Metabolická dysregulace jako biomarker křehkosti: Role mitochondriální dysfunkce (FRAMITO)
Cílem této observační studie je vyhodnotit přítomnost mitochondriální dysfunkce související s oxidačním stresem a její možnou roli v křehkosti, s multimorbiditou i bez ní, a identifikovat možné biomarkery křehkosti korelující s mitochondriální dysfunkcí. Hlavní otázky, na které chce odpovědět, jsou:
- Jaká je role mitochondriální dysfunkce související s oxidačním stresem u křehkosti s přihlédnutím k interakci s multimorbiditou.
- Jaké by mohly být specifické biomarkery spojené s mitochondriální dysfunkcí při hodnocení křehkosti.
Abychom dosáhli studijních cílů, zapíšeme tři kategorie starších dospělých:
- Non-frail bez multimorbidity (NFWoM);
- Frail s multimorbiditou (FWM);
- Frail bez multimorbidity (FWoM).
Každý jedinec podstoupí posouzení fenotypu křehkosti a multimorbidity a odběr vzorků krve k izolaci mononukleárních buněk periferní krve (PBMC). Identifikace slabých biomarkerů v každé skupině účastníků bude provedena kombinací necílených přístupů založených na metabolomice a funkčních studií specifických mitochondriálních dysfunkcí prováděných na PBMC a jejich subpopulacích. Vícerozměrné statistické techniky a techniky strojového učení budou charakterizovat tři klinické fenotypové skupiny založené na molekulárních datech.
Přehled studie
Postavení
Detailní popis
Typ studie: observační prospektivní studie. Primární cíl: je zhodnotit přítomnost mitochondriální dysfunkce související s oxidačním stresem a její možnou roli u křehkosti, s multimorbiditou a bez ní.
Primární cíl: mitochondriální dysfunkce při křehkosti. Sekundární cíle: kombinovat necílené přístupy založené na metabolomice a funkční studie specifických mitochondriálních dysfunkcí prováděné na PBMC a subpopulacích PBMC (B lymfocyty, T lymfocyty a monocyty).
Výzkumné aktivity jsou organizovány v následujících úkolech:
- Úkol 1, Zápis pacientů: Zapíšeme jedince ve věku 65 let a starší z geriatrických ambulancí nebo geriatrických oddělení. U každého jedince provedeme posouzení křehkosti a multimorbidity a odebereme vzorky krve k izolaci mononukleárních buněk periferní krve (PBMC). Zapsány budou tři kategorie jedinců: 25 nekřehkých jedinců bez multimorbidity (NFWoM), 25 křehkých jedinců s multimorbiditou (FWM) a 25 křehkých jedinců bez multimorbidity (FWoM).
- Úkol 2, Separace subpopulací PBMC: T lymfocyty, B lymfocyty a monocyty budou separovány ze zmrazených PBMC pomocí separačního zařízení Cell Sorting Facility for Fluorescence-Activated Cell Sorting (FACS) a separátoru buněk MoFlo Astrios. Analýzy na CD45+/CD3+/CD19-/CD14- T lymfocytech, CD45+/CD3-/CD19+/CD14- B lymfocytech, CD45+/CD3-/CD19-/CD14+ monocytech.
- Úkol 3, Analýza mitochondriální dysfunkce na PBMC a subpopulacích PBMC: U každého jednotlivce bude mitochondriální dysfunkce vyhodnocena analýzou poškození mtDNA (pomocí PCR v reálném čase), změny mitochondriální hmoty (barvením Mitotracker) a intracelulárních a mitochondriálních reaktivních druhů kyslíku ( barvením DCF a MitoSOX). Kromě toho budeme hodnotit alteraci glykolytického a mitochondriálního metabolismu pomocí Agilent Seahorse Extracellular Flux Analyzer XFe96.
- Úkol 4, Necílená metabolomika na PBMC a subpopulacích PBMC: Abychom vyhodnotili metabolický podpis PBMC a subpopulací a upozornili na metabolické dysregulace spojené s křehkostí, provedeme necílenou metabolomiku založenou na LC-MS na PBMC, T lymfocytech, B lymfocytech a monocytech. Analýza polárního metabolomu nám umožní lépe porozumět metabolickým změnám spojeným s mitochondriální dysregulací.
- Úkol 5, Charakterizace biomarkerů a molekulárního mechanismu křehkosti: Potenciální biomarkery křehkosti a molekulární mechanismy zapojené do mitochondriální dysfunkce budou studovány pomocí statistických technik a technik strojového učení na molekulárních, metabolických a klinických datech. Tento krok pomůže charakterizovat klinické fenotypy na základě molekulárních měření.
Typ studie
Zápis (Odhadovaný)
Kontakty a umístění
Studijní kontakt
- Jméno: Caterina Trevisan, PhD
- Telefonní číslo: 00393896743650
- E-mail: caterina.trevisan@unife.it
Kritéria účasti
Kritéria způsobilosti
Věk způsobilý ke studiu
- Starší dospělý
Přijímá zdravé dobrovolníky
Metoda odběru vzorků
Studijní populace
Popis
Kritéria pro zařazení:
- Věk ≥ 65 let
- Stabilní klinické stavy
- Ochota zúčastnit se studie (poskytnutí informovaného souhlasu)
- Znalost italského jazyka
Kritéria vyloučení:
- Akutní nebo nestabilní klinické stavy
Studijní plán
Jak je studie koncipována?
Detaily designu
Kohorty a intervence
Skupina / kohorta |
|---|
|
Non-frail bez multimorbidity (NFWoM)
Jedinci ve věku 65 let a starší bez křehkosti a bez multimorbidity.
Tato skupina bude sloužit jako reference pro účastníky, kteří nejsou křehcí a nemají více chronických onemocnění.
|
|
Frail s multimorbiditou (FWM)
Křehcí jedinci ve věku 65 let nebo starší, kteří trpí multimorbiditou.
Tato skupina bude zahrnovat účastníky, kteří vykazují křehkost a mají dvě nebo více chronických onemocnění.
|
|
Frail bez multimorbidity (FWoM)
Křehcí jedinci ve věku 65 let nebo starší bez multimorbidity.
Tato skupina pomůže posoudit křehkost v nepřítomnosti více chronických stavů.
|
Co je měření studie?
Primární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Rozdíl v počtu kopií mtDNA mezi křehkými jedinci s a bez multimorbidity
Časové okno: Základní linie
|
Kopie mtDNA izolované z celkových PBMC a z T a B lymfocytů a monocytů získané od účastníků pomocí sady JetQuick™ Blood and Cell Culture DNA Midiprep Kit (Invitrogen) a 10 ng DNA bude použito pro analýzu na QuantumStudio 7 Real Time PCR (Applied Biosystems). Počet kopií mtDNA bude vypočítán normalizací hladin mitochondriálního genu ND1 (mtND1) na hladiny jaderného beta-2 mikroglobulinu (B2M). Počet kopií mtDNA bude porovnán mezi jedinci s křehkostí a multimorbiditou vs. jedinci s křehkostí bez multimorbidity. Křehkost bude odvozena na základě přítomnosti alespoň tří kritérií mezi: nedobrovolný úbytek hmotnosti ≥ 4,5 kg, svalová slabost měřená hmatem, únava sama hlášená ≥ 3 dny v týdnu, nízká fyzická aktivita (posuzováno pomocí dotazníku IPAQ), a snížená rychlost chůze (měřeno testem chůze na 4 m). Multimorbidita bude definována jako přítomnost alespoň dvou chronických onemocnění. |
Základní linie
|
|
Rozdíl v počtu kopií mtDNA mezi nekřehkými a křehkými jedinci bez multimorbidity
Časové okno: Základní linie
|
Kopie mtDNA izolované z celkových PBMC a z T a B lymfocytů a monocytů získané od účastníků pomocí sady JetQuick™ Blood and Cell Culture DNA Midiprep Kit (Invitrogen) a 10 ng DNA bude použito pro analýzu na QuantumStudio 7 Real Time PCR (Applied Biosystems). Počet kopií mtDNA bude vypočítán normalizací hladin mitochondriálního genu ND1 (mtND1) na hladiny jaderného beta-2 mikroglobulinu (B2M). Počet kopií mtDNA bude porovnán mezi jedinci s křehkostí a multimorbiditou vs. jedinci s křehkostí bez multimorbidity. Křehkost bude odvozena na základě přítomnosti alespoň tří kritérií mezi: nedobrovolný úbytek hmotnosti ≥ 4,5 kg, svalová slabost měřená hmatem, únava sama hlášená ≥ 3 dny v týdnu, nízká fyzická aktivita (posuzováno pomocí dotazníku IPAQ), a snížená rychlost chůze (měřeno testem chůze na 4 m). Multimorbidita bude definována jako přítomnost alespoň dvou chronických onemocnění. |
Základní linie
|
Sekundární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Variace ve střední intenzitě mitochondriální fluorescence mezi nekřehkými vs křehkými jedinci bez multimorbidity
Časové okno: Základní linie
|
500 000 PBMC získaných od účastníků studie bude obarveno protilátkami CD45, CD3, CD19 a CD14 a inkubováno s 100 nM Mitotracker Deep Red (Thermo Fisher Scientific) po dobu 30 minut při 30 °C.
