Vyhodnocení markerů methylace DNA pro stratifikaci rizika karcinomu endometria s využitím pacientkou sebraných vzorků moči a vaginálních vzorků a klinicky odebraných cervikálních vzorků od žen s postmenopauzálním krvácením

PŘEDCHOZÍ VÝZKUM:

Výskyt rakoviny endometria (EC) stoupá a jde o čtvrtý nejčastější typ rakoviny u žen na celém světě s přibližně 417 000 novými případy a 90 000 úmrtími ročně. Navíc je EC nejčastějším gynekologickým nádorem v rozvinutých zemích včetně Dánska s přibližně 800 novými případy a 90 úmrtími ročně. Včasná diagnóza je klíčová, protože prognóza žen s pokročilým stádiem EC je špatná. Pro EC neexistuje screening a nejčastěji pozorovaným klinickým příznakem je postmenopauzální krvácení (PMB), což je běžný stav postihující asi 11 % postmenopauzálních žen. Protože 90 % případů EC předchází PMB, je pro všechny dánské ženy s PMB indikováno odeslání k specializované gynekologické péči prostřednictvím onkologických pacientských drah, což způsobuje úzkost u žen a vysoké náklady na zdravotní péči. Avšak pouze 5–10 % žen s PMB má EC. Celosvětově se k identifikaci žen s PMB, které mají nejvyšší riziko rakoviny a proto vyžadují biopsii endometria s nebo bez hysteroskopie, používá transvaginální ultrazvukové vyšetření (TVUS) endometria (hranice: tloušťka ≥5 mm a/nebo nepravidelné vystýlání děložní dutiny). Ačkoli je TVUS vysoce citlivé (94,8 %), trpí nízkou specificitou (51 %), což způsobuje vysoký počet zbytečných invazivních zákroků u zdravých žen. Navíc diagnostický program závisí na kvalifikovaných specialistech pro ultrazvukové vyšetření, odběr vzorků endometria i histopatologické vyšetření. To zdůrazňuje klinickou naléhavou a neuspokojenou potřebu jednoduššího, neinvazivního, uživatelem poskytovaného a specifičtějšího testu pro pomoc při diagnostice EC.

Tato studie si klade za cíl zjistit, zda testování metylace DNA ve vzorcích moči a vaginálních vzorcích odebraných pacientkami je klinicky bezpečnou neinvazivní alternativou pro stanovení rizika EC. Bylo prokázáno, že testování zvýšených hladin hypermetylace DNA u genů specifických pro rakovinu poskytuje slibný biomarker pro detekci časných stádií rakoviny, včetně rakoviny děložního čípku a endometria. Hypermetylace DNA byla spojena s umlčením tumor-supresorových genů, čímž přispívá k rozvoji rakoviny. Biologicky je schopnost používat vaginální materiál a moč pro detekci EC testováním metylace DNA vysvětlena lokálním uvolňováním DNA a buněčných fragmentů odvozených od EC do vaginálního obsahu a moči, stejně jako transrenální exkrecí cirkulující DNA uvolněné z nádoru do moči.

Převážně malé studie proof-of-concept a případových kontrol ukázaly proveditelnost detekce EC pomocí testování metylace DNA v plazmě, samoodběrových vaginálních vzorcích a stěrech z děložního čípku odebraných klinickým pracovníkem. Avšak první článek popisující diagnostickou hodnotu analýzy metylace DNA ve vaginálních vzorcích a moči jakožto tekuté biopsie pro EC byl publikován spolupřednášejícím prof. Steenbergenem teprve loni. Zde data případových kontrol odhalila vynikající diagnostickou výkonnost markerů metylace DNA specifických pro EC ve vzorcích moči a vaginálních vzorcích odebraných pacientkami s citlivostí 89–90 % a specificitou 90–92 % pro detekci EC pomocí panelů markerů zahrnujících: CDH13, GHSR, SST, CDO1 a ZIC1.

Pouze jedna prospektivní kohortová studie porovnala diagnostickou výkonnost testování metylace DNA ve vzorcích z děložního čípku a pochvy odebraných klinickým pracovníkem s konvenčním TVUS vyšetřením z hlediska detekce přítomnosti nebo nepřítomnosti EC u žen ve věku 45+ s abnormálním děložním krvácením. Výsledky prokázaly, že test metylace DNA WID-qEC (markery: ZSCAN12 a GYPC) má stejnou citlivost (90,9 %) a vyšší specificitu (92,1 vs 79,1 %) ve srovnání s TVUS vyšetřením.

Avšak tato studie bude první, která porovná testování metylace DNA ve vzorcích moči a vaginálních vzorcích odebraných pacientkami s TVUS vyšetřením.

DESIGN STUDIE: Srovnávací studie diagnostické přesnosti, porovnávající diagnostické testovací metody v době diagnózy a dlouhodobou bezpečnost po dvou letech.

MATERIÁLY A METODY:

Vaginální, močové a cervikální vzorky budou uloženy v biobance na Oddělení patologie, Regionální nemocnice Randers (RHR) až do odeslání k analýze testování metylace DNA pomocí kvantitativní metylačně specifické PCR (qMSP) v laboratoři prof. Steenbergena na Amsterdam University Medical Centre v Nizozemsku. Všechny vzorky budou testovány na markery metylace, tři pro vaginální vzorky (CDO1, GHSR, ZIC1), tři pro moč (GHSR, CDH13, SST) a tři pro cervikální vzorky (CDH13 + CDO1 + ZIC1). Výsledky TVUS vyšetření a biopsií endometria budou získány z celostátní dánské databáze patologie a elektronické pacientské dokumentace propojené s pacientem prostřednictvím systému občanské registrace v Dánsku, kde mají všichni obyvatelé jedinečný 10místný kód (CPR číslo), ke kterému jsou propojena všechna zdravotní data.

CÍLE:

1. Stanovit diagnostickou přesnost testování metylace DNA ve vzorcích celé porce moči a vaginálních vzorcích odebraných pacientkami, stejně jako ve vzorcích z děložního čípku odebraných klinickým pracovníkem, pro detekci EC u žen s postmenopauzálním krvácením, a 2) porovnat diagnostickou přesnost testu metylace DNA se současným diagnostickým vyšetřením pomocí TVUS.
2. Posoudit preference a zkušenosti s typem diagnostického vyšetření, včetně močových, vaginálních a cervikálních vzorků a TVUS.

HYPOTÉZY:

1. Testování metylace DNA ve vzorcích moči může detekovat EC se srovnatelnou citlivostí a vyšší specificitou ve srovnání s TVUS a s vyšší přesností než testování metylace DNA ve vaginálních a cervikálních vzorcích.
2. Analýza metylace DNA ve vzorcích moči bude mít po 2 letech dlouhodobě negativní riziko EC ekvivalentní TVUS, ale lepší než vaginální a cervikální vzorky.

PLÁN VÝZKUMU A PROVEDITELNOST Studie bude provedena ve spolupráci mezi Univerzitní klinikou pro screening rakoviny, Oddělením programů veřejného zdraví, Oddělením patologie, RHR a s gynekologickými odděleními v regionu Střední Dánsko (Randers a Aarhus) a regionu Jižní Dánsko (Odense), které budou sloužit jako místa zařazení. Špičkové laboratorní zařízení je k dispozici v laboratoři prof. Steenbergena na Amsterdam UMC, což podporuje proveditelnost studií.

PERSPEKTIVY A KOMUNIKACE Pokud bude úspěšný, výzkum bude mít mezinárodní dopad a povede k novému diagnostickému nástroji, který bude rozlišovat mezi ženami s PMB, které potřebují nebo nepotřebují specializované odeslání prostřednictvím onkologických pacientských drah k invazivním biopsiím endometria. To usnadní včasnou diagnózu, sníží úzkost u pacientek a sníží tlak na zdravotnický systém. Výsledky budou publikovány v mezinárodních recenzovaných časopisech a prezentovány na konferencích a budou uzavřeny dizertační prací PhD. Výsledky budou distribuovány příslušným klinickým fórům a implementovány do národních i mezinárodních směrnic.