Metabole ontregeling als biomarker van kwetsbaarheid: rol van de mitochondriale disfunctie (FRAMITO)
Het doel van deze observationele studie is om de aanwezigheid van mitochondriale disfunctie gerelateerd aan oxidatieve stress en de mogelijke rol ervan bij kwetsbaarheid, met en zonder multimorbiditeit, te evalueren en om mogelijke kwetsbaarheidsbiomarkers te identificeren die gecorreleerd zijn met mitochondriale disfunctie. De belangrijkste vragen die het wil beantwoorden zijn:
- Wat is de rol van oxidatieve stress-gerelateerde mitochondriale disfunctie bij kwetsbaarheid, rekening houdend met de interactie met multimorbiditeit.
- Wat kunnen de specifieke biomarkers zijn die geassocieerd zijn met mitochondriale disfunctie bij de beoordeling van kwetsbaarheid?
Om de studiedoelen te bereiken, zullen we drie categorieën ouderen inschrijven:
- Niet-Frail zonder Multimorbiditeit (NFWoM);
- Kwetsbaar met multimorbiditeit (FWM);
- Kwetsbaar zonder multimorbiditeit (FWoM).
Elk individu zal een beoordeling ondergaan van het fenotype van kwetsbaarheid en multimorbiditeit, en er zullen bloedmonsters worden verzameld om mononucleaire cellen uit perifeer bloed (PBMC's) te isoleren. De identificatie van kwetsbaarheidsbiomarkers in elke groep deelnemers zal worden uitgevoerd door het combineren van niet-gerichte, op metabolomics gebaseerde benaderingen en functionele studies naar specifieke mitochondriale disfuncties uitgevoerd op PBMC's en hun subpopulaties. Multivariate statistische en machinale leertechnieken zullen de drie klinische fenotypegroepen karakteriseren op basis van moleculaire gegevens.
Studie Overzicht
Toestand
Gedetailleerde beschrijving
Studietype: observationeel prospectief onderzoek. Primair doel: het evalueren van de aanwezigheid van mitochondriale disfunctie gerelateerd aan oxidatieve stress en de mogelijke rol ervan bij kwetsbaarheid, met en zonder multimorbiditeit.
Primair eindpunt: mitochondriale dysfunctie bij kwetsbaarheid. Secundaire doelstellingen: het combineren van ongerichte, op metabolomics gebaseerde benaderingen en functionele onderzoeken naar specifieke mitochondriale disfuncties uitgevoerd op PBMC's en PBMC-subpopulaties (B-lymfocyten, T-lymfocyten en monocyten).
De onderzoeksactiviteiten zijn georganiseerd in de volgende taken:
- Taak 1, Patiënteninschrijving: We schrijven personen in van 65 jaar of ouder uit de geriatrische poliklinieken of geriatrische afdelingen. Voor elk individu zullen we een beoordeling van kwetsbaarheid en multimorbiditeit uitvoeren en bloedmonsters verzamelen om perifere bloed-mononucleaire cellen (PBMC's) te isoleren. Er worden drie categorieën personen ingeschreven: 25 niet-kwetsbare personen zonder multimorbiditeit (NFWoM), 25 kwetsbare personen met multimorbiditeit (FWM) en 25 kwetsbare personen zonder multimorbiditeit (FWoM).
- Taak 2, Scheiding van PBMC-subpopulaties: T-lymfocyten, B-lymfocyten en monocyten zullen worden gescheiden van bevroren PBMC's met behulp van de Cell Sorting Facility for Fluorescentie-Activated Cell Sorting (FACS)-scheiding en de MoFlo Astrios-celsorteerder. De analyses van CD45+/CD3+/CD19-/CD14- T-lymfocyten, CD45+/CD3-/CD19+/CD14-B-lymfocyten, CD45+/CD3-/CD19-/CD14+ monocyten.
- Taak 3, Analyse van mitochondriale disfunctie op PBMC's en PBMC-subpopulaties: Voor elk individu zal de mitochondriale disfunctie worden geëvalueerd door het analyseren van mtDNA-schade (door real-time PCR), mitochondriale massaverandering (door Mitotracker-kleuring) en intracellulaire en mitochondriale reactieve zuurstofsoorten. door DCF- en MitoSOX-kleuring). Bovendien zullen we de verandering van het glycolytische en mitochondriale metabolisme evalueren met behulp van Agilent Seahorse Extracellulaire Flux Analyzer XFe96.
- Taak 4, Ongerichte metabolomics op PBMCs en PBMC-subpopulaties: Om de metabole signatuur van PBMCs en subpopulaties te beoordelen en metabole ontregelingen die verband houden met kwetsbaarheid te benadrukken, zullen we ongerichte LC-MS-gebaseerde metabolomics uitvoeren op PBMCs, T-lymfocyten, B-lymfocyten en monocyten. De analyse van het polaire metaboloom zal ons in staat stellen de metabolische veranderingen die verband houden met mitochondriale ontregeling beter te begrijpen.
