Metabolisk dysregulering som biomarkør for skrøbelighed: Mitokondriel dysfunktions rolle (FRAMITO)
Målet med denne observationsundersøgelse er at evaluere tilstedeværelsen af mitokondriel dysfunktion relateret til oxidativ stress og dens mulige rolle i skrøbelighed, med og uden multimorbiditet, og at identificere mulige skrøbelighedsbiomarkører korreleret med mitokondriel dysfunktion. De vigtigste spørgsmål, den sigter mod at besvare er:
- Hvad er rollen for oxidativ stress-relateret mitokondriel dysfunktion i skrøbelighed, under hensyntagen til interaktionen med multimorbiditet.
- Hvad kunne være de specifikke biomarkører forbundet med mitokondriel dysfunktion i vurderingen af skrøbelighed.
For at nå studiemålene vil vi tilmelde tre kategorier af ældre voksne:
- Ikke-svag uden multimorbiditet (NFWoM);
- Skrøbelig med multimorbiditet (FWM);
- Skrøbelig uden multimorbiditet (FWoM).
Hvert individ vil gennemgå en vurdering af skrøbelighedsfænotype og multimorbiditet og indsamling af blodprøver for at isolere perifere blodmononukleære celler (PBMC'er). Identifikationen af skrøbelige biomarkører i hver gruppe af deltagere vil blive udført ved at kombinere ikke-målrettede metabolomics-baserede tilgange og funktionelle undersøgelser af specifikke mitokondrielle dysfunktioner udført på PBMC'er og deres subpopulationer. Multivariate statistiske og maskinlæringsteknikker vil karakterisere de tre kliniske fænotypegrupper baseret på molekylære data.
Studieoversigt
Status
Betingelser
Detaljeret beskrivelse
Undersøgelsestype: observationel prospektiv undersøgelse. Primært mål: er at evaluere tilstedeværelsen af mitokondriel dysfunktion relateret til oxidativ stress og dets mulige rolle i skrøbelighed, med og uden multimorbiditet.
Primært endepunkt: mitokondriel dysfunktion hos skrøbelighed. Sekundære mål: at kombinere ikke-målrettede metabolomics-baserede tilgange og funktionelle undersøgelser af specifikke mitokondrielle dysfunktioner udført på PBMC'er og PBMC-subpopulationer (B-lymfocytter, T-lymfocytter og monocytter).
Forskningsaktiviteterne er organiseret i følgende opgaver:
- Opgave 1, Patienttilmelding: Vi indskriver personer på 65 år eller ældre fra geriatriske ambulatorier eller geriatriske afdelinger. For hver enkelt person vil vi udføre en vurdering af skrøbelighed og multimorbiditet og indsamle blodprøver for at isolere perifere blodmononukleære celler (PBMC'er). Tre kategorier af individer vil blive tilmeldt: 25 ikke-svage individer uden multimorbiditet (NFWoM), 25 skrøbelige individer med multimorbiditet (FWM) og 25 skrøbelige individer uden multimorbiditet (FWoM).
- Opgave 2, Adskillelse af PBMC-underpopulationer: T-lymfocytter, B-lymfocytter og monocytter vil blive adskilt fra frosne PBMC'er ved hjælp af Cell Sorting Facility for Fluorescence-Activated Cell Sorting (FACS) separation og MoFlo Astrios cellesorteringsanlæg. Analyserne på CD45+/CD3+/CD19-/CD14-T-lymfocytter, CD45+/CD3-/CD19+/CD14-B-lymfocytter, CD45+/CD3-/CD19-/CD14+ monocytter.
- Opgave 3, Mitokondriel dysfunktionsanalyse på PBMC'er og PBMC-underpopulationer: For hvert individ vil mitokondriel dysfunktion blive evalueret ved at analysere mtDNA-skader (ved realtids-PCR), mitokondriel masseændring (ved Mitotracker-farvning) og intracellulære og mitokondrielle reaktive iltarter ved DCF- og MitoSOX-farvning). Desuden vil vi evaluere ændring af glykolytisk og mitokondriel metabolisme ved hjælp af Agilent Seahorse Extracellular Flux Analyzer XFe96.
- Opgave 4, Umålrettet metabolomik på PBMC'er og PBMC-subpopulationer: For at vurdere metaboliske signaturer af PBMC'er og subpopulationer og fremhæve metaboliske dysreguleringer forbundet med skrøbelighed, vil vi udføre umålrettet LC-MS-baseret metabolomik på PBMC'er, T-lymfocytter, B-lymfocytter og monocytter. Analysen af det polære metabolom vil give os mulighed for bedre at forstå de metaboliske ændringer forbundet med mitokondriel dysregulering.
