Valutazione dei marcatori di metilazione del DNA per la stratificazione del rischio di cancro endometriale utilizzando campioni di urine e vaginali raccolti dalle pazienti e campioni cervicali raccolti da clinici da donne con sanguinamento postmenopausale

BACKGROUND:

L'incidenza del cancro endometriale (CE) è in aumento ed è il quarto tipo di cancro più comune nelle donne a livello mondiale, con circa 417.000 nuovi casi e 90.000 decessi all'anno. Inoltre, il CE è il tumore ginecologico più comune nei paesi sviluppati, inclusa la Danimarca, con circa 800 nuovi casi e 90 decessi all'anno. La diagnosi precoce è essenziale poiché la prognosi per le donne con uno stadio avanzato di CE è scarsa. Non esiste uno screening per il CE e il sintomo clinico più comunemente osservato è il sanguinamento post-menopausale (PMB), una condizione comune che colpisce circa l'11% delle donne in post-menopausa. Poiché il 90% dei casi di CE è preceduto da PMB, il rinvio a cure ginecologiche specializzate attraverso percorsi per pazienti oncologici è indicato per tutte le donne danesi con PMB, causando ansia tra le donne e alti costi sanitari. Tuttavia, solo il 5-10% delle donne che presentano PMB ha il CE. A livello mondiale, la valutazione ecografica transvaginale (TVUS) dell'endometrio (cut-off: spessore ≥5 mm e/o rivestimento irregolare della cavità uterina) viene utilizzata per identificare le donne con PMB che hanno il più alto rischio di cancro e che quindi richiedono una biopsia endometriale con o senza isteroscopia. Sebbene la valutazione TVUS sia altamente sensibile (94,8%), soffre di bassa specificità (51%), causando un alto numero di procedure invasive non necessarie in donne sane. Inoltre, il programma diagnostico dipende da specialisti qualificati per la valutazione ecografica, il campionamento endometriale e l'esame istopatologico. Ciò rafforza l'urgente e insoddisfatta necessità clinica di un test più semplice, non invasivo, fornito dall'utente e più specifico per aiutare nella diagnosi del CE.

Questo studio mira a determinare se il test di metilazione del DNA in campioni di urina e vaginali raccolti dal paziente sia un'alternativa clinica sicura e non invasiva per determinare il rischio di CE. Il test per livelli elevati di ipermetilazione del DNA di geni specifici del cancro ha dimostrato di fornire un biomarcatore promettente per il rilevamento di tumori in stadio precoce, incluso il cancro cervicale ed endometriale. L'ipermetilazione del DNA è stata collegata al silenziamento di geni soppressori tumorali, contribuendo così allo sviluppo del cancro. Biologicamente, la capacità di utilizzare materiale vaginale e urinario per il rilevamento del CE mediante test di metilazione del DNA è spiegata dallo sfaldamento locale di DNA e frammenti cellulari derivati dal CE nei detriti vaginali e nell'urina, nonché dall'escrezione transrenale di DNA circolante rilasciato dal tumore nell'urina.

Principalmente piccoli studi proof-of-concept e casi-controllo hanno dimostrato la fattibilità del rilevamento del CE utilizzando il test di metilazione del DNA nel plasma, in campioni vaginali auto-raccolti e in raschi cervicali raccolti dal medico. Tuttavia, il primo articolo che riporta il valore diagnostico dell'analisi della metilazione del DNA in campioni vaginali e urina come biopsia liquida per il CE è stato pubblicato solo l'anno scorso dal co-supervisore Prof. Steenbergen. Qui, i dati caso-controllo hanno rivelato un'eccellente performance diagnostica dei marcatori di metilazione del DNA specifici per il CE in campioni di urina e vaginali raccolti dal paziente, con sensibilità dell'89-90% e specificità del 90-92% per il rilevamento del CE utilizzando pannelli di marcatori tra cui: CDH13, GHSR, SST, CDO1 e ZIC1.

Solo uno studio di coorte prospettico ha confrontato la performance diagnostica del test di metilazione del DNA in campioni cervico-vaginali raccolti dal medico con la valutazione TVUS convenzionale in termini di rilevamento della presenza o assenza di CE in donne di età ≥45 con sanguinamento uterino anomalo. I risultati hanno dimostrato che il test di metilazione del DNA WID-qEC (marcatori: ZSCAN12 e GYPC) ha sensibilità uguale (90,9%) e specificità superiore (92,1 vs 79,1%) rispetto alla valutazione TVUS.

Tuttavia, questo sarà il primo studio a confrontare il test di metilazione del DNA in campioni di urina e vaginali raccolti dal paziente con la valutazione TVUS.

STUDY DESIGN: Studio di accuratezza diagnostica comparativa, confrontando metodi di test diagnostici al momento della diagnosi e la sicurezza a lungo termine dopo due anni.

MATERIALS AND METHODS:

I campioni vaginali, urinari e cervicali saranno conservati in una biobanca presso il Dip. di Patologia, Randers Regional Hospital (RHR) fino alla spedizione per l'analisi del test di metilazione del DNA utilizzando PCR quantitativa specifica per la metilazione (qMSP) nel laboratorio del Prof. Steenbergen presso l'Amsterdam University Medical Centre, Paesi Bassi. Tutti i campioni saranno testati per marcatori di metilazione, tre per campioni vaginali (CDO1, GHSR, ZIC1), tre per urina (GHSR, CDH13, SST) e tre per campioni cervicali (CDH13 + CDO1 + ZIC1). I risultati della valutazione TVUS e delle biopsie endometriali saranno recuperati dal database nazionale di patologia danese e dal diario elettronico del paziente collegato al paziente attraverso il Sistema di Registrazione Civile in Danimarca, dove tutti i residenti hanno un codice univoco a 10 cifre (numero CPR), a cui sono collegati tutti i dati sanitari.

AIMs:

1. Determinare l'accuratezza diagnostica del test di metilazione del DNA in campioni di urina completa e vaginali raccolti dal paziente, nonché in campioni cervicali raccolti dal medico, per rilevare il CE tra le donne con sanguinamento post-menopausale, e 2) confrontare l'accuratezza diagnostica del test di metilazione del DNA con l'attuale valutazione diagnostica con TVUS.
2. Valutare le preferenze e le esperienze per il tipo di valutazione diagnostica, inclusi campioni di urina, vaginali e cervicali e TVUS.

HYPOTHESES:

1. Il test di metilazione del DNA in campioni di urina può rilevare il CE con sensibilità comparabile e specificità superiore rispetto alla TVUS e con maggiore accuratezza rispetto al test di metilazione del DNA in campioni vaginali e cervicali.
2. L'analisi di metilazione del DNA in campioni di urina avrà un rischio negativo a lungo termine di CE dopo 2 anni equivalente alla TVUS, ma migliore rispetto ai campioni vaginali e cervicali.

RESEARCH PLAN AND FEASIBILITY Lo studio sarà condotto in collaborazione tra la Clinica Universitaria per lo Screening del Cancro, Dip. di Programmi di Sanità Pubblica, Dip. di Patologia, RHR e con i dipartimenti ginecologici nella Danimarca Centrale (Randers e Aarhus) e nella Regione della Danimarca Meridionale (Odense) che fungeranno da siti di inclusione. Strutture di laboratorio all'avanguardia sono presenti nel laboratorio del Prof. Steenbergen presso l'Amsterdam UMC, supportando la fattibilità degli studi.

PERSPECTIVES AND COMMUNICATION Se avrà successo, la ricerca avrà un impatto internazionale e si tradurrà in un nuovo strumento diagnostico che differenzierà tra le donne con PMB che necessitano o meno di rinvio specialistico attraverso i percorsi per pazienti oncologici per sottoporsi a biopsie endometriali invasive. Ciò faciliterà una diagnosi tempestiva, ridurrà l'ansia tra i pazienti e allevierà la pressione sul sistema sanitario. I risultati saranno pubblicati in riviste internazionali peer-reviewed e presentati a conferenze e si concluderanno con una dissertazione di dottorato. I risultati saranno distribuiti a forum clinici rilevanti e implementati nelle linee guida nazionali e internazionali.