마키 베리가 들어간 구미 캔디 (MaquiGUM)

인터벤션에 대한 포함 및 배제 기준 활동량이 적은 자원봉사자 10명이 모집됩니다. 포함 기준: 과체중 또는 비만의 체질량 지수(BMI 25.0 kg/m2 이상); 만성 비전염성 질환 없음; 활동량이 적음(주 3회 30분 미만의 신체 활동). 모든 참가자는 연구 기간 동안 신체 활동, 식이 섭취 및 약물 복용을 유지하도록 요청받을 것입니다. 배제 기준: 혈당 강하제, 항산화제 함유 보충제 및 폴리페놀 고섭취(일일 2g 이상) 사용; 마키 베리 또는 GC 성분에 대한 식품 알레르기; 임신 또는 수유. 본 연구는 발파라이소 대학교 약학부 윤리위원회(CBI 014/2022)의 승인을 받았습니다.

참가자 특성 체중과 키는 BMI 계산을 위해 측정되며, 허리 둘레와 삼두근 피부 주름도 측정됩니다. 식이 빈도 설문지(FFQ)는 연구 전에 회수되어 섬유질 및 총 식이 항산화제 섭취량, 주로 폴리페놀, 카로틴, 비타민 E 및 C 소비량을 추정하는 데 사용됩니다. 모든 인터벤션은 발파라이소 대학교 약학부의 자격을 갖춘 인력에 의해 수행되었습니다.

인터벤션 참가자는 방문 간 1주일의 워시아웃 기간을 두고 세 가지 조건의 피험자 내 급성 인터벤션을 완료할 것입니다: (i) 기준/대조군: 흰 빵 150g(가용 탄수화물 75g); (ii) 흰 빵 + GM: 흰 빵 150g에 GM 24g(구미 3개) 추가; (iii) 흰 빵 + GMM: 흰 빵 150g에 GMM 24g(구미 3개) 추가. 각 참가자는 자신의 대조군 역할을 합니다. 각 연구 일자(대조군, GM, GMM)에 시험 식사 섭취 전 공복 기준 샘플(시간 0)이 채취됩니다. 방문은 표준화된 사전 검사 조건(밤샘 금식, 고정된 오전 일정, 사전 지정된 식이/활동 제한) 하에 1주일 간격으로 별도의 날에 진행됩니다.

대조군 조건 및 기대 편향 완화 대조군 조건으로 흰 빵만 제공되는 날을 혈당 및 항산화 반응에 대한 무마키 대조군으로 사용합니다. 인터벤션에서는 동일한 빵 부하에 구미 24g(3개)을 추가합니다. 연구진은 별도의 "위약 구미"를 포함하지 않을 것입니다. 왜냐하면 본 연구는 객관적인 흰 빵 대조군을 중심으로 설계된 파일럿 연구이며, 감각적으로 구분할 수 없는 무폴리페놀 구미 제작이 어렵기(마키 색소/향미) 때문입니다; 심지어 GM 대 GMM도 우리의 감각 테스트에서 냄새와 맛이 달랐으며, 이는 위약 매트릭스로 블라인딩하는 것이 불완전할 가능성이 있음을 시사합니다. 기대 효과를 제한하고 가능한 편향을 완화하기 위해 연구진은: (i) 객관적 종점(혈당/인슐린/GLP-1; TRAP, SOD, CAT)을 사용; (ii) 표준화된 사전 검사 조건(12시간 금식; 고정된 시간대의 오전 검사; 문서화된 준수를 동반한 식이/활동 제한)을 시행; (iii) 인터벤션 간 1주일 워시아웃을 구현할 것입니다. 모든 비교는 흰 빵 대조군에 대한 개인 내 비교로 이루어질 것입니다.

혈액 샘플 절차 혈액 샘플은 각 인터벤션 시작 시 12시간 밤샘 금식 후 참가자로부터 채취되며, 2시간 동안 수집됩니다. 샘플은 헤파린 나트륨 튜브(최종 농도 0.1%)에 수집됩니다. 인슐린 및 GLP-1 측정을 위해 혈액은 4°C에서 2000×g로 10분간 원심분리되고, 상층액은 -80°C에서 동결됩니다. 항산화 상태 측정을 위해 혈장은 4°C에서 1500×g로 1분간 원심분리하여 적혈구와 분리됩니다. 혈장은 총 반응성 항산화력(TRAP) 분석을 위해 즉시 -80°C에서 동결되며, 적혈구는 소 혈청 알부민(BSA)으로 세척하고 1500×g로 15분간 3회 원심분리하여 매번 상층액을 버립니다. -80°C 저장 전, 적혈구는 카탈라제(CAT, 비율 1:10) 및 초과산화물 디스무타제(SOD, 비율 1:28) 분석을 위해 저삼투압 용액으로 희석됩니다.