- Opgave 5, Karakterisering af biomarkører og molekylær mekanisme for skrøbelighed: De potentielle biomarkører for skrøbelighed og de molekylære mekanismer involveret i mitokondriel dysfunktion vil blive undersøgt ved hjælp af statistiske og maskinlæringsteknikker på molekylære, metaboliske og kliniske data. Dette trin hjælper med at karakterisere kliniske fænotyper baseret på molekylære målinger.
Undersøgelsestype
Tilmelding (Anslået)
Kontakter og lokationer
Studiekontakt
- Navn: Caterina Trevisan, PhD
- Telefonnummer: 00393896743650
- E-mail: caterina.trevisan@unife.it
Deltagelseskriterier
Berettigelseskriterier
Aldre berettiget til at studere
- Ældre voksen
Tager imod sunde frivillige
Prøveudtagningsmetode
Studiebefolkning
Beskrivelse
Inklusionskriterier:
- Alder ≥ 65 år
- Stabile kliniske tilstande
- Villighed til at deltage i undersøgelsen (afgivelse af informeret samtykke)
- Færdighed i det italienske sprog
Ekskluderingskriterier:
- Akutte eller ustabile kliniske tilstande
Studieplan
Hvordan er undersøgelsen tilrettelagt?
Design detaljer
Kohorter og interventioner
Gruppe / kohorte |
|---|
|
Ikke-svag uden multimorbiditet (NFWoM)
Personer i alderen 65 år eller ældre uden skrøbelighed og uden multimorbiditet.
Denne gruppe vil tjene som reference for deltagere, der ikke er svage og ikke har flere kroniske lidelser.
|
|
Skrøbelig med multimorbiditet (FWM)
Skrøbelige personer i alderen 65 år eller ældre, som har multimorbiditet.
Denne gruppe vil omfatte deltagere, der udviser skrøbelighed og har to eller flere kroniske sygdomme.
|
|
Skrøbelig uden multimorbiditet (FWoM)
Skrøbelige personer i alderen 65 år eller ældre uden multimorbiditet.
Denne gruppe vil hjælpe med at vurdere skrøbelighed i fravær af flere kroniske tilstande.
|
Hvad måler undersøgelsen?
Primære resultatmål
Resultatmål |
Foranstaltningsbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Forskel i mtDNA-kopitallet mellem skrøbelige individer med vs uden multimorbiditet
Tidsramme: Baseline
|
mtDNA-kopier isoleret fra totale PBMC'er og fra T- og B-lymfocytter og monocytter, opnået fra deltagerne, med JetQuick™ Blood and Cell Culture DNA Midiprep Kit (Invitrogen), og 10 ng DNA vil blive brugt til analyse på QuantumStudio 7 Real Time PCR (Anvendte biosystemer). Antallet af mtDNA-kopi vil blive beregnet ved at normalisere mitokondrielle ND1-gen-niveauer (mtND1) til nukleare Beta-2-mikroglobulin (B2M)-niveauer. Antallet af mtDNA-kopier vil blive sammenlignet mellem individer med skrøbelighed og multimorbiditet vs individer med skrøbelighed uden multimorbiditet. Skrøbelighed vil blive udledt ud fra tilstedeværelsen af mindst tre kriterier blandt: ufrivilligt vægttab ≥ 4,5 kg, muskelsvaghed målt ved håndgreb, selvrapporteret træthed ≥ 3 dage om ugen, lav fysisk aktivitet (vurderet med IPAQ-spørgeskemaet), og reduceret ganghastighed (målt ved 4-m gangtesten). Multimorbiditet vil blive defineret som tilstedeværelsen af mindst to kroniske sygdomme. |
Baseline
|
|
Forskel i mtDNA-kopinummeret mellem ikke-svage vs skrøbelige individer uden multimorbiditet
Tidsramme: Baseline
|
mtDNA-kopier isoleret fra totale PBMC'er og fra T- og B-lymfocytter og monocytter, opnået fra deltagerne, med JetQuick™ Blood and Cell Culture DNA Midiprep Kit (Invitrogen), og 10 ng DNA vil blive brugt til analyse på QuantumStudio 7 Real Time PCR (Anvendte biosystemer). Antallet af mtDNA-kopi vil blive beregnet ved at normalisere mitokondrielle ND1-gen-niveauer (mtND1) til nukleare Beta-2-mikroglobulin (B2M)-niveauer. Antallet af mtDNA-kopier vil blive sammenlignet mellem individer med skrøbelighed og multimorbiditet vs individer med skrøbelighed uden multimorbiditet. Skrøbelighed vil blive udledt ud fra tilstedeværelsen af mindst tre kriterier blandt: ufrivilligt vægttab ≥ 4,5 kg, muskelsvaghed målt ved håndgreb, selvrapporteret træthed ≥ 3 dage om ugen, lav fysisk aktivitet (vurderet med IPAQ-spørgeskemaet), og reduceret ganghastighed (målt ved 4-m gangtesten). Multimorbiditet vil blive defineret som tilstedeværelsen af mindst to kroniske sygdomme. |
Baseline
|
Sekundære resultatmål
Resultatmål |
Foranstaltningsbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Variation i den gennemsnitlige intensitet af mitokondriel fluorescens mellem ikke-svage vs skrøbelige individer uden multimorbiditet
Tidsramme: Baseline
|
500.000 PBMC'er opnået fra studiedeltagerne vil blive farvet med CD45, CD3, CD19 og CD14 antistoffer og inkuberet med 100 nM Mitotracker Deep Red (Thermo Fisher Scientific) i 30 minutter ved 30°C.
