閉経後出血を有する女性から患者採取尿・腟検体および医療従事者採取子宮頸部検体を用いた子宮内膜癌リスク層別化のためのDNAメチル化マーカーの評価

背景：

子宮内膜癌（EC）の発生率は上昇しており、世界中の女性における4番目に多いがん種であり、年間約417,000件の新規症例と90,000件の死亡が報告されています。さらに、ECはデンマークを含む先進国で最も一般的な婦人科がんであり、年間約800件の新規症例と90件の死亡があります。進行したECステージの女性の予後は不良であるため、早期診断が不可欠です。ECに対するスクリーニングは存在せず、最も一般的に観察される臨床症状は閉経後出血（PMB）であり、閉経後女性の約11％に影響を与える一般的な状態です。EC症例の90％はPMBに先行するため、すべてのデンマーク人女性におけるPMBに対して、がん患者経路を通じた専門的な婦人科医療への紹介が示されており、女性の不安と高い医療費を引き起こしています。しかし、PMBを呈する女性のうち、ECを有するのはわずか5〜10％です。世界的に、子宮内膜の経腟超音波（TVUS）評価（カットオフ：厚さ≧5mmおよび／または子宮腔内壁の不整）は、がんリスクが最も高く、子宮鏡検査の有無にかかわらず子宮内膜生検を必要とするPMBを有する女性を特定するために使用されています。TVUS評価は高い感度（94.8％）を有しますが、特異度が低い（51％）ため、健康な女性における不必要な侵襲的手技の数が多くなっています。さらに、診断プログラムは、超音波評価、子宮内膜採取、および組織病理学的検査のための熟練した専門家に依存しています。これは、EC診断を支援するためのより簡便で非侵襲的、ユーザー提供型かつ特異度の高い検査に対する臨床上の緊急かつ未充足のニーズを強化しています。

本研究は、患者自身が採取した尿および腟検体におけるDNAメチル化検査が、ECリスクを決定するための臨床的に安全な非侵襲的代替法となり得るかどうかを明らかにすることを目的としています。がん特異的遺伝子の高DNAメチル化レベルの検査は、子宮頸がんや子宮内膜がんを含む早期がんの検出に対する有望なバイオマーカーを提供することが実証されています。DNA高メチル化は、がん抑制遺伝子のサイレンシングに関連しており、それによりがんの発症に寄与しています。生物学的には、DNAメチル化検査によるEC検出のために腟および尿材料を使用できる能力は、EC由来のDNAおよび細胞断片の腟デブリおよび尿への局所的な脱落、ならびに腫瘍由来循環DNAの尿への経腎排泄によって説明されます。

主に小規模な概念実証研究および症例対照研究が、血漿、自己採取腟検体、および臨床医採取子宮頸部擦過検体におけるDNAメチル化検査を用いたEC検出の実現可能性を示しています。しかし、ECのリキッドバイオプシーとしての腟検体および尿におけるDNAメチル化分析の診断的価値を報告した最初の論文は、昨年共同監督者のステーンベルヘン教授によって発表されました。ここでは、症例対照データにより、患者自身が採取した尿および腟検体におけるEC特異的DNAメチル化マーカーの優れた診断性能が明らかになり、CDH13、GHSR、SST、CDO1、およびZIC1を含むマーカーパネルを用いたEC検出において、感度89〜90％、特異度90〜92％が示されました。

45歳以上の異常子宮出血を有する女性におけるECの有無を検出するという点で、臨床医採取子宮頸腟検体におけるDNAメチル化検査の診断性能を従来のTVUS評価と比較した前向きコホート研究は1件のみです。結果は、WID-qEC DNAメチル化検査（マーカー：ZSCAN12およびGYPC）が、TVUS評価と比較して同等の感度（90.9％）と優れた特異度（92.1対79.1％）を有することを示しました。

しかし、これは患者自身が採取した尿および腟検体におけるDNAメチル化検査をTVUS評価と比較する最初の研究となります。

研究デザイン：診断時の診断検査方法および2年後の長期的安全性を比較する比較診断精度研究。

材料および方法：

腟、尿、および子宮頸部検体は、オランダのアムステルダム大学医療センターのステーンベルヘン教授の研究室で定量的メチル化特異的PCR（qMSP）を用いたDNAメチル化検査分析のために出荷されるまで、ラナース地域病院（RHR）病理学部のバイオバンクに保管されます。すべての検体はメチル化マーカーについて検査され、腟検体用に3つ（CDO1、GHSR、ZIC1）、尿用に3つ（GHSR、CDH13、SST）、子宮頸部検体用に3つ（CDH13 + CDO1 + ZIC1）が使用されます。TVUS評価および子宮内膜生検の結果は、全国的なデンマーク病理データバンクおよびデンマークの市民登録システムを通じて患者にリンクされた電子患者記録から取得されます。デンマークではすべての居住者に固有の10桁コード（CPR番号）が割り当てられており、すべての健康データがこれにリンクされています。

目的：

1. 閉経後出血を有する女性におけるECを検出するための、患者自身が採取した全尿および腟検体、ならびに臨床医採取子宮頸部検体におけるDNAメチル化検査の診断精度を決定すること、および2）DNAメチル化の診断検査精度を現在のTVUSによる診断評価と比較すること。
2. 尿、腟、子宮頸部検体およびTVUSを含む診断評価の種類に関する選好および経験を評価すること。

仮説：

1. 尿検体におけるDNAメチル化検査は、TVUSと比較して同等の感度と優れた特異度でECを検出でき、腟および子宮頸部検体におけるDNAメチル化検査よりも高い精度を有する。
2. 尿検体におけるDNAメチル化分析は、2年後の長期的な陰性ECリスクがTVUSと同等であるが、腟および子宮頸部検体よりも優れている。

研究計画および実現可能性：本研究は、公衆衛生プログラム学部、RHR病理学部、および中央デンマーク地域（ラナースおよびオーフス）および南部デンマーク地域（オーデンセ）の婦人科部門（登録サイトとして機能）との間の大学がんスクリーニングクリニックとの共同で実施されます。最先端の実験施設は、アムステルダムUMCのステーンベルヘン教授の研究室に整備されており、研究の実現可能性を支援しています。

展望およびコミュニケーション：成功した場合、本研究は国際的な影響を及ぼし、侵襲的子宮内膜生検のためにがん患者経路を通じた専門家紹介を必要とするか否かをPMBを有する女性間で区別する新規診断ツールをもたらします。これにより、適時の診断が促進され、患者の不安が軽減され、医療システムへの負担が軽減されます。結果は国際的な査読付き雑誌に掲載され、学会で発表され、博士論文としてまとめられます。結果は関連する臨床フォーラムに配布され、国内および国際的なガイドラインに実装されます。