항산화 상태 바이오마커 총 반응성 항산화력(TRAP) 간략히, 상층액 10μL를 150μM 2,20-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산)와 10mM 2,20-아조비스(2-아미디노프로판)의 1:1 혼합물과 혼합하며, 이 혼합물은 45°C에서 30분간 사전 배양됩니다. 동역학은 샘플 추가 후 10, 30, 50초에 734nm에서 측정됩니다. 항산화 능력은 Trolox®와 비교하여 측정됩니다.

총 단백질 측정 총 단백질 정량은 SOD 및 CAT 효소 활성을 정규화하기 위해 적혈구를 사용하여 수행됩니다. 이를 위해 Pierce BCA 단백질 분석 키트(Thermofisher)가 사용되며, 알부민 표준(Thermofisher)으로 작성된 알부민 곡선을 기반으로 합니다. 모든 프로토콜은 제조업체 지침에 따라 사용됩니다.

초과산화물 디스무타제(SOD) 이 분석은 크산틴/크산틴 산화효소 시스템에서 초과산화 라디칼에 의한 시토크롬 c 환원을 기반으로 합니다. 간략히, 균질화된 샘플 5μL를 0.5mM 크산틴(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)과 20μM 시토크롬 C(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)와 혼합하며, 이들은 인산 완충액에 용해됩니다. 이 용액은 크산틴 산화효소(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)와 0.1mM EDTA(1:40)와 혼합됩니다. 효소 활성은 Rayleigh UV-2601 분광광도계에서 550nm에서 감지됩니다. 각 샘플은 3중복으로 분석됩니다.

카탈라제(CAT) 카탈라제 활성은 100μL의 0.3M H2O2(Merck, Darmstadt, Germany)를 2.9mL의 인산 완충액(50mM Na2HPO4 및 50mM NaH2PO4, pH 7.8)과 50μL의 샘플로 구성된 반응 혼합물의 240nm에서의 흡광도 감소를 측정하여 결정됩니다. 측정은 Rayleigh UV-2601 분광광도계에서 90초 동안 수행됩니다. 각 샘플은 3중복으로 분석됩니다.

포도당, 인슐린 및 GLP-1 혈액 모세관 샘플은 참가자의 손가락에서 포도당 테스트 스트립(One Touch II)을 사용하여 흰 빵 섭취 전(시간 0) 및 구미 유무에 따른 섭취 후(15, 30, 60, 90 및 120분)에 얻어집니다. 혈액 샘플은 시간 0 및 120분에 인슐린 농도 측정을 위해 채취되며, 이는 제조업체 권장사항에 따른 화학발광 면역분석법으로 측정됩니다. 인간 혈장 GLP-1 수준은 제조업체 지침에 따라 GLP-1 ELISA 키트(BMS2194; ThermoFisher Cientific)를 사용하여 0 및 120분에 측정됩니다. 혈장 포도당, 인슐린 및 GLP-1의 120분마다의 증가 곡선하면적(AUC)은 공복 값을 기준으로 삼아 사다리꼴 법칙을 사용하여 계산됩니다.

통계 분석 표본 크기 및 검정력: 본 연구는 각 참가자가 세 조건(기준, GMM, GM)에서 자신의 대조군 역할을 하고 1주일 워시아웃을 갖는 피험자 내 급성 인터벤션으로 기획된 초기 단계 연구입니다. 피험자 내 설계의 효율성을 고려하여 연구진은 적당한 표본 크기(n = 10 완료자)를 계획하고 있습니다. 민감도 분석은 양측 짝지어진 비교에서 α = 0.05 및 80% 검정력으로 n = 10이 약 Cohen's dz ≈ 0.9-1.0의 큰 표준화된 피험자 내 효과를 탐지할 수 있음을 나타냅니다. Shapiro-Wilk 검정은 데이터의 정규성을 확인하는 데 사용됩니다. Spearman 순위 상관은 각 인터벤션 조건 내에서(GM과 GMM을 별도로 분석) 사용되어 식후 혈당, 인슐린 및 GLP-1 노출(혈당 AUC, 인슐린 AUC 및 GLP-1 AUC)과 항산화 관련 변수: SOD 활성, 혈장 TRAP(TEAC), 카탈라제 활성, FFQ의 식이 섭취량(비타민 C, 비타민 E, 카로틴, 총 폴리페놀 및 섬유질) 간의 연관성을 조사합니다. 연구진은 Spearman 계수와 양측 p-값(n = 10)을 보고할 것입니다. 본 연구의 파일럿 및 가설 생성적 성격을 고려하여, 분석은 탐색적이며 인과성을 함축하지 않습니다; 다중성 조정은 적용되지 않을 것입니다. 다중 비교는 p 값이 0.05 미만을 유의한 것으로 가정하는 Kruskal-Wallis 검정을 사용하여 수행됩니다. 모든 분석은 GraphPad Prism 소프트웨어 버전 9.0으로 수행됩니다.