Celler vil også blive mærket med levende/dødt farvestof og analyseret ved flowcytometri med MoFLO Astrios cellesorteringsanlæg.
Mitokondriel masse, vurderet som median fluorescensintensitet (MFI) af Mitotracker Deep Red, vil blive vurderet i samlede PBMC'er, T- og B-lymfocytter og monocytter.
40.000 begivenheder i hver befolkningsport vil blive erhvervet, og offline analyse vil blive udført med Kaluza software.
|
Baseline
|
|
Variation i den gennemsnitlige intensitet af mitokondriel fluorescens mellem svage individer med vs uden multimorbiditet
Tidsramme: Baseline
|
500.000 PBMC'er opnået fra studiedeltagerne vil blive farvet med CD45, CD3, CD19 og CD14 antistoffer og inkuberet med 100 nM Mitotracker Deep Red (Thermo Fisher Scientific) i 30 minutter ved 30°C.
Celler vil også blive mærket med levende/dødt farvestof og analyseret ved flowcytometri med MoFLO Astrios cellesorteringsanlæg.
Mitokondriel masse, vurderet som median fluorescensintensitet (MFI) af Mitotracker Deep Red, vil blive vurderet i samlede PBMC'er, T- og B-lymfocytter og monocytter.
40.000 begivenheder i hver befolkningsport vil blive erhvervet, og offline analyse vil blive udført med Kaluza software.
|
Baseline
|
|
Forskellen mellem intracellulære reaktive iltarter (ROS) mellem ikke-svage og skrøbelige individer uden multimorbiditet
Tidsramme: Baseline
|
Den fluorescerende cellegennemtrængelige indikator 2',7'-dichlorfluorescin diacetat (DCFH-DA) vil blive brugt til at påvise intracellulær ROS.
DCFH-DA deacetyleres af cellulære esteraser til en ikke-fluorescerende forbindelse, som senere oxideres af ROS til fluorescerende 2',7'-dichlorfluorescein (DCF).
Intensiteten af det genererede fluorescerende signal korrelerer med det intracellulære niveau af ROS.
500.000 PBMC'er opnået fra 25 NFWoM, 25 FWM og 25 FWoM forsøgspersoner vil blive farvet med CD45, CD3, CD19 og CD14 antistoffer og inkuberet med 10 μM 2',7'-dichlorfluorescin diacetat (DCFH 30 minutter DA) .
Celler vil også blive mærket med levende/døde farvestof og analyseret ved flowcytometri.
Intracellulær ROS, evalueret som median fluorescensintensitet (MFI) af DCF, vil blive vurderet i samlede PBMC'er, T- og B-lymfocytter og monocytter.
40.000 begivenheder i hver befolkningsport vil blive erhvervet, og offline analyse vil blive udført med Kaluza software.
|
Baseline
|
|
Forskel mellem intracellulære reaktive iltarter (ROS) mellem skrøbelige individer med kontra uden multimorbiditet
Tidsramme: Baseline
|
Den fluorescerende cellegennemtrængelige indikator 2',7'-dichlorfluorescin diacetat (DCFH-DA) vil blive brugt til at påvise intracellulær ROS.
DCFH-DA deacetyleres af cellulære esteraser til en ikke-fluorescerende forbindelse, som senere oxideres af ROS til fluorescerende 2',7'-dichlorfluorescein (DCF).
Intensiteten af det genererede fluorescerende signal korrelerer med det intracellulære niveau af ROS.
500.000 PBMC'er opnået fra 25 NFWoM, 25 FWM og 25 FWoM forsøgspersoner vil blive farvet med CD45, CD3, CD19 og CD14 antistoffer og inkuberet med 10 μM 2',7'-dichlorfluorescin diacetat (DCFH 30 minutter DA) .
Celler vil også blive mærket med levende/døde farvestof og analyseret ved flowcytometri.
Intracellulær ROS, evalueret som median fluorescensintensitet (MFI) af DCF, vil blive vurderet i samlede PBMC'er, T- og B-lymfocytter og monocytter.