- Taak 5, Karakterisering van biomarkers en moleculair mechanisme van kwetsbaarheid: De potentiële biomarkers van kwetsbaarheid en de moleculaire mechanismen die betrokken zijn bij mitochondriale disfunctie zullen worden bestudeerd met behulp van statistische en machinale leertechnieken op moleculaire, metabolische en klinische gegevens. Deze stap zal helpen klinische fenotypes te karakteriseren op basis van moleculaire metingen.
Studietype
Inschrijving (Geschat)
Contacten en locaties
Studiecontact
- Naam: Caterina Trevisan, PhD
- Telefoonnummer: 00393896743650
- E-mail: caterina.trevisan@unife.it
Deelname Criteria
Geschiktheidscriteria
Leeftijden die in aanmerking komen voor studie
- Oudere volwassene
Accepteert gezonde vrijwilligers
Bemonsteringsmethode
Studie Bevolking
Beschrijving
Inclusiecriteria:
- Leeftijd ≥ 65 jaar
- Stabiele klinische omstandigheden
- Bereidheid om deel te nemen aan het onderzoek (verstrekking van geïnformeerde toestemming)
- Vaardigheid in de Italiaanse taal
Uitsluitingscriteria:
- Acute of onstabiele klinische omstandigheden
Studie plan
Hoe is de studie opgezet?
Ontwerpdetails
Cohorten en interventies
Groep / Cohort |
|---|
|
Niet-kwetsbaar zonder multimorbiditeit (NFWoM)
Personen van 65 jaar of ouder zonder kwetsbaarheid en zonder multimorbiditeit.
Deze groep zal als referentie dienen voor deelnemers die niet kwetsbaar zijn en niet meerdere chronische aandoeningen hebben.
|
|
Kwetsbaar met multimorbiditeit (FWM)
Kwetsbare personen van 65 jaar of ouder met multimorbiditeit.
Tot deze groep behoren deelnemers die kwetsbaar zijn en twee of meer chronische ziekten hebben.
|
|
Kwetsbaar zonder multimorbiditeit (FWoM)
Kwetsbare personen van 65 jaar of ouder zonder multimorbiditeit.
Deze groep zal helpen bij het beoordelen van kwetsbaarheid bij afwezigheid van meerdere chronische aandoeningen.
|
Wat meet het onderzoek?
Primaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Verschil in het aantal mtDNA-kopieën tussen kwetsbare individuen met versus zonder multimorbiditeit
Tijdsspanne: Basislijn
|
mtDNA-kopieën geïsoleerd uit totale PBMC's en uit T- en B-lymfocyten en monocyten, verkregen van de deelnemers, met JetQuick™ Blood and Cell Culture DNA Midiprep Kit (Invitrogen), en 10 ng DNA zullen worden gebruikt voor analyse op QuantumStudio 7 Real Time PCR (Toegepaste biosystemen). Het aantal mtDNA-kopieën zal worden berekend door de niveaus van het mitochondriale ND1-gen (mtND1) te normaliseren naar niveaus van nucleaire bèta-2-microglobuline (B2M). Het aantal mtDNA-kopieën zal worden vergeleken tussen individuen met kwetsbaarheid en multimorbiditeit versus individuen met kwetsbaarheid zonder multimorbiditeit. Kwetsbaarheid zal worden afgeleid op basis van de aanwezigheid van ten minste drie criteria: onvrijwillig gewichtsverlies ≥ 4,5 kg, spierzwakte gemeten aan de hand van een handgreep, zelfgerapporteerde vermoeidheid op ≥ 3 dagen per week, lage lichamelijke activiteit (beoordeeld met de IPAQ-vragenlijst), en verminderde loopsnelheid (gemeten met de 4-m-looptest). Multimorbiditeit wordt gedefinieerd als de aanwezigheid van ten minste twee chronische ziekten. |
Basislijn
|
|
Verschil in het aantal mtDNA-kopieën tussen niet-kwetsbare versus kwetsbare individuen zonder multimorbiditeit
Tijdsspanne: Basislijn
|
mtDNA-kopieën geïsoleerd uit totale PBMC's en uit T- en B-lymfocyten en monocyten, verkregen van de deelnemers, met JetQuick™ Blood and Cell Culture DNA Midiprep Kit (Invitrogen), en 10 ng DNA zullen worden gebruikt voor analyse op QuantumStudio 7 Real Time PCR (Toegepaste biosystemen). Het aantal mtDNA-kopieën zal worden berekend door de niveaus van het mitochondriale ND1-gen (mtND1) te normaliseren naar niveaus van nucleaire bèta-2-microglobuline (B2M). Het aantal mtDNA-kopieën zal worden vergeleken tussen individuen met kwetsbaarheid en multimorbiditeit versus individuen met kwetsbaarheid zonder multimorbiditeit. Kwetsbaarheid zal worden afgeleid op basis van de aanwezigheid van ten minste drie criteria: onvrijwillig gewichtsverlies ≥ 4,5 kg, spierzwakte gemeten aan de hand van een handgreep, zelfgerapporteerde vermoeidheid op ≥ 3 dagen per week, lage lichamelijke activiteit (beoordeeld met de IPAQ-vragenlijst), en verminderde loopsnelheid (gemeten met de 4-m-looptest). Multimorbiditeit wordt gedefinieerd als de aanwezigheid van ten minste twee chronische ziekten. |
Basislijn
|
Secundaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Variatie in de gemiddelde intensiteit van mitochondriale fluorescentie tussen niet-kwetsbare versus kwetsbare individuen zonder multimorbiditeit
Tijdsspanne: Basislijn
|
500.000 PBMC's verkregen van de studiedeelnemers zullen worden gekleurd met CD45-, CD3-, CD19- en CD14-antilichamen en gedurende 30 minuten bij 30°C worden geïncubeerd met 100 nM Mitotracker Deep Red (Thermo Fisher Scientific).
Cellen zullen ook worden gelabeld met Live/Dead-kleurstof en worden geanalyseerd door flowcytometrie met de MoFLO Astrios-celsorteerder.
Mitochondriale massa, geëvalueerd als de mediane fluorescentie-intensiteit (MFI) van Mitotracker Deep Red, zal worden beoordeeld in totale PBMC's, T- en B-lymfocyten en monocyten.
Er zullen 40.000 gebeurtenissen in elke populatiepoort worden verzameld en offline analyses zullen worden uitgevoerd met Kaluza-software.
|
Basislijn
|
|
Variatie in de gemiddelde intensiteit van mitochondriale fluorescentie tussen kwetsbare individuen met versus zonder multimorbiditeit
Tijdsspanne: Basislijn
|
500.000 PBMC's verkregen van de studiedeelnemers zullen worden gekleurd met CD45-, CD3-, CD19- en CD14-antilichamen en gedurende 30 minuten bij 30°C worden geïncubeerd met 100 nM Mitotracker Deep Red (Thermo Fisher Scientific).
Cellen zullen ook worden gelabeld met Live/Dead-kleurstof en worden geanalyseerd door flowcytometrie met de MoFLO Astrios-celsorteerder.
Mitochondriale massa, geëvalueerd als de mediane fluorescentie-intensiteit (MFI) van Mitotracker Deep Red, zal worden beoordeeld in totale PBMC's, T- en B-lymfocyten en monocyten.
Er zullen 40.000 gebeurtenissen in elke populatiepoort worden verzameld en offline analyses zullen worden uitgevoerd met Kaluza-software.
|
Basislijn
|
|
Verschil tussen intracellulaire reactieve zuurstofsoorten (ROS) tussen niet-kwetsbare versus kwetsbare individuen zonder multimorbiditeit
Tijdsspanne: Basislijn
|
De fluorescerende celpermeabele indicator 2',7'-dichloorfluorescinediacetaat (DCFH-DA) zal gebruikt worden voor het detecteren van intracellulaire ROS.
DCFH-DA wordt door cellulaire esterasen gedeacetyleerd tot een niet-fluorescerende verbinding, die later door ROS wordt geoxideerd tot fluorescerend 2',7'-dichloorfluoresceïne (DCF).
De intensiteit van het gegenereerde fluorescentiesignaal correleert met het intracellulaire niveau van ROS.
500.000 PBMC's verkregen van 25 NFWoM-, 25 FWM- en 25 FWoM-proefpersonen zullen worden gekleurd met CD45-, CD3-, CD19- en CD14-antilichamen en gedurende 30 minuten bij 37 ° C geïncubeerd met 10 μM 2',7'-dichloorfluorescinediacetaat (DCFH-DA) .
Cellen zullen ook worden gelabeld met Live/Dead-kleurstof en worden geanalyseerd met behulp van flowcytometrie.
Intracellulaire ROS, geëvalueerd als de mediane fluorescentie-intensiteit (MFI) van DCF, zal worden beoordeeld in totale PBMC's, T- en B-lymfocyten en monocyten.
Er zullen 40.000 gebeurtenissen in elke populatiepoort worden verzameld en offline analyses zullen worden uitgevoerd met Kaluza-software.
|
Basislijn
|
|
Verschil tussen intracellulaire reactieve zuurstofsoorten (ROS) tussen kwetsbare individuen met versus zonder multimorbiditeit
Tijdsspanne: Basislijn
|
De fluorescerende celpermeabele indicator 2',7'-dichloorfluorescinediacetaat (DCFH-DA) zal gebruikt worden voor het detecteren van intracellulaire ROS.
DCFH-DA wordt door cellulaire esterasen gedeacetyleerd tot een niet-fluorescerende verbinding, die later door ROS wordt geoxideerd tot fluorescerend 2',7'-dichloorfluoresceïne (DCF).
De intensiteit van het gegenereerde fluorescentiesignaal correleert met het intracellulaire niveau van ROS.
500.000 PBMC's verkregen van 25 NFWoM-, 25 FWM- en 25 FWoM-proefpersonen zullen worden gekleurd met CD45-, CD3-, CD19- en CD14-antilichamen en gedurende 30 minuten bij 37 ° C geïncubeerd met 10 μM 2',7'-dichloorfluorescinediacetaat (DCFH-DA) .
Cellen zullen ook worden gelabeld met Live/Dead-kleurstof en worden geanalyseerd met behulp van flowcytometrie.
Intracellulaire ROS, geëvalueerd als de mediane fluorescentie-intensiteit (MFI) van DCF, zal worden beoordeeld in totale PBMC's, T- en B-lymfocyten en monocyten.
Er zullen 40.000 gebeurtenissen in elke populatiepoort worden verzameld en offline analyses zullen worden uitgevoerd met Kaluza-software.
|
Basislijn
|
|
Kwalitatief verschil in metabolomicsprofielen van PBMC’s en PBMC-subpopulaties tussen niet-kwetsbare versus kwetsbare individuen zonder multimorbiditeit
Tijdsspanne: Basislijn
|
Ongerichte, op LC-MS gebaseerde metabolomics zullen worden uitgevoerd op PBMCs en op T- en B-lymfocyten en monocyten, verkregen zoals beschreven in Taak 2. Celmonsters zullen worden geblust met behulp van koude methanol.
Na eiwitprecipitatie worden de metabolieten geëxtraheerd en geanalyseerd door middel van vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS).
Hydrofiele interactiechromatografie (HILIC) zal worden gebruikt om het polaire metaboloom op te lossen vóór MS-detectie met behulp van een Agilent 6546 lc/q-tof-instrument (Agilent). Het gehele eiwitgehalte zal worden gekwantificeerd met NanoDrop™ (Thermofisher) en gebruikt om de metabolische eigenschappen te normaliseren. profiel van elk monster.
|
Basislijn
|
|
Kwalitatief verschil in metabolomicsprofielen van PBMC's en PBMC-subpopulaties tussen kwetsbare individuen met versus zonder multimorbiditeit
Tijdsspanne: Basislijn
|
Ongerichte, op LC-MS gebaseerde metabolomics zullen worden uitgevoerd op PBMC's en op T- en B-lymfocyten en monocyten, verkregen zoals beschreven in Taak 2. Celmonsters zullen worden geblust met behulp van koude methanol.
Na eiwitprecipitatie worden de metabolieten geëxtraheerd en geanalyseerd door middel van vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS).
Hydrofiele interactiechromatografie (HILIC) zal worden gebruikt om het polaire metaboloom op te lossen vóór MS-detectie met behulp van een Agilent 6546 lc/q-tof-instrument (Agilent). Het gehele eiwitgehalte zal worden gekwantificeerd met NanoDrop™ (Thermofisher) en gebruikt om de metabolische eigenschappen te normaliseren. profiel van elk monster.
|
Basislijn
|
Medewerkers en onderzoekers
Sponsor
Medewerkers
Onderzoekers
- Hoofdonderzoeker: Caterina Trevisan, PhD, Università degli Studi di Ferrara
Studie record data
Bestudeer belangrijke data
Studie start (Geschat)
Primaire voltooiing (Geschat)
Studie voltooiing (Geschat)
Studieregistratiedata
Eerst ingediend
Eerst ingediend dat voldeed aan de QC-criteria
Eerst geplaatst (Werkelijk)
Updates van studierecords
Laatste update geplaatst (Werkelijk)
Laatste update ingediend die voldeed aan QC-criteria
Laatst geverifieerd
Meer informatie
Termen gerelateerd aan deze studie
Trefwoorden
Aanvullende relevante MeSH-voorwaarden
Andere studie-ID-nummers
- 653/2023/Oss/AOUFe
Informatie over medicijnen en apparaten, studiedocumenten
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd geneesmiddel
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd apparaatproduct
Deze informatie is zonder wijzigingen rechtstreeks van de website clinicaltrials.gov gehaald. Als u verzoeken heeft om uw onderzoeksgegevens te wijzigen, te verwijderen of bij te werken, neem dan contact op met register@clinicaltrials.gov. Zodra er een wijziging wordt doorgevoerd op clinicaltrials.gov, wordt deze ook automatisch bijgewerkt op onze website .