Ocena markerów metylacji DNA do stratyfikacji ryzyka raka endometrium przy użyciu próbek moczu i pochwowych pobranych przez pacjentki oraz próbek szyjkowych pobranych przez klinicystów od kobiet z krwawieniem pomenopauzalnym

TŁO:

Zachorowalność na raka endometrium (EC) rośnie i jest to czwarty najczęstszy typ nowotworu u kobiet na świecie, z około 417 000 nowymi przypadkami i 90 000 zgonów rocznie. Co więcej, EC jest najczęstszym nowotworem ginekologicznym w krajach rozwiniętych, w tym w Danii, z około 800 nowymi przypadkami i 90 zgonami rocznie. Wczesna diagnoza jest kluczowa, ponieważ rokowanie dla kobiet z zaawansowanym stadium EC jest złe. Nie istnieje badanie przesiewowe dla EC, a najczęściej obserwowanym objawem klinicznym jest krwawienie pomenopauzalne (PMB), które jest częstym schorzeniem dotykającym około 11% kobiet po menopauzie. Ponieważ 90% przypadków EC poprzedza PMB, skierowanie na specjalistyczną opiekę ginekologiczną poprzez ścieżki pacjenta onkologicznego jest wskazane dla wszystkich Duńskich kobiet z PMB, co powoduje niepokój wśród kobiet i wysokie koszty opieki zdrowotnej. Jednak tylko 5-10% kobiet zgłaszających się z PMB ma EC. Na całym świecie ocena endometrium za pomocą ultrasonografii przezpochwowej (TVUS) (punkt odcięcia: grubość ≥5mm i/lub nieregularna wyściółka jamy macicy) jest stosowana do identyfikacji kobiet z PMB, które mają najwyższe ryzyko raka i dlatego wymagają biopsji endometrium z histeroskopią lub bez. Chociaż ocena TVUS jest wysoce czuła (94,8%), cechuje się niską specyficznością (51%), powodując dużą liczbę niepotrzebnych inwazyjnych procedur u zdrowych kobiet. Co więcej, program diagnostyczny zależy od wykwalifikowanych specjalistów do oceny ultrasonograficznej, pobierania próbek endometrium oraz badania histopatologicznego. To podkreśla pilną i niezaspokojoną potrzebę kliniczną prostszego, nieinwazyjnego, dostarczanego przez użytkownika i bardziej specyficznego testu wspomagającego diagnozę EC.

To badanie ma na celu ustalenie, czy testowanie metylacji DNA w próbkach moczu i pochwy pobranych przez pacjentki jest klinicznie bezpieczną, nieinwazyjną alternatywą do określania ryzyka EC. Testowanie podwyższonych poziomów hiper-metylacji DNA genów specyficznych dla nowotworów wykazało, że stanowi obiecujący biomarker do wykrywania nowotworów we wczesnym stadium, w tym raka szyjki macicy i endometrium. Hiper-metylacja DNA została powiązana z wyciszaniem genów supresorowych nowotworów, przyczyniając się tym samym do rozwoju raka. Biologicznie, możliwość wykorzystania materiału z pochwy i moczu do wykrywania EC za pomocą testów metylacji DNA tłumaczy się miejscowym złuszczaniem DNA pochodzącego z EC i fragmentów komórek do wydzieliny pochwowej i moczu, a także nerkowym wydalaniem krążącego DNA uwolnionego z guza do moczu.

Głównie małe badania proof-of-concept i badania kliniczno-kontrolne wykazały wykonalność wykrywania EC za pomocą testów metylacji DNA w osoczu, próbkach pochwy pobranych samodzielnie oraz wymazach szyjkowych pobranych przez klinicystów. Jednak pierwsza praca dotycząca wartości diagnostycznej analizy metylacji DNA w próbkach pochwy i moczu jako biopsji płynnej dla EC została właśnie opublikowana przez współpromotora, prof. Steenbergena, w ubiegłym roku. Dane z badań kliniczno-kontrolnych ujawniły doskonałą wydajność diagnostyczną specyficznych dla EC markerów metylacji DNA w próbkach moczu i pochwy pobranych przez pacjentki, z czułościami 89-90% i specyficznościami 90-92% dla wykrywania EC przy użyciu paneli markerów obejmujących: CDH13, GHSR, SST, CDO1 i ZIC1.

Tylko jedno prospektywne badanie kohortowe porównało wydajność diagnostyczną testów metylacji DNA w próbkach szyjkowo-pochwowych pobranych przez klinicystów z konwencjonalną oceną TVUS pod względem wykrywania obecności lub braku EC u kobiet w wieku 45+ z nieprawidłowym krwawieniem z macicy. Wyniki wykazały, że test metylacji DNA WID-qEC (markery: ZSCAN12 i GYPC) ma równą czułość (90,9%) i wyższą specyficzność (92,1 vs 79,1%) w porównaniu z oceną TVUS.

Jednak będzie to pierwsze badanie porównujące testowanie metylacji DNA w próbkach moczu i pochwy pobranych przez pacjentki z oceną TVUS.

PROJEKT BADANIA: Badanie porównawcze dokładności diagnostycznej, porównujące metody testów diagnostycznych w momencie diagnozy oraz długoterminowe bezpieczeństwo po dwóch latach.

MATERIAŁY I METODY:

Próbki pochwy, moczu i szyjki macicy będą przechowywane w biobanku w Zakładzie Patologii, Randers Regional Hospital (RHR) do czasu wysyłki do analizy testów metylacji DNA za pomocą ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy specyficznej dla metylacji (qMSP) w laboratorium prof. Steenbergena w Amsterdam University Medical Centre, Holandia. Wszystkie próbki będą testowane pod kątem markerów metylacji, trzy dla próbek pochwy (CDO1, GHSR, ZIC1), trzy dla moczu (GHSR, CDH13, SST) i trzy dla próbek szyjki macicy (CDH13 + CDO1 + ZIC1). Wyniki oceny TVUS i biopsji endometrium będą pobierane z ogólnokrajowej Duńskiej Bazy Danych Patologicznych oraz elektronicznego dziennika pacjenta powiązanego z pacjentem poprzez System Rejestracji Obywateli w Danii, gdzie wszyscy mieszkańcy mają unikalny 10-cyfrowy kod (numer CPR), z którym powiązane są wszystkie dane zdrowotne.

CELE:

1. Określenie dokładności diagnostycznej testów metylacji DNA w próbkach pełnego moczu i pochwy pobranych przez pacjentki, a także w próbkach szyjki macicy pobranych przez klinicystów, w celu wykrycia EC wśród kobiet z krwawieniem pomenopauzalnym, oraz 2) porównanie dokładności diagnostycznej testów metylacji DNA z obecną oceną diagnostyczną za pomocą TVUS.
2. Ocena preferencji i doświadczeń dotyczących rodzaju oceny diagnostycznej, w tym próbek moczu, pochwy i szyjki macicy oraz TVUS.

HIPOTEZY:

1. Testowanie metylacji DNA w próbkach moczu może wykryć EC z porównywalną czułością i wyższą specyficznością w porównaniu z TVUS oraz z większą dokładnością niż testowanie metylacji DNA w próbkach pochwy i szyjki macicy.
2. Analiza metylacji DNA w próbkach moczu będzie miała długoterminowe negatywne ryzyko EC po 2 latach równoważne TVUS, ale lepsze niż w przypadku próbek pochwy i szyjki macicy.

PLAN BADAWCZY I WYKONALNOŚĆ Badanie będzie prowadzone we współpracy między Kliniką Uniwersytecką Badań Przesiewowych Raka, Zakładem Programów Zdrowia Publicznego, Zakładem Patologii, RHR oraz z oddziałami ginekologicznymi w regionie Środkowej Danii (Randers i Aarhus) i regionie Południowej Danii (Odense) działającymi jako miejsca rekrutacji. Nowoczesne laboratoria są dostępne w laboratorium prof. Steenbergena w Amsterdam UMC, co wspiera wykonalność badań.

PERSPEKTYWY I KOMUNIKACJA W przypadku sukcesu, badania będą miały międzynarodowy wpływ i zaowocują nowym narzędziem diagnostycznym, które będzie różnicować kobiety z PMB, które potrzebują lub nie potrzebują skierowania do specjalisty poprzez ścieżki pacjenta onkologicznego w celu wykonania inwazyjnych biopsji endometrium. Ułatwi to terminową diagnozę, zmniejszy niepokój wśród pacjentek i zmniejszy obciążenie systemu opieki zdrowotnej. Wyniki zostaną opublikowane w międzynarodowych recenzowanych czasopismach i przedstawione na konferencjach, a także podsumowane w rozprawie doktorskiej. Wyniki będą rozpowszechniane w odpowiednich forach klinicznych i wdrożone w wytycznych krajowych oraz międzynarodowych.