HPV DNA를 이용한 모니터링 및 조기 대응 평가 - HPV 양성 인후암(MER-HPV) 환자에 대한 연구 (MER-HPV)

배경:

구강인두 암종(OPC)의 발병률은 매년 약 100% 증가하고 있습니다. 스웨덴에서는 5%, 주로 남성입니다. 종양의 80% 이상이 HPV(인간 유두종 바이러스) 양성입니다. 이러한 이유로 혈장 내 순환 종양 HPV DNA(ctHPVDNA)를 치료 반응의 지표 및 감시 보조 지표로 측정하는 것이 매력적인 가능성이 되었습니다.

스웨덴에서 OPC에 대한 근치적 치료를 목적으로 하는 환자는 일반적으로 (화학)방사선 요법 (c)RT로 치료됩니다. 작은 비율은 보조 방사선을 사용하거나 사용하지 않고 수술을 받습니다. 최종 (c)RT 후 치료 평가를 위한 금본위제는 (c)RT 완료 후 12주에 수행되는 양전자 방출 단층 촬영 컴퓨터 단층 촬영(PET-CT)입니다. PET-CT 결과는 진단 시 결절 양성 질환 환자에서 경부 절제술의 필요성을 결정하는 데 가장 중요합니다.

ctHPVDNA 주제에 대한 이전 간행물에 따르면 HPV 양성 OPC 환자의 일상적인 임상 실습에서 ctHPVDNA의 가치를 추가로 탐구해야 하는 다음과 같은 이유가 있습니다.

1. ctHPVDNA는 모호한 치료 평가 반응으로 평가된 PET-CT 결과로 문제를 제한하거나 거의 구분할 수 있습니다. PET-CT 결과와 ctHPVDNA 분석의 조합은 정확도를 높이는 것으로 보입니다.
2. ctHPVDNA는 자각 증상이 나타나기 전과 임상 검사에서 명백해지기 전에 재발을 감지할 수 있는 큰 잠재력을 가지고 있습니다. 이 환자군에서 원격 전이의 조기 발견은 HPV 음성 환자에 비해 구제 요법 후 전체 생존 기간이 연장될 가능성이 있기 때문에 가치가 있을 수 있습니다. 그리고 작은 종양 부담을 감지하면 생존율을 더욱 향상시킬 수 있습니다.
3. 혈장에서 ctHPVDNA로 재발을 정확하게 감지하면 예정된 후속 약속을 줄이고 대신 혈장 샘플로 환자를 추적하는 것에 대한 논의로 이어질 수 있습니다.

생검으로 입증된 OPC를 가진 모든 환자는 스코네 대학병원 이비인후과-두경부외과(ORL-HNS)로 의뢰되었으며 종합종양위원회(Multidisciplinary Tumor Board, MDT)에서 결정한 대로 최종 치료를 계획하고 있습니다. HPV 양성 종양이 있는 환자만 포함할 수 있습니다.

기본 종료점에 대해 계산된 샘플 크기:

1개월에 검출 가능한 ctHPVDNA에 대한 65%의 민감도는 치료 완료 후 2년 이내에 잔류 또는 재발 종양을 예측하는 데 임상적 가치가 있는 것으로 결정되었습니다. 환자의 15%는 1차 (c)RT 후 완전한 관해에 도달하지 못하거나 2년 추적 기간 동안 재발을 겪는 것으로 추정되었습니다. 따라서 최소 65%의 민감도에는 검정력 80%의 환자 150명의 표본 크기가 필요합니다. Clopper-Pearson을 사용하여 95%의 이항 CI를 계산했습니다.

스웨덴의 OPC 역학에 따르면 환자의 2/3가 남성일 것으로 예상됩니다.

치료 중 절차 및 ctHPVDNA 샘플:

환자는 종양학과/부서에서 처음 방문할 때 연구에 대한 구두 및 서면 정보를 받게 됩니다. ORL의.

사전 동의는 종양학과에서 수집됩니다. 환자들은 5년 동안 추적될 것입니다. 연구는 마지막으로 포함된 환자가 치료 후 3년 동안 추적되었을 때 종료됩니다.

ctHPVDNA 분석을 위한 혈장 샘플은 (c)RT 시작 전 또는 수술 전에 수집됩니다.

주간 샘플, 즉 7개는 방사선 요법(RT) 과정 중에 계획됩니다.

외과적으로 치료받은 환자의 경우 두 개의 샘플이 수집됩니다. 첫 번째는 수술 후 1일째, 두 번째는 수술 후 3일째입니다. 환자에게 보조제 (c)RT가 권장되는 경우 매주 샘플을 위에서 설명한 대로 수집합니다.

치료 평가:

치료 평가 및 감시를 위해 혈장 ctHPVDNA는 치료 완료 후 1개월 후 분석되며, 치료 후 처음 2년 동안은 3개월마다, 치료 후 2~5년에는 6개월마다, 즉 다음에 따라 예정된 후속 약속과 동시에 분석됩니다. 국가 지침에.

