급성골수성백혈병에서의 내인성 레트로바이러스 (ERVAL)

동종 조혈 줄기 세포 이식(HSCT)은 수많은 악성 혈액 질환에 대한 유일한 치료 요법입니다. 최근 이 분야의 발전에도 불구하고 재발률은 여전히 ​​높고 첫 번째 사망 원인입니다. 따라서 새로운 관련 치료 표적의 식별이 시급히 필요합니다.

인간 내인성 레트로바이러스(HERV)는 인간 게놈의 8%를 차지합니다. 정상 상태(주로 메틸화 메커니즘에 의해)에서 침묵하는 동안 HERV 재활성화는 자가 면역 질환이나 암과 같은 다양한 조건에서 설명되어 선천적 및 적응적 면역 반응을 유도합니다. 이용 가능한 데이터가 거의 없는 혈액학 분야에서 몇 가지 질문이 제기되며 이러한 질병에서 HERV의 정확한 역할은 여전히 ​​정의되어야 합니다.

우리 팀은 현재 다양한 유형의 암에서 HERV의 역할에 대해 연구하고 있습니다. 우리는 RNAseq 데이터에서 과발현된 HERV를 식별하기 위한 생물정보학 접근법을 개발했습니다. 우리는 또한 HERV 오픈 리딩 프레임에서 다양한 펩타이드의 면역원성을 평가하기 위해 시험관 내 분석법을 개발했으며 여러 HERV 간에 공유되는 여러 에피토프가 특정 CD8+ T 세포 반응을 유도할 수 있음을 보여주었습니다. 보다 최근에 우리는 TCGA에서 151개의 급성 골수성 백혈병(AML) RNAseq 데이터를 분석하고 이 질병에서 여러 개의 과발현된 HERV를 확인했습니다. 현재 진단 시 환자의 혈액으로 면역원성 검사를 진행하고 있습니다.

우리 프로젝트의 이 부분의 주요 목표는 AML 환자에 대한 조혈모세포 이식 후 이식편 대 백혈병 효과에 참여하는 HERVs 특정 CD8+ T 세포 반응의 확립을 분석하는 것입니다. 이차 목표는 이 반응과 GVHD의 시작 또는 재발과 같은 다른 임상 요인 사이의 관계를 분석하는 것입니다.

AML 환자의 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 진단, 완전관해(조혈모세포이식 전) 및 조혈모세포이식 후(M3, M6 및 M12)와 같은 서로 다른 시점에서 추출 및 동결됩니다. 이 예상 프로토콜은 현재 Centre Hospitalier Lyon Sud에서 진행 중이며 약 30개의 샘플이 이미 사용 가능합니다.

관련 HERV를 선택한 후 DNA 바코드로 식별되는 특정 덱스트라머가 합성됩니다. 최대 1000개의 에피토프에 대한 특정 T 세포 반응의 식별을 허용하는 이러한 덱스트라머는 가장 일반적인 HLA에 대해 AML에서 과발현된 HERV에 대한 특정 T 세포를 스크리닝할 수 있습니다. Dextramer 염색은 해동 후 PBMC에서 수행됩니다. 양성 세포는 유세포 분석법으로 분류되고 시퀀싱을 수행하기 전에 PCR로 DNA를 확장하여 고유한 DNA 바코드로 특정 서열을 식별할 수 있습니다.

HSCT 후 HERVs-특이적 CD8+ T 세포 반응의 분석은 우리가 이식편 대 백혈병 효과의 개시에서 HERVs 역할을 더 잘 정의할 수 있게 해줄 것입니다. GvHD가 없는 특이적 T 세포 반응은 종양 특이적 항원과 같은 펩티드의 관련성을 정의할 것입니다.