40.000 begivenheder i hver befolkningsport vil blive erhvervet, og offline analyse vil blive udført med Kaluza software.
|
Baseline
|
|
Kvalitativ forskel i metabolomiske profiler af PBMC'er og PBMC-subpopulationer mellem ikke-svage vs skrøbelige individer uden multimorbiditet
Tidsramme: Baseline
|
Umålrettet LC-MS-baseret metabolomik vil blive udført på PBMC'er og på T- og B-lymfocytter og monocytter, opnået som beskrevet i opgave 2. Celleprøver vil blive quenchet ved hjælp af kold methanol.
Efter proteinudfældning vil metabolitter blive ekstraheret og analyseret ved væskekromatografi massespektrometri (LC-MS).
Hydrofil interaktionskromatografi (HILIC) vil blive brugt til at opløse det polære metabolom før MS-detektion ved hjælp af et Agilent 6546 lc/q-tof instrument (Agilent). Hele proteinindholdet vil blive kvantificeret med NanoDrop™ (Thermofisher) og brugt til at normalisere metabolismen profilen af hver prøve.
|
Baseline
|
|
Kvalitativ forskel i metabolomiske profiler af PBMC'er og PBMC-subpopulationer mellem skrøbelige individer med kontra uden multimorbiditet
Tidsramme: Baseline
|
Umålrettet LC-MS-baseret metabolomik vil blive udført på PBMC'er og på T- og B-lymfocytter og monocytter, opnået som beskrevet i opgave 2. Celleprøver vil blive quenchet ved hjælp af kold methanol.
Efter proteinudfældning vil metabolitter blive ekstraheret og analyseret ved væskekromatografi massespektrometri (LC-MS).
Hydrofil interaktionskromatografi (HILIC) vil blive brugt til at opløse det polære metabolom før MS-detektion ved hjælp af et Agilent 6546 lc/q-tof instrument (Agilent). Hele proteinindholdet vil blive kvantificeret med NanoDrop™ (Thermofisher) og brugt til at normalisere metabolismen profilen af hver prøve.
|
Baseline
|
Samarbejdspartnere og efterforskere
Sponsor
Samarbejdspartnere
Efterforskere
- Ledende efterforsker: Caterina Trevisan, PhD, Università degli Studi di Ferrara
Datoer for undersøgelser
Studer store datoer
Studiestart (Anslået)
Primær færdiggørelse (Anslået)
Studieafslutning (Anslået)
Datoer for studieregistrering
Først indsendt
Først indsendt, der opfyldte QC-kriterier
Først opslået (Faktiske)
Opdateringer af undersøgelsesjournaler
Sidste opdatering sendt (Faktiske)
Sidste opdatering indsendt, der opfyldte kvalitetskontrolkriterier
Sidst verificeret
Mere information
Begreber relateret til denne undersøgelse
Nøgleord
Yderligere relevante MeSH-vilkår
Andre undersøgelses-id-numre
- 653/2023/Oss/AOUFe
Lægemiddel- og udstyrsoplysninger, undersøgelsesdokumenter
Studerer et amerikansk FDA-reguleret lægemiddelprodukt
Studerer et amerikansk FDA-reguleret enhedsprodukt
Disse oplysninger blev hentet direkte fra webstedet clinicaltrials.gov uden ændringer. Hvis du har nogen anmodninger om at ændre, fjerne eller opdatere dine undersøgelsesoplysninger, bedes du kontakte register@clinicaltrials.gov. Så snart en ændring er implementeret på clinicaltrials.gov, vil denne også blive opdateret automatisk på vores hjemmeside .
Kliniske forsøg med Kronisk sygdom
-
Jules Bordet InstituteMacopharma; Belgian Hematological SocietyRekrutteringRefractory Chronic Graft Versus Host Disease (cGVHD)Belgien
-
Bahria UniversityIslamabad Medical and Dental CollegeAktiv, ikke rekrutterendeAlveolær knogletab Associated Chronic PeriodontitisPakistan
-
West China HospitalIkke rekrutterer endnuPTLD'er | CAEBV (Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection) SyndromKina
-
Beijing Friendship HospitalIkke rekrutterer endnuEBV | Hæmofagocytiske lymfohistiocytoser | CAEBV (Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection) SyndromKina
-
Novartis PharmaceuticalsLedigPrimær myelofibrose (PMF) | Polycytæmi Vera (PV) | Post polycytæmi myelofibrose (PPV MF) | Trombocytæmi myelofibrose (PET-MF) | Alvorlig/meget svær COVID-19 sygdom | Steroid Refractory Acute Graft Versus Host Disease (SR aGVHD) | Steroid Refractory Chronic Graft Versus Host Disease (SR cGVHD)