Buňky budou také označeny barvivem Live/Dead a analyzovány průtokovou cytometrií s MoFLO Astrios cell sorter.
Mitochondriální hmota, hodnocená jako střední intenzita fluorescence (MFI) Mitotracker Deep Red, bude hodnocena v celkových PBMC, T a B lymfocytech a monocytech.
Bude získáno 40 000 událostí v každé populační bráně a bude provedena offline analýza pomocí softwaru Kaluza.
|
Základní linie
|
|
Variace ve střední intenzitě mitochondriální fluorescence mezi křehkými jedinci s vs bez multimorbidity
Časové okno: Základní linie
|
500 000 PBMC získaných od účastníků studie bude obarveno protilátkami CD45, CD3, CD19 a CD14 a inkubováno s 100 nM Mitotracker Deep Red (Thermo Fisher Scientific) po dobu 30 minut při 30 °C.
Buňky budou také označeny barvivem Live/Dead a analyzovány průtokovou cytometrií s MoFLO Astrios cell sorter.
Mitochondriální hmota, hodnocená jako střední intenzita fluorescence (MFI) Mitotracker Deep Red, bude hodnocena v celkových PBMC, T a B lymfocytech a monocytech.
Bude získáno 40 000 událostí v každé populační bráně a bude provedena offline analýza pomocí softwaru Kaluza.
|
Základní linie
|
|
Rozdíl intracelulárních reaktivních druhů kyslíku (ROS) mezi nekřehkými a křehkými jedinci bez multimorbidity
Časové okno: Základní linie
|
Fluorescenční indikátor propustnosti buněk 2',7'-dichlorfluorescin diacetát (DCFH-DA) bude použit pro detekci intracelulárního ROS.
DCFH-DA je deacetylován buněčnými esterázami na nefluorescenční sloučeninu, která je později oxidována pomocí ROS na fluorescenční 2',7'-dichlorfluorescein (DCF).
Intenzita generovaného fluorescenčního signálu koreluje s intracelulární hladinou ROS.
500 000 PBMC získaných od 25 NFWoM, 25 FWM a 25 FWoM subjektů bude obarveno CD45, CD3, CD19 a CD14 protilátkami a inkubováno s 10 μM 2',7'-dichlorfluorescin diacetátem (DCFH°C) po 30 minutách .
Buňky budou také označeny barvivem Live/Dead a analyzovány průtokovou cytometrií.
Intracelulární ROS, hodnocená jako střední intenzita fluorescence (MFI) DCF, bude hodnocena v celkových PBMC, T a B lymfocytech a monocytech.
Bude získáno 40 000 událostí v každé populační bráně a bude provedena offline analýza pomocí softwaru Kaluza.
|
Základní linie
|
|
Rozdíl mezi intracelulárními reaktivními druhy kyslíku (ROS) mezi křehkými jedinci s multimorbiditou vs.
Časové okno: Základní linie
|
Fluorescenční indikátor propustnosti buněk 2',7'-dichlorfluorescin diacetát (DCFH-DA) bude použit pro detekci intracelulárního ROS.
DCFH-DA je deacetylován buněčnými esterázami na nefluorescenční sloučeninu, která je později oxidována pomocí ROS na fluorescenční 2',7'-dichlorfluorescein (DCF).
