바이오마커와 기능적 영상화를 통한 결과 예측 및 개인화된 방사선치료

이는 조직(말초 혈액)에 대한 단일 중심적 탐색적 실험 연구이므로 제한된 수의 환자 등록이 계획되었습니다. 연구에서 얻은 결과는 결정적인 것으로 간주되어서는 안 되며, 오히려 더 많은 인구를 대상으로 수행될 잠재적인 후속 연구에 대한 연구 가설의 생성자로 간주되어야 합니다. 소포의 정성적, 정량적 특성과 miRNA 함량을 설명적으로 분석합니다.

CD69+ 소포의 값 > 349 절대 단위의 값이 최소 80%의 환자에서 방사선 요법에 대한 반응을 올바르게 예측하는 경우 1차 목표가 달성된 것으로 간주됩니다. 그 후, 연구자들은 CD86+ 소포 > 10 절대 단위 및 CD3+ > 4 절대 단위가 최소 80%의 사례에서 방사선 요법에 대한 반응을 정확하게 예측하는지 검증하는 것을 목표로 합니다. 추가적으로, 표시된 3개의 소포(본래 연구 그룹의 예비 결과로부터 파생된 특정 컷오프 위 또는 아래로 이분화된 원본 및 이분화된 소포)의 값과 2년 후 질병 재발까지의 시간 사이의 연관성을 테스트할 것입니다.

환자는 의사의 판단과 임상 실습에 따라 투여되는 병용 요법의 각 개별 제품에 대한 기술 데이터 시트에 제공된 정보에 따라 임상 실습에 따라 치료됩니다. 환자의 진단-치료 경로는 연구를 위해 수행된 조직 검사 결과에 의해 어떤 식으로든 영향을 받지 않습니다.

TC-PET 조사는 일반적인 진단-치료 과정의 일부로 볼로냐 IRCCS 대학병원 핵의학부에서 수행됩니다. 분자 연구는 S. Orsola Polyclinic의 볼로냐 IRCCS 대학병원 산하 면역유전학 및 이식 생물학 부서(IBT)의 실험실에서 수행됩니다. 이 연구는 1년 이내에 국소 진행성 직장 종양에 대해 신보조 방사선요법(RT)을 실시하는 환자를 대상으로 합니다. 연구는 2023년 1월 5일에 시작될 것으로 예상되며, 어떤 경우에도 윤리 위원회의 승인과 회사의 승인이 발표된 후에만 시작됩니다.

환자는 특정 연구 분석에 필요한 샘플링을 수행하기 전에 볼로냐 IRCCS 대학 병원의 방사선 치료실을 처음 방문하는 동안 등록됩니다. DNA의 전체 정량화와 후생적 변화(메틸화 및 miRNA 발현)에 대한 조사에는 게놈 서열 분석이 포함되지 않는다는 점에 유의해야 합니다. DNA 분자는 개인의 특이성을 고려하지 않고 검사됩니다. 따라서 검사 후에도 개인의 유전자 코드는 알려지지 않은 상태로 남아 있습니다. 각 환자로부터 EDTA가 포함된 진공관을 사용하여 10ml의 정맥혈 샘플을 수집하고 각 실험 지점에 대해 혈장을 수집합니다. 생물학적 샘플은 가명화되고 진행 번호 RT/NEO/00N으로 라벨이 지정됩니다. 모든 샘플은 사용할 때까지 IBT 실험실에 위치한 잠금 냉동고에 특별히 표시된 RT 용기에 보관됩니다. 운송은 프로젝트에 참여하는 인력에 의해 밀봉되고 온도가 조절되는 전용 컨테이너를 사용하여 수행됩니다.

환자당 3개의 샘플이 분석됩니다. 첫 번째 샘플: RT 시작 1~5일 전, 두 번째 샘플: RT 3주차 말, 세 번째 샘플: RT 마지막 날. 따라서 총 90개의 샘플이 분석될 것으로 예상된다.

나노소포의 분리: 멸균되고 완충된 CL-B4 수지를 사용한 컬럼 겔 한외여과를 통해 세포외 소포를 분리하기 위해 혈장 샘플을 처리합니다. 그런 다음 나노소포는 Miltenyi MACSPEX 키트를 사용하여 표현형 분석을 위해 처리되고 Nucleo Spin Tissue 키트(Macherey Nagel, M-Medical, Milan, Italy)를 사용하여 DNA/RNA 추출을 위해 처리됩니다. 절차는 볼로냐 IRCCS 대학 병원의 IBT 실험실에서 수행됩니다.

후성유전학적 분석:

• MicroRNA 분석 세포밖 소포체에서 추출한 RNA 샘플은 IBT 연구실에서 Droplet Digital PCR을 이용하여 microRNA 함량을 분석합니다.
• 메틸화 분석 유핵 혈액 세포의 DNA 메틸화 프로파일 분석은 볼로냐 IRCCS 대학 병원의 IBT 실험실에서 Sequenom 플랫폼 및 EpiTyper 프로토콜(Sequenom)에서 수행되는 질량 분석법을 사용하여 수행됩니다. 모든 통계 분석은 IBT 부서에서 수행됩니다.

방문, 평가, 전신 및 국소 치료는 임상 실습에 따라 수행되며 본 연구를 위해 변경되지 않습니다. 특정 연구 분석에 필요한 말초 혈액의 분취량은 동일한 정맥 접근을 사용하여 환자 치료 및 후속 조치 중에 채취한 일상적인 샘플에 추가로 수집됩니다. 구체적으로, 방사선 치료 시작 시, 시작 후 3주, 종료 시 일반적인 임상 실습에 따라 예정된 검사 및 방문 맥락 내에서 샘플을 채취합니다.

첫 번째 방문 동안 임상 실습에 따라 환자의 임상 병력과 관련된 정보(종양학적 병력, 원격 병리학적 병력, 약리학적 병력, 가족력)가 수집됩니다. 일반적인 신체검사를 실시하고 방사선치료 경로를 계획하게 됩니다. PROPER 연구에 대한 환자의 적격성을 평가하고, 긍정적인 경우 사전 동의를 얻습니다.

분석 방법론:

환자의 인구통계학적 및 임상적 특성은 중앙값 및 사분위간 범위(연속 변수의 경우)와 절대 빈도 및 백분율(범주형 변수의 경우)을 사용하여 설명됩니다.

소포의 예측 능력 평가는 미리 정의된 컷오프(CD69+ > 349 절대 단위, CD86+ > 10 절대 단위, CD3+ > 4 절대 단위)의 민감도 및 특이성 분석을 통해 수행되어 모든 것이 긍정적인 예측 값을 갖는지 확인합니다( PPV) > 80%. 소포의 원래 값을 사용한 ROC 분석은 결과와 관련하여 더 잘 구별할 수 있는 대체 컷오프 값을 식별하기 위해 수행됩니다.

치료 시작 후 2년 후의 무병 생존율 분석은 Kaplan-Meier 곡선과 로그 순위 검정을 사용하여 서술적으로 수행됩니다. 치명적인 합병증으로 사망한 환자는 사망일 기준으로 검열된다. 연구 모집단의 규모가 작다는 점을 감안할 때, 사건(질병 재발)의 수가 적절하다면 최대 1개의 교란 변수와 함께 수포 컷오프가 위험 요인으로 초과되었는지 여부에 대한 지표를 포함하여 Cox 회귀 분석을 수행할 수 있습니다. 분석을 위해.