バイオマーカーと機能画像による転帰の予測と個別化された放射線治療

これは、組織（末梢血）に関する単一中心の探索的実験研究であるため、限られた数の患者の登録が計画されています。 研究から得られた結果は決定的であると考えられるべきではなく、むしろより大きな集団に対して行われる可能性のあるその後の研究のための研究仮説の生成物として考えられるべきです。 小胞の定性的および定量的特性とその miRNA 含有量が記述的に分析されます。

CD69+小胞の値が 349 絶対単位を超えて、少なくとも 80% の患者における放射線療法に対する反応が正確に予測される場合、主要な目的は達成されたと見なされます。 その後、研究者らは、CD86+ 小胞 > 10 絶対単位および CD3+ > 4 絶対単位が、少なくとも 80% の症例における放射線療法に対する反応を正確に予測するかどうかを検証することを目的としています。 さらに、示された 3 つの小胞の値 (元の値と、我々の研究グループの予備結果から得られた、指定されたカットオフを上回るか下回るように二分化した値の両方) と 2 年時点での疾患再発までの期間との関連性がテストされます。

患者は、医師の判断および臨床実践に従って投与される併用療法の個々の製品の技術データシートに記載されている情報に従って、臨床実践に従って治療されます。 患者の診断と治療の経路は、研究のために実施された組織検査の結果によっていかなる影響も受けません。

TC-PET検査は、通常の診断・治療プロセスの一環として、ボローニャのIRCCS大学病院の核医学部門で実施される。 分子研究は、ボローニャの IRCCS 大学病院、S. Orsola Polyclinic に付属する免疫遺伝学および移植生物学ユニット (IBT) の研究室で行われます。 この研究は、1年以内に局所進行性直腸腫瘍に対して術前補助RTを受ける患者を対象としている。 研究は2023年5月1日に開始される予定だが、いずれの場合も倫理委員会の承認とその後の会社の認可の解除後にのみ開始される。

患者は、特定の研究分析に必要なサンプリングの前に、ボローニャの IRCCS 大学病院の放射線治療部門での初回訪問時に登録されます。 DNA およびエピジェネティックな変化 (メチル化および miRNA 発現) の全体的な定量化に関する研究には、ゲノム配列決定が含まれないことに注意してください。 DNA 分子は、個々の特異性を考慮せずに検査されます。したがって、検査後もその人の遺伝コードは不明のままです。 各患者から EDTA を含むバキュテナーを使用して 10 ml の静脈血サンプルが収集され、各実験ポイントで血漿が収集されます。 生体サンプルは仮名化され、進行番号 RT/NEO/00N が付けられます。 すべてのサンプルは、使用するまで、IBT 研究室にある鍵付き冷凍庫内の特別にマークされた RT コンテナに保管されます。 輸送はプロジェクト関係者が密閉・温度管理された専用コンテナを用いて行われます。

患者ごとに 3 つのサンプルが分析されます: 1 番目のサンプル: RT 開始の 1 ～ 5 日前、2 番目のサンプル: RT の 3 週目の終わり、3 番目のサンプル: RT の最終日。 したがって、合計 90 個のサンプルが分析されることが予想されます。

ナノ小胞の分離: 血漿サンプルは、滅菌および緩衝化された CL-B4 樹脂を使用したカラムゲル限外濾過によって細胞外小胞を分離するために処理されます。 次いで、ナノベシクルは、Miltenyi MACSPEX キットを使用して表現型分析のために処理され、Nucleo Spin Tissue キット (Macherey Nagel、M-Medical、ミラノ、イタリア) を使用して DNA/RNA 抽出のために処理されます。 この手順は、ボローニャの IRCCS 大学病院の IBT 研究室で行われます。

エピジェネティック分析:

• マイクロ RNA 分析 細胞外小胞から抽出された RNA サンプルは、IBT 研究室でドロップレット デジタル PCR を使用してマイクロ RNA 含有量が分析されます。
• メチル化分析 有核血球の DNA メチル化プロファイル分析は、ボローニャの IRCCS 大学病院の IBT 研究室で Sequenom プラットフォームと EpiTyper プロトコル (Sequenom) で実行される質量分析を使用して行われます。 すべての統計分析は IBT ユニットで実行されます。

診察、評価、全身的および局所的治療は臨床実践に従って行われ、この研究のために変更されることはありません。 特定の研究分析に必要な末梢血のアリコートは、同じ静脈アクセスを使用して、患者の治療および追跡調査中に採取される日常的なサンプルに加えて収集されます。 具体的には、サンプルは放射線療法の開始時、開始から 3 週間後、および通常の臨床診療で予定されている検査および訪問の範囲内で終了時に採取されます。

最初の訪問中に、臨床実践に従って、患者の臨床病歴（腫瘍学的病歴、遠隔病理学的病歴、薬理学的病歴、家族歴）に関連する情報が収集されます。 一般的な身体検査が行われ、放射線治療の計画が立てられます。 PROPER 研究に対する患者の適格性が評価され、肯定的であればインフォームドコンセントが得られます。

分析方法:

患者の人口統計学的特徴と臨床的特徴は、中央値と四分位範囲 (連続変数の場合)、および絶対頻度とパーセント (カテゴリ変数の場合) を使用して説明されます。

小胞の予測能力の評価は、事前定義されたカットオフ (CD69+ > 349 絶対単位、CD86+ > 10 絶対単位、CD3+ > 4 絶対単位) の感度および特異性分析を通じて実行され、すべてが陽性的中率 ( PPV) > 80%。 小胞の元の値を使用した ROC 分析も、結果に関してより適切に識別できる代替カットオフ値を特定するために実行されます。

治療開始から 2 年後の無病生存率の分析は、カプラン マイヤー曲線とログランク検定を使用して記述的に行われます。 致命的な合併症により死亡した患者は死亡日に検閲される。 研究対象集団の規模が小さいことを考慮すると、イベント（病気の再発）の数が適切であれば、最大 1 つの交絡因子とともに、リスク因子として小胞カットオフを超えたかどうかの指標を含むコックス回帰を実行できます。分析のために。