Intenzita generovaného fluorescenčního signálu koreluje s intracelulární hladinou ROS.
500 000 PBMC získaných od 25 NFWoM, 25 FWM a 25 FWoM subjektů bude obarveno CD45, CD3, CD19 a CD14 protilátkami a inkubováno s 10 μM 2',7'-dichlorfluorescin diacetátem (DCFH°C) po 30 minutách .
Buňky budou také označeny barvivem Live/Dead a analyzovány průtokovou cytometrií.
Intracelulární ROS, hodnocená jako střední intenzita fluorescence (MFI) DCF, bude hodnocena v celkových PBMC, T a B lymfocytech a monocytech.
Bude získáno 40 000 událostí v každé populační bráně a bude provedena offline analýza pomocí softwaru Kaluza.
|
Základní linie
|
|
Kvalitativní rozdíl v metabolomických profilech PBMC a subpopulací PBMC mezi nekřehkými a křehkými jedinci bez multimorbidity
Časové okno: Základní linie
|
Necílená metabolomika založená na LC-MS bude prováděna na PBMC a na T a B lymfocytech a monocytech, získaných tak, jak je popsáno v úloze 2. Vzorky buněk budou zhášeny studeným methanolem.
Po precipitaci proteinu budou metabolity extrahovány a analyzovány kapalinovou chromatografií hmotnostní spektrometrií (LC-MS).
Hydrofilní interakční chromatografie (HILIC) bude použita k rozlišení polárního metabolomu před detekcí MS pomocí přístroje Agilent 6546 lc/q-tof (Agilent). Celý obsah proteinu bude kvantifikován pomocí NanoDrop™ (Thermofisher) a použit k normalizaci metabolických procesů. profilu každého vzorku.
|
Základní linie
|
|
Kvalitativní rozdíl v metabolomických profilech PBMC a subpopulací PBMC mezi křehkými jedinci s multimorbiditou vs.
Časové okno: Základní linie
|
Necílená metabolomika založená na LC-MS bude prováděna na PBMC a na T a B lymfocytech a monocytech, získaných tak, jak je popsáno v úloze 2. Vzorky buněk budou zhášeny studeným methanolem.
Po precipitaci proteinu budou metabolity extrahovány a analyzovány kapalinovou chromatografií hmotnostní spektrometrií (LC-MS).
Hydrofilní interakční chromatografie (HILIC) bude použita k rozlišení polárního metabolomu před detekcí MS pomocí přístroje Agilent 6546 lc/q-tof (Agilent). Celý obsah proteinu bude kvantifikován pomocí NanoDrop™ (Thermofisher) a použit k normalizaci metabolických procesů. profilu každého vzorku.
|
Základní linie
|
Spolupracovníci a vyšetřovatelé
Sponzor
Spolupracovníci
Vyšetřovatelé
- Vrchní vyšetřovatel: Caterina Trevisan, PhD, Università degli Studi di Ferrara
Termíny studijních záznamů
Hlavní termíny studia
Začátek studia (Odhadovaný)
Primární dokončení (Odhadovaný)
Dokončení studie (Odhadovaný)
Termíny zápisu do studia
První předloženo
První předloženo, které splnilo kritéria kontroly kvality
První zveřejněno (Aktuální)
Aktualizace studijních záznamů
Poslední zveřejněná aktualizace (Aktuální)
Odeslaná poslední aktualizace, která splnila kritéria kontroly kvality
Naposledy ověřeno
Více informací
Termíny související s touto studií
Klíčová slova
Další relevantní podmínky MeSH
Další identifikační čísla studie
- 653/2023/Oss/AOUFe
Informace o lécích a zařízeních, studijní dokumenty
Studuje lékový produkt regulovaný americkým FDA
Studuje produkt zařízení regulovaný americkým úřadem FDA
Tyto informace byly beze změn načteny přímo z webu clinicaltrials.gov. Máte-li jakékoli požadavky na změnu, odstranění nebo aktualizaci podrobností studie, kontaktujte prosím register@clinicaltrials.gov. Jakmile bude změna implementována na clinicaltrials.gov, bude automaticky aktualizována i na našem webu .