Gumisie z jagodami maqui (MaquiGUM)

Kryteria włączenia i wykluczenia dla interwencji Dziesięciu wolontariuszy prowadzących siedzący tryb życia zostanie zrekrutowanych.
Kryteria włączenia: wskaźnik masy ciała (BMI) wskazujący na nadwagę lub otyłość (BMI co najmniej 25,0 kg/m²); brak nieprzewlekłych chorób niezakaźnych; oraz siedzący tryb życia (mniej niż 30 minut aktywności fizycznej 3 razy w tygodniu).
Wszyscy uczestnicy będą proszeni o utrzymanie swojej aktywności fizycznej, spożycia żywności i przyjmowania leków przez cały okres badania.
Kryteria wykluczenia: stosowanie leków hipoglikemizujących, suplementów zawierających przeciwutleniacze oraz wysokie spożycie polifenoli (więcej niż 2 g dziennie); alergia pokarmowa na jagody Maqui lub jakikolwiek składnik z GC; ciąża lub laktacja.
Badanie zostało zatwierdzone przez Komisję Etyki Wydziału Farmaceutycznego Uniwersytetu w Valparaíso (CBI 014/2022).

Charakterystyka uczestników Masa i wysokość zostaną określone w celu obliczenia BMI, a także obwód talii i fałd trójgłowy.
Kwestionariusze Częstotliwości Spożycia Żywności (FFQ) zostaną odzyskane przed badaniem w celu oszacowania spożycia błonnika i całkowitej diety przeciwutleniającej, głównie polifenoli, karotenów oraz spożycia witaminy E i C.
Cała interwencja została przeprowadzona na Wydziale Farmaceutycznym Uniwersytetu w Valparaíso przez wykwalifikowany personel.

Interwencja Uczestnicy przejdą ostrą interwencję w ramach trzech warunków, wewnątrzpodmiotową, z tygodniowymi przerwami między wizytami: (i) linia bazowa/kontrola: 150 g białego chleba (75 g dostępnych węglowodanów); (ii) biały chleb + GM: 150 g białego chleba plus 24 g GM (3 żelki); oraz (iii) biały chleb + GMM: 150 g białego chleba plus 24 g GMM (3 żelki).
Każdy uczestnik będzie służył jako własna kontrola.
W każdym dniu badania (kontrola, GM, GMM), próbka na czczo (czas 0) zostanie pobrana przed spożyciem posiłku testowego.
Wizyty będą odbywać się w różnych dniach, w odstępach tygodniowych, w standaryzowanych warunkach przedtestowych (całodobowy post, ustalony poranny harmonogram i określone ograniczenia dietetyczne/aktywnościowe).

Warunek kontrolny i ograniczenie błędu oczekiwania Nasz warunek kontrolny wykorzysta dzień z samym białym chlebem jako kontrolę bez Maqui dla odpowiedzi glikemicznych i przeciwutleniających.
Interwencje dodadzą 24 g żelków (3 jednostki) do tego samego ładunku chleba.
Badacze nie uwzględnią oddzielnego "żelka placebo", ponieważ badanie jest pilotażem zaprojektowanym wokół obiektywnej kontroli białego chleba, a produkcja sensorowo nieodróżnialnego żelka bez polifenoli jest trudna (pigmenty/smak Maqui); nawet GM vs. GMM różniły się zapachem i smakiem w naszych testach sensorycznych, sugerując, że zaślepienie z matrycą placebo prawdopodobnie byłoby niedoskonałe.
Aby ograniczyć efekty oczekiwania i złagodzić możliwe błędy, badacze: (i) wykorzystają obiektywne punkty końcowe (glikemia/insulina/GLP-1; TRAