含まれます。
|
|
多疾患を伴わない虚弱性 (FWoM)
65歳以上で複合疾患のない虚弱な人。
このグループは、複数の慢性疾患がない場合の虚弱性の評価に役立ちます。
|
この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
|---|---|---|
|
多発性疾患を有する虚弱個体と有しない虚弱個体との間の mtDNA コピー数の差異
時間枠：ベースライン
|
JetQuick™ Blood and Cell Culture DNA Midiprep Kit (Invitrogen) を使用して、参加者から得られた全 PBMC、T および B リンパ球および単球から mtDNA コピーが単離され、10 ng の DNA が QuantumStudio 7 リアルタイム PCR での分析に使用されます。 （アプライドバイオシステムズ）。 mtDNA コピー数は、ミトコンドリア ND1 遺伝子 (mtND1) レベルを核ベータ 2 ミクログロブリン (B2M) レベルに対して正規化することによって計算されます。 mtDNA のコピー数は、虚弱および多発性疾患のある個人と、多発性疾患のない虚弱性のある個人との間で比較されます。 虚弱性は、次のうち少なくとも 3 つの基準の存在に基づいて導き出されます: 4.5 kg 以上の不随意の体重減少、握力で測定される筋力低下、週 3 日以上の自己報告による疲労、低い身体活動 (IPAQ アンケートで評価)、歩行速度の低下（4m歩行テストで測定）。 多発性疾患は、少なくとも 2 つの慢性疾患の存在として定義されます。 |
ベースライン
|
|
非虚弱者と多重疾患を持たない虚弱者との間の mtDNA コピー数の違い
時間枠：ベースライン
|
JetQuick™ Blood and Cell Culture DNA Midiprep Kit (Invitrogen) を使用して、参加者から得られた全 PBMC、T および B リンパ球および単球から mtDNA コピーが単離され、10 ng の DNA が QuantumStudio 7 リアルタイム PCR での分析に使用されます。 （アプライドバイオシステムズ）。 mtDNA コピー数は、ミトコンドリア ND1 遺伝子 (mtND1) レベルを核ベータ 2 ミクログロブリン (B2M) レベルに対して正規化することによって計算されます。 mtDNA コピー数を、虚弱および多疾患合併症のある個人と、多疾患併存のない虚弱疾患のある個人との間で比較します。 虚弱性は、次のうち少なくとも 3 つの基準の存在に基づいて導き出されます: 4.5 kg 以上の不随意の体重減少、握力で測定される筋力低下、週 3 日以上の自己報告による疲労、低い身体活動 (IPAQ アンケートで評価)、歩行速度の低下（4m歩行テストで測定）。 多発性疾患は、少なくとも 2 つの慢性疾患の存在として定義されます。 |
ベースライン
|
二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
|---|---|---|
|
非虚弱者と多疾患を持たない虚弱者間のミトコンドリア蛍光の平均強度の変動
時間枠：ベースライン
|
研究参加者から得た500,000個のPBMCをCD45、CD3、CD19およびCD14抗体で染色し、100nM Mitotracker Deep Red (Thermo Fisher Scientific)とともに30℃で30分間インキュベートします。
細胞はまた、Live/Dead 色素で標識され、MoFLO Astrios セルソーターを使用したフローサイトメトリーによって分析されます。
Mitotracker Deep Red の蛍光強度中央値 (MFI) として評価されるミトコンドリア量は、総 PBMC、T および B リンパ球、および単球で評価されます。
各人口ゲートの 40,000 件のイベントが取得され、Kaluza ソフトウェアを使用してオフライン分析が実行されます。
|
ベースライン
|
|
多発疾患を有する虚弱個体と有しない虚弱個体との間のミトコンドリア蛍光の平均強度の変動
時間枠：ベースライン
|
研究参加者から得た500,000個のPBMCをCD45、CD3、CD19およびCD14抗体で染色し、100nM Mitotracker Deep Red (Thermo Fisher Scientific)とともに30℃で30分間インキュベートします。
細胞はまた、Live/Dead 色素で標識され、MoFLO Astrios セルソーターを使用したフローサイトメトリーによって分析されます。
Mitotracker Deep Red の蛍光強度中央値 (MFI) として評価されるミトコンドリア量は、総 PBMC、T および B リンパ球、および単球で評価されます。
各人口ゲートの 40,000 件のイベントが取得され、Kaluza ソフトウェアを使用してオフライン分析が実行されます。
|
ベースライン
|
|
非虚弱者と多疾患を持たない虚弱者間の細胞内活性酸素種 (ROS) の違い
時間枠：ベースライン
|
蛍光細胞透過性インジケーター 2',7'-ジクロロフルオレシン ジアセテート (DCFH-DA) は、細胞内 ROS の検出に使用されます。
DCFH-DA は細胞エステラーゼによって脱アセチル化されて非蛍光化合物になり、その後 ROS によって酸化されて蛍光 2',7'-ジクロロフルオレセイン (DCF) になります。
生成された蛍光シグナルの強度は、ROS の細胞内レベルと相関します。
25人のNFWoM、25人のFWMおよび25人のFWoM対象から得られた500,000個のPBMCをCD45、CD3、CD19およびCD14抗体で染色し、10μMの2',7'-ジクロロフルオレシンジアセテート（DCFH-DA）とともに37℃で30分間インキュベートします。 。
細胞は Live/Dead 色素で標識され、フローサイトメトリーによって分析されます。
DCF の蛍光強度中央値 (MFI) として評価される細胞内 ROS は、総 PBMC、T および B リンパ球、および単球で評価されます。
各人口ゲートの 40,000 件のイベントが取得され、Kaluza ソフトウェアを使用してオフライン分析が実行されます。
|
ベースライン
|
|
多疾患を有する虚弱個体と多疾患を持たない虚弱個体間の細胞内活性酸素種 (ROS) の違い
時間枠：ベースライン
|
蛍光細胞透過性インジケーター 2',7'-ジクロロフルオレシン ジアセテート (DCFH-DA) は、細胞内 ROS の検出に使用されます。
DCFH-DA は細胞エステラーゼによって脱アセチル化されて非蛍光化合物になり、その後 ROS によって酸化されて蛍光 2',7'-ジクロロフルオレセイン (DCF) になります。
生成された蛍光シグナルの強度は、ROS の細胞内レベルと相関します。
25人のNFWoM、25人のFWMおよび25人のFWoM対象から得られた500,000個のPBMCをCD45、CD3、CD19およびCD14抗体で染色し、10μMの2',7'-ジクロロフルオレシンジアセテート（DCFH-DA）とともに37℃で30分間インキュベートします。 。
細胞は Live/Dead 色素で標識され、フローサイトメトリーによって分析されます。
DCF の蛍光強度中央値 (MFI) として評価される細胞内 ROS は、総 PBMC、T および B リンパ球、および単球で評価されます。
各人口ゲートの 40,000 件のイベントが取得され、Kaluza ソフトウェアを使用してオフライン分析が実行されます。
|
ベースライン
|
|
非虚弱個体と多発疾患を持たない虚弱個体との間の、PBMC および PBMC 亜集団のメタボロミクスプロファイルにおける質的差異
時間枠：ベースライン
|
非ターゲット LC-MS ベースのメタボロミクスは、タスク 2 で説明したように取得した PBMC、T および B リンパ球および単球に対して実行されます。細胞サンプルは冷メタノールを使用してクエンチされます。
タンパク質の沈殿後、代謝物が抽出され、液体クロマトグラフィー質量分析 (LC-MS) によって分析されます。
Agilent 6546 lc/q-tof 機器 (Agilent) を使用した MS 検出の前に、親水性相互作用クロマトグラフィー (HILIC) を使用して極性メタボロームを分離します。全タンパク質含有量は NanoDrop™ (Thermofisher) で定量化され、代謝の正規化に使用されます。各サンプルのプロフィール。
|
ベースライン
|
|
多発性疾患を有する虚弱個体と有しない虚弱個体との間のPBMCおよびPBMC亜集団のメタボロミクスプロファイルにおける質的差異
時間枠：ベースライン
|
非ターゲット LC-MS ベースのメタボロミクスは、タスク 2 で説明したように取得した PBMC、T および B リンパ球および単球に対して実行されます。細胞サンプルは冷メタノールを使用してクエンチされます。
タンパク質の沈殿後、代謝物が抽出され、液体クロマトグラフィー質量分析 (LC-MS) によって分析されます。
Agilent 6546 lc/q-tof 機器 (Agilent) を使用した MS 検出の前に、親水性相互作用クロマトグラフィー (HILIC) を使用して極性メタボロームを分離します。全タンパク質含有量は NanoDrop™ (Thermofisher) で定量化され、代謝の正規化に使用されます。各サンプルのプロフィール。
|
ベースライン
|
協力者と研究者
捜査官
- 主任研究者：Caterina Trevisan, PhD、Università degli Studi di Ferrara
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (推定)
一次修了 (推定)
研究の完了 (推定)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
この情報は、Web サイト clinicaltrials.gov から変更なしで直接取得したものです。研究の詳細を変更、削除、または更新するリクエストがある場合は、register@clinicaltrials.gov。 までご連絡ください。 clinicaltrials.gov に変更が加えられるとすぐに、ウェブサイトでも自動的に更新されます。