(C)RT 후 3개월의 치료 평가를 위해 치료 반응 평가를 위한 PET CT에 대한 추가 정보로 ctHPVDNA 수준을 고려할 것입니다. PET-CT에서 NI-RADS 1-2로 평가되었으나 치료 종료 시 대비 ctHPVDNA 수치가 증가하는 경우 2주 후에 새로운 검사를 시행하여 추가 정밀 검사가 필요한지 여부를 결정합니다. 완전한 PET CT 반응(즉, NI-RADS 1-2) 및 감지할 수 없는 수준의 ctHPVDNA가 있는 환자는 후속 요법으로 바로 진행됩니다. 추가 정밀 검사(예: 반복 영상 촬영 또는 기타 추가 검사 시기)는 MDT의 재량에 따릅니다.

1차 수술 후 3개월 후 치료 평가를 위해 ctHPVDNA 수치 증가는 2주 후 정밀 검사가 필요한지 여부를 결정하기 위한 확인 테스트를 촉발할 것입니다. 환자의 ctHPVDNA 수치가 감소하는 경우 참가자는 후속 요법을 진행합니다.

후속 조치(즉, 6개월 이후) 동안 양성 ctHPVDNA 테스트는 2주 후 새로운 테스트로 확인됩니다. 검출 가능한 ctHPVDNA 수준이 확인되면 PET CT 및 MDT의 재량에 따른 추가 검사를 포함한 재발 검사가 시작되고 그에 따라 일정이 잡힙니다.

기준선 및 후속 데이터:

기준선 데이터에는 연령, 성별, 흡연 상태, 이전의 두경부암(HNC), 진단 날짜, 원발성 종양 하위 부위, TNM 분류/병기, p16-상태, 원발성 종양의 HPV 하위 유형, 치료 전 ctHPVDNA 수준이 포함됩니다.

후속 데이터에는 치료받은 치료, 치료 3개월 후 임상 반응, 예정된 임상 검토에서의 임상 상태 및 임상적 재발 의심에 대한 추가 검토, NI-RADS에 따른 치료 12주 후 PET-CT 반응, HNC, ctHPVDNA i 혈장과 관련된 모든 추가 영상, 치료 중단 및/또는 예정된 검토 종료 이유, 재발, 사망 날짜, 사망 원인, 5년 추적 조사 시 또는 연구가 종료될 때 질병이 있거나 없는 생존 여부 .

회귀:

환자가 잔류 종양으로 진단되거나 치유 의도가 있는 재발이 계획된 경우 ctHPVDNA에 대한 혈장 샘플 계획이 다시 시작됩니다. 재발 후 완화 치료를 시작하면 더 이상 혈장 샘플을 수집하지 않습니다. 양성 세포검사 또는 생검에서 암이 확인되거나 영상에서 진행성 질환이 확인되면 재발이 진단됩니다. 세포학 또는 생검을 수행한 날짜가 재발 날짜로 사용됩니다. 환자가 세포학 또는 생검으로 확인하기에 부적합하다고 판단되는 경우 방사선학적으로 정의된 재발의 첫 번째 의심이 재발 날짜로 사용됩니다.

HPV-DNA 분석 방법:

원발성 종양의 HPV-DNA 유형 식별 및 정량화와 각 환자의 혈장 내 ctHPV-DNA 정량화는 각각 Luminex 및 ddPCR로 수행됩니다. Luminex는 미생물학과에서, 그리고 디지털 액적 중합효소 연쇄 반응(ddPCR)은 Lund에 있는 CMD(Center for Molecular Diagnostics)에서 수행됩니다.

원발성 종양:

포르말린의 종양 샘플을 Lund의 미생물학과로 보냅니다. 그런 다음 FFPE(포르말린 고정 파라핀 포매) 종양 조직의 절편을 미생물학과로 전달합니다. 포르말린 고정 파라핀 내장(FFPE) 조직의 DNA는 미생물학과에서 확립된 표준 방법에 따라 추출됩니다. HPV 유형은 PCR에 이어 Luminex 기반 유전자형 분석에 의해 결정됩니다. 종양이 HPV 양성인 경우 정량적 바이러스 부하(인간 세포당 HPV 복제 수)는 종양에서 입증된 HPV 유형에 특이적인 프라이머 및 프로브를 포함하는 ddPCR에 의해 결정됩니다.

혈장:

혈액 샘플 8.5mL를 진공채혈기 튜브(BD ACD-A 튜브)에 수집하여 Lund의 미생물학과로 보냅니다. 혈장은 미생물학과에서 1700 xRPM에서 원심분리에 의해 분리됩니다. 그런 다음 DSP Circulating DNA 키트(Qiagen)(3mL 입력 60uL 출력)를 사용하여 QIAsymphony 로봇에 의해 자동으로 혈장에서 ctDNA가 추출됩니다. 종양에서 입증된 HPV 유형에 특이적인 프라이머 및 프로브를 사용하는 HPV 유형 특정 ddPCR을 수행하여 바이러스 로드(혈장 mL당 HPV 복제 수)를 결정합니다.

데이터 모니터링:

이 연구는 부분적으로 탐색적이며 부분적으로는 질병 상태를 모니터링하는 방법으로서 ctHPVDNA의 평가로 수행됩니다. 부작용은 예상되지 않습니다. 모니터링 위원회나 중지 지침이 없습니다. 포함 속도를 확보하고 예상치 못한 문제를 평가하기 위해 50명의 환자를 포함시킨 후 중간 분석을 수행할 것입니다. 내부 유효성 검사가 수행됩니다.