DNA-metyylausmarkkereiden arviointi kohdun limakalvonsyövän riskiluokittelussa käyttäen potilaan keräämiä virtsa- ja emätinnäytteitä sekä hoitajan keräämiä kohdunkaulanäytteitä vaihdevuosi-ikäisiltä naisilta, joilla on vaihdevuosivuotoa

TAUSTA:

Kohdun limakalvonsyövän (EC) esiintyvyys on kasvussa, ja se on neljänneksi yleisin syöpätyyppi naisilla maailmanlaajuisesti noin 417 000 uuden tapauksen ja 90 000 kuoleman vuosittain. Lisäksi EC on yleisin gynekologinen syöpä kehittyneissä maissa, mukaan lukien Tanskassa, jossa noin 800 uutta tapausta ja 90 kuolemaa vuosittain. Varhainen diagnosointi on ratkaisevan tärkeää, koska ennuste naisilla, joilla on edenneen EC-vaiheen, on huono. EC:lle ei ole seulontamenetelmää, ja yleisimmin havaittu kliininen oire on vaihdevuoden jälkeinen vuoto (PMB), joka on yleinen tila, joka koskettaa noin 11 % vaihdevuosien jälkeisistä naisista. Koska 90 % EC-tapauksista edeltää PMB, kaikki tanskalaiset naiset PMB:llä ohjataan erikoistuneeseen gynekologiseen hoitoon syöpäpotilaiden polkujen kautta, mikä aiheuttaa ahdistusta naisilla ja korkeita terveydenhuoltokustannuksia. Kuitenkin vain 5–10 % naisista, joilla esiintyy PMB, sairastuu EC:hen. Maailmanlaajuisesti emättimen kautta tehtävää ultraäänitutkimusta (TVUS) endometriumin arvioimiseksi (raja-arvo: paksuus ≥5 mm ja/tai epäsäännöllinen kohdunontelon limakalvo) käytetään tunnistamaan naiset PMB:llä, joilla on suurin syöpäriski ja jotka siksi tarvitsevat endometriumin näytteenoton hysteroskopian kanssa tai ilman. Vaikka TVUS-arviointi on erittäin herkkä (94,8 %), sillä on alhainen spesifisyys (51 %), mikä aiheuttaa suuren määrän tarpeettomia invasiivisia toimenpiteitä terveillä naisilla. Lisäksi diagnostinen ohjelma riippuu taitavista asiantuntijoista ultraäänitutkimuksen arviointiin, endometriumin näytteenottoon sekä histopatologiseen tutkimukseen. Tämä korostaa kliinistä kiireellistä ja täyttämätöntä tarvetta yksinkertaisemmalle, ei-invasiiviselle, käyttäjän toimittamalle ja spesifisemmälle testille EC-diagnosoinnin avuksi.

Tämän tutkimuksen tavoitteena on selvittää, onko DNA-metylaatiotestaus potilaan keräämissä virtsa- ja emätinnäytteissä kliinisesti turvallinen ei-invasiivinen vaihtoehto EC-riskin määrittämiseksi. Syöpäspesifisten geenien kohonneiden DNA-hypermetylaatioiden testaaminen on osoitettu lupaavaksi biomarkkeriksi varhaisten syöpävaiheiden havaitsemiseen, mukaan lukien kohdunkaulansyöpä ja kohdun limakalvonsyöpä. DNA-hypermetylaatio on liitetty kasvainsuppressorigeenien hiljentämiseen, mikä edistää syövän kehittymistä. Biologisesti mahdollisuutta käyttää emätin- ja virtsamateriaalia EC:n havaitsemiseen DNA-metylaatiotestauksella selittää EC-peräisen DNA:n ja solujen fragmenttien paikallinen irtoaminen emätintähkään ja virtsaan sekä syöpäsolujen irrottaman kiertävän DNA:n transrenaalinen erittyminen virtsaan.

Pääasiassa pienet proof-of-concept- ja tapauskontrollitutkimukset ovat osoittaneet mahdollisuuden havaita EC DNA-metylaatiotestauksella plasmassa, itse kerätyissä emätinnäytteissä ja kliinikon keräämissä kohdunkaulan raapaisunäytteissä. Kuitenkin vasta viime vuonna yliopettaja professori Steenbergen julkaisi ensimmäisen artikkelin, joka raportoi DNA-metylaatioanalyysin diagnostisesta arvosta emätinnäytteissä ja virtsassa nestebiopsiana EC:lle. Tässä tapauskontrolliaineisto paljasti erinomaisen diagnostisen suorituskyvyn EC-spesifeille DNA-metylaatiomarkkereille potilaan keräämissä virtsa- ja emätinnäytteissä herkkyyksillä 89–90 % ja spesifisyyksillä 90–92 % EC:n havaitsemisessa käyttäen markkeripaneelia, joka sisältää: CDH13, GHSR, SST, CDO1 ja ZIC1.

