허약함의 바이오마커로서의 대사 조절 장애: 미토콘드리아 기능 장애의 역할 (FRAMITO)
이 관찰 연구의 목표는 산화 스트레스와 관련된 미토콘드리아 기능 장애의 존재와 복합상병 유무에 관계없이 노쇠에서 이것이 할 수 있는 역할을 평가하고 미토콘드리아 기능 장애와 상관관계가 있는 가능한 노쇠 바이오마커를 식별하는 것입니다. 답변하려는 주요 질문은 다음과 같습니다.
- 복합상병과의 상호작용을 고려할 때 노쇠에서 산화 스트레스 관련 미토콘드리아 기능 장애의 역할은 무엇입니까?
- 노쇠 평가에서 미토콘드리아 기능 장애와 관련된 특정 바이오마커는 무엇입니까?
연구 목표를 달성하기 위해 우리는 세 가지 범주의 노인을 등록할 것입니다.
- 복합상병이 없는 비연약함(NFWoM);
- 복합상병을 동반한 허약함(FWM);
- 복합상병(FWoM)이 없는 허약함.
각 개인은 허약한 표현형과 복합질환에 대한 평가를 받고 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 분리하기 위한 혈액 샘플 수집을 받게 됩니다. 각 참가자 그룹의 취약한 바이오마커 식별은 비표적 대사체학 기반 접근법과 PBMC 및 그 하위 집단에서 수행되는 특정 미토콘드리아 기능 장애에 대한 기능적 연구를 결합하여 수행됩니다. 다변량 통계 및 기계 학습 기술은 분자 데이터를 기반으로 세 가지 임상 표현형 그룹을 특성화합니다.
연구 개요
상태
정황
상세 설명
연구 유형: 관찰적 전향적 연구. 일차 목표: 산화 스트레스와 관련된 미토콘드리아 기능 장애의 존재와 복합질환 유무에 관계없이 노쇠에 대한 미토콘드리아 기능 장애의 가능한 역할을 평가하는 것입니다.
1차 평가변수: 허약한 미토콘드리아 기능 장애. 2차 목표: PBMC 및 PBMC 하위 집단(B 림프구, T 림프구 및 단핵구)에서 수행되는 특정 미토콘드리아 기능 장애에 대한 비표적 대사체 기반 접근 방식과 기능적 연구를 결합하는 것입니다.
연구 활동은 다음과 같은 업무로 구성됩니다.
- 작업 1, 환자 등록: 노인 외래 진료소 또는 노인 병동에서 65세 이상의 개인을 등록합니다. 각 개인에 대해 허약함과 복합 질병에 대한 평가를 수행하고 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 분리하기 위해 혈액 샘플을 수집합니다. 세 가지 범주의 개인이 등록됩니다: 복합 질병이 없는 허약하지 않은 개인 25명(NFWoM), 복합 질병이 있는 허약한 개인 25명(FWM), 복합 질병이 없는 허약한 개인 25명(FWoM).
- 작업 2, PBMC 하위 집단 분리: T 림프구, B 림프구 및 단핵구는 FACS(형광 활성화 세포 분류용 세포 분류 시설) 및 MoFlo Astrios 세포 분류기를 사용하여 냉동 PBMC에서 분리됩니다. CD45+/CD3+/CD19-/CD14- T 림프구, CD45+/CD3-/CD19+/CD14- B 림프구, CD45+/CD3-/CD19-/CD14+ 단핵구에 대한 분석.
- 작업 3, PBMC 및 PBMC 하위 집단에 대한 미토콘드리아 기능 장애 분석: 각 개인에 대해 미토콘드리아 기능 장애는 mtDNA 손상(Real-Time PCR에 의해), 미토콘드리아 질량 변화(Mitotracker 염색에 의해) 및 세포내 및 미토콘드리아 반응성 산소 종( DCF 및 MitoSOX 염색으로). 또한 Agilent Seahorse 세포외 플럭스 분석기 XFe96을 사용하여 해당과정 및 미토콘드리아 대사의 변화를 평가할 것입니다.
- 작업 4, PBMC 및 PBMC 하위 모집단에 대한 비표적 대사체학: PBMC 및 하위 모집단의 대사 특징을 평가하고 허약함과 관련된 대사 조절 장애를 강조하기 위해 PBMC, T 림프구, B 림프구 및 단핵구에 대한 비표적 LC-MS 기반 대사체학을 수행합니다. 극성 대사체에 대한 분석을 통해 우리는 미토콘드리아 조절 장애와 관련된 대사 변화를 더 잘 이해할 수 있습니다.
- 과제 5, 노쇠의 바이오마커 및 분자 메커니즘의 특성화: 노쇠의 잠재적인 바이오마커와 미토콘드리아 기능 장애와 관련된 분자 메커니즘은 분자, 대사 및 임상 데이터에 대한 통계 및 기계 학습 기술을 사용하여 연구됩니다. 이 단계는 분자 측정을 기반으로 임상 표현형을 특성화하는 데 도움이 됩니다.
연구 유형
등록 (추정된)
연락처 및 위치
연구 연락처
- 이름: Caterina Trevisan, PhD
- 전화번호: 00393896743650
- 이메일: caterina.trevisan@unife.it
참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
- 고령자
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
샘플링 방법
연구 인구
설명
포함 기준:
- 연령 ≥ 65세
- 안정적인 임상 조건
- 연구에 참여하려는 의지(사전 동의 제공)
- 이탈리아어 구사력
제외 기준:
- 급성 또는 불안정한 임상 상태
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
코호트 및 개입
그룹/코호트 |
|---|
|
복합상병이 없는 비연약함(NFWoM)
노쇠 및 복합상병이 없는 65세 이상의 개인.
이 그룹은 허약하지 않고 복합적인 만성 질환을 앓고 있지 않은 참가자들에게 참고 자료 역할을 할 것입니다.
|
|
복합상병을 동반한 허약함(FWM)
복합상병을 앓고 있는 65세 이상의 허약한 개인.
이 그룹에는 허약함을 보이고 두 가지 이상의 만성 질환을 앓고 있는 참가자가 포함됩니다.
|
|
복합상병 없는 허약함(FWoM)
복합상병이 없는 65세 이상의 허약한 개인.
이 그룹은 복합 만성 질환이 없을 때 노쇠도를 평가하는 데 도움이 됩니다.
|
연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
|---|---|---|
|
복합 질병이 있는 사람과 없는 사람 사이의 mtDNA 사본 수의 차이
기간: 기준선
|
JetQuick™ 혈액 및 세포 배양 DNA Midiprep 키트(Invitrogen)를 사용하여 참가자로부터 얻은 전체 PBMC와 T 및 B 림프구 및 단핵구에서 분리된 mtDNA 복사본과 10ng의 DNA가 QuantumStudio 7 Real Time PCR 분석에 사용됩니다. (어플리케이션 바이오시스템즈). mtDNA 사본 수는 미토콘드리아 ND1 유전자(mtND1) 수준을 핵 베타-2 마이크로글로불린(B2M) 수준으로 정규화하여 계산됩니다. mtDNA 사본의 수는 노쇠 및 복합상병이 있는 개인과 복합상병이 없는 노쇠가 있는 개인 간에 비교됩니다. 허약함은 비자발적 체중 감소 ≥ 4.5kg, 손잡이로 측정한 근육 약화, 주당 3일 이상 자가 보고된 피로, 낮은 신체 활동(IPAQ 설문지로 평가), 보행 속도 감소(4m 걷기 테스트로 측정). 복합상병은 적어도 두 가지 만성 질환이 존재하는 것으로 정의됩니다. |
기준선
|
|
복합상병이 없는 일반 개인과 허약한 개인 간의 mtDNA 사본 수의 차이
기간: 기준선
|
JetQuick™ 혈액 및 세포 배양 DNA Midiprep 키트(Invitrogen)를 사용하여 참가자로부터 얻은 전체 PBMC와 T 및 B 림프구 및 단핵구에서 분리된 mtDNA 복사본과 10ng의 DNA가 QuantumStudio 7 Real Time PCR 분석에 사용됩니다. (어플리케이션 바이오시스템즈). mtDNA 사본 수는 미토콘드리아 ND1 유전자(mtND1) 수준을 핵 베타-2 마이크로글로불린(B2M) 수준으로 정규화하여 계산됩니다. mtDNA 사본의 수는 노쇠 및 복합상병이 있는 개인과 복합상병이 없는 노쇠가 있는 개인 간에 비교됩니다. 허약함은 비자발적 체중 감소 ≥ 4.5kg, 손잡이로 측정한 근육 약화, 주당 3일 이상 자가 보고된 피로, 낮은 신체 활동(IPAQ 설문지로 평가), 보행 속도 감소(4m 걷기 테스트로 측정). 복합상병은 적어도 두 가지 만성 질환이 존재하는 것으로 정의됩니다. |
기준선
|
2차 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
|---|---|---|
|
다중 질병이 없는 비약한 개인과 허약한 개체 사이의 미토콘드리아 형광의 평균 강도 변화
기간: 기준선
|
연구 참가자로부터 얻은 500,000개의 PBMC를 CD45, CD3, CD19 및 CD14 항체로 염색하고 100nM Mitotracker Deep Red(Thermo Fisher Scientific)와 함께 30°C에서 30분간 배양합니다.
세포는 또한 Live/Dead 염료로 라벨링되고 MoFLO Astrios 세포 분류기를 사용하여 유세포 분석으로 분석됩니다.
Mitotracker Deep Red의 중간 형광 강도(MFI)로 평가된 미토콘드리아 덩어리는 전체 PBMC, T 및 B 림프구 및 단핵구에서 평가됩니다.
각 인구 게이트에서 40,000개의 이벤트를 수집하고 Kaluza 소프트웨어를 사용하여 오프라인 분석을 수행합니다.
|
기준선
|
|
복합 질병이 있는 사람과 없는 사람 사이의 미토콘드리아 형광의 평균 강도 변화
기간: 기준선
|
연구 참가자로부터 얻은 500,000개의 PBMC를 CD45, CD3, CD19 및 CD14 항체로 염색하고 100nM Mitotracker Deep Red(Thermo Fisher Scientific)와 함께 30°C에서 30분간 배양합니다.
세포는 또한 Live/Dead 염료로 라벨링되고 MoFLO Astrios 세포 분류기를 사용하여 유세포 분석으로 분석됩니다.
Mitotracker Deep Red의 중간 형광 강도(MFI)로 평가된 미토콘드리아 덩어리는 전체 PBMC, T 및 B 림프구 및 단핵구에서 평가됩니다.
각 인구 게이트에서 40,000개의 이벤트를 수집하고 Kaluza 소프트웨어를 사용하여 오프라인 분석을 수행합니다.
|
기준선
|
|
복합질환이 없는 정상인과 허약한 개인 사이의 세포내 반응성 산소종(ROS)의 차이
기간: 기준선
|
형광 세포 투과성 지표인 2',7'-디클로로플루오레신 디아세테이트(DCFH-DA)는 세포 내 ROS를 검출하는 데 사용됩니다.
DCFH-DA는 세포 에스테라제에 의해 비형광 화합물로 탈아세틸화되고, 이는 나중에 ROS에 의해 형광성 2',7'-디클로로플루오레세인(DCF)으로 산화됩니다.
생성된 형광 신호의 강도는 ROS의 세포내 수준과 상관관계가 있습니다.
25명의 NFWoM, 25명의 FWM 및 25명의 FWoM 대상자로부터 얻은 500,000개의 PBMC를 CD45, CD3, CD19 및 CD14 항체로 염색하고 10μM 2',7'-디클로로플루오레신 디아세테이트(DCFH-DA)와 함께 37°C에서 30분 동안 배양합니다. .
세포는 또한 Live/Dead 염료로 라벨링되고 유세포 분석으로 분석됩니다.
DCF의 중간 형광 강도(MFI)로 평가되는 세포내 ROS는 전체 PBMC, T 및 B 림프구 및 단핵구에서 평가됩니다.
각 인구 게이트에서 40,000개의 이벤트를 수집하고 Kaluza 소프트웨어를 사용하여 오프라인 분석을 수행합니다.
|
기준선
|
|
복합질환이 있는 허약한 개인과 복합질환이 없는 개인 간의 세포 내 반응성 산소종(ROS)의 차이
기간: 기준선
|
형광 세포 투과성 지표인 2',7'-디클로로플루오레신 디아세테이트(DCFH-DA)는 세포 내 ROS를 검출하는 데 사용됩니다.
DCFH-DA는 세포 에스테라제에 의해 비형광 화합물로 탈아세틸화되고, 이는 나중에 ROS에 의해 형광성 2',7'-디클로로플루오레세인(DCF)으로 산화됩니다.
생성된 형광 신호의 강도는 ROS의 세포내 수준과 상관관계가 있습니다.
25명의 NFWoM, 25명의 FWM 및 25명의 FWoM 대상자로부터 얻은 500,000개의 PBMC를 CD45, CD3, CD19 및 CD14 항체로 염색하고 10μM 2',7'-디클로로플루오레신 디아세테이트(DCFH-DA)와 함께 37°C에서 30분 동안 배양합니다. .
세포는 또한 Live/Dead 염료로 라벨링되고 유세포 분석으로 분석됩니다.
DCF의 중간 형광 강도(MFI)로 평가되는 세포내 ROS는 전체 PBMC, T 및 B 림프구 및 단핵구에서 평가됩니다.
각 인구 게이트에서 40,000개의 이벤트를 수집하고 Kaluza 소프트웨어를 사용하여 오프라인 분석을 수행합니다.
|
기준선
|
|
복합상병이 없는 비약함 개체와 허약 개체 간의 PBMC 및 PBMC 하위 모집단의 대사체학 프로파일의 질적 차이
기간: 기준선
|
비표적 LC-MS 기반 대사체학은 작업 2에 설명된 대로 얻은 PBMC와 T 및 B 림프구 및 단핵구에서 수행됩니다. 세포 샘플은 차가운 메탄올을 사용하여 켄칭됩니다.
단백질 침전 후 대사산물을 추출하고 액체 크로마토그래피 질량 분석법(LC-MS)으로 분석합니다.
친수성 상호작용 크로마토그래피(HILIC)는 Agilent 6546 lc/q-tof 기기(Agilent)를 사용하여 MS 검출 전에 극성 대사체를 분리하는 데 사용됩니다. 전체 단백질 함량은 NanoDrop™(Thermofisher)으로 정량화되고 대사를 표준화하는 데 사용됩니다. 각 샘플의 프로필.
|
기준선
|
|
복합상병이 있는 환자와 없는 환자 사이의 PBMC 및 PBMC 하위 모집단의 대사체학 프로파일의 질적 차이
기간: 기준선
|
비표적 LC-MS 기반 대사체학은 작업 2에 설명된 대로 얻은 PBMC와 T 및 B 림프구 및 단핵구에서 수행됩니다. 세포 샘플은 차가운 메탄올을 사용하여 켄칭됩니다.
단백질 침전 후 대사산물을 추출하고 액체 크로마토그래피 질량 분석법(LC-MS)으로 분석합니다.
친수성 상호작용 크로마토그래피(HILIC)는 Agilent 6546 lc/q-tof 기기(Agilent)를 사용하여 MS 검출 전에 극성 대사체를 분리하는 데 사용됩니다. 전체 단백질 함량은 NanoDrop™(Thermofisher)으로 정량화되고 대사를 표준화하는 데 사용됩니다. 각 샘플의 프로필.
|
기준선
|
공동 작업자 및 조사자
수사관
- 수석 연구원: Caterina Trevisan, PhD, Università degli Studi di Ferrara
연구 기록 날짜
연구 주요 날짜
연구 시작 (추정된)
기본 완료 (추정된)
연구 완료 (추정된)
연구 등록 날짜
최초 제출
QC 기준을 충족하는 최초 제출
처음 게시됨 (실제)
연구 기록 업데이트
마지막 업데이트 게시됨 (실제)
QC 기준을 충족하는 마지막 업데이트 제출
마지막으로 확인됨
추가 정보
이 정보는 변경 없이 clinicaltrials.gov 웹사이트에서 직접 가져온 것입니다. 귀하의 연구 세부 정보를 변경, 제거 또는 업데이트하도록 요청하는 경우 register@clinicaltrials.gov. 문의하십시오. 변경 사항이 clinicaltrials.gov에 구현되는 즉시 저희 웹사이트에도 자동으로 업데이트됩니다. .