Vain yksi prospektiivinen kohorttitutkimus on vertaillut DNA-metylaatiotestauksen diagnostista suorituskykyä kliinikon keräämissä kohdunkaula-emätinnäytteissä perinteiseen TVUS-arviointiin sen suhteen, miten ne havaitsivat EC:n olemassaolon tai puuttumisen 45-vuotiailla ja sitä vanhemmilla naisilla, joilla on epänormaalia kohdunvuotoa. Tulokset osoittivat, että WID-qEC DNA-metylaatiotestillä (markkerit: ZSCAN12 ja GYPC) on sama herkkyys (90,9 %) ja parempi spesifisyys (92,1 vs 79,1 %) verrattuna TVUS-arviointiin.

Tämä kuitenkin on ensimmäinen tutkimus, joka vertaa DNA-metylaatiotestausta potilaan keräämissä virtsa- ja emätinnäytteissä TVUS-arviointiin.

TUTKIMUSSUUNNITTELU: Vertaileva diagnostisen tarkkuuden tutkimus, joka vertaa diagnostisia testimenetelmiä diagnoosiaikana sekä pitkäaikaista turvallisuutta kahden vuoden jälkeen.

MATERIAALIT JA MENETELMÄT:

Emätin-, virtsa- ja kohdunkaulanäytteet varastoidaan biopankkiin Patologian osastolla, Randersin alueellisessa sairaalassa (RHR), kunnes ne lähetetään DNA-metylaatiotestausanalyysiin käyttäen kvantitatiivista metylaatiospesifistä PCR:ää (qMSP) professori Steenbergenin laboratoriossa Amsterdam University Medical Centre:ssä, Alankomaissa. Kaikkia näytteitä testataan metylaatiomarkkereille, kolme emätinnäytteille (CDO1, GHSR, ZIC1), kolme virtsanäytteille (GHSR, CDH13, SST) ja kolme kohdunkaulanäytteille (CDH13 + CDO1 + ZIC1). Tulokset TVUS-arvioinnista ja endometriumin näytteenotoista haetaan valtakunnallisesta Tanskalaisesta Patologiadatapankista ja sähköisestä potilaskertomuksesta, joka on linkitetty potilaaseen Tanskan henkilörekisterijärjestelmän kautta, jossa kaikilla asukkailla on yksilöllinen 10-numeroinen koodi (CPR-numero), johon kaikki terveystiedot on linkitetty.

TUTKIMUSTAVOITTEET:

1. Määrittää DNA-metylaatiotestauksen diagnostinen tarkkuus potilaan keräämissä täysin tyhjennetyissä virtsa- ja emätinnäytteissä sekä kliinikon keräämissä kohdunkaulanäytteissä EC:n havaitsemiseksi naisilla, joilla on vaihdevuoden jälkeistä vuotoa, ja 2) vertailla DNA-metylaation diagnostisen testin tarkkuutta nykyiseen diagnostiseen arviointiin TVUS:lla.
2. Arvioida mieltymyksiä ja kokemuksia erityyppisistä diagnostisista arvioinneista, mukaan lukien virtsa-, emätin- ja kohdunkaulanäytteet ja TVUS.

HYPOTEESIT:

1. DNA-metylaatiotestaus virtsanäytteissä voi havaita EC:n verrattavalla herkkyydellä ja paremmalla spesifisyydellä verrattuna TVUS:ään ja korkeammalla tarkkuudella kuin DNA-metylaatiotestaus emätin- ja kohdunkaulanäytteissä.
2. DNA-metylaatioanalyysilla virtsanäytteissä on pitkän aikavälin negatiivinen EC-riski kahden vuoden jälkeen vastaava TVUS:lle, mutta parempi kuin emätin- ja kohdunkaulanäytteillä.

TUTKIMUSSUUNNITELMA JA TOTEUTETTAVUUS Tutkimus toteutetaan yhteistyössä Syöpäseulonnan yliopistoklinikan, Kansanterveysohjelmien osaston, Patologian osaston, RHR:n ja gynekologisten osastojen kanssa Keski-Tanskassa (Randers ja Aarhus) ja Etelä-Tanskan alueella (Odense), jotka toimivat rekrytointipaikkoina. Huippuluokan laboratoriotilat ovat käytettävissä professori Steenbergenin laboratoriossa Amsterdam UMC:ssä, mikä tukee tutkimusten toteutettavuutta.

NÄKÖKULMAT JA VIESTINTÄ Onnistuessaan tutkimuksella on kansainvälistä vaikutusta ja se johtaa uuteen diagnostiseen työkaluun, joka erottelee naiset PMB:llä, jotka tarvitsevat tai eivät tarvitse erikoishoitoa syöpäpotilaiden polkujen kautta invasiivisiin endometriumin näytteenottoihin. Tämä helpottaa ajallaan tapahtuvaa diagnoosia, vähentää potilaiden ahdistusta ja vähentää painetta terveydenhuoltojärjestelmälle. Tulokset julkaistaan kansainvälisissä vertaisarvioituissa aikakauslehdissä ja esitetään konferensseissa, ja ne päättyvät väitöskirjaan. Tulokset jaetaan asianomaisille kliinisille foorumeille ja ne otetaan käyttöön sekä kansallisissa että kansainvälisissä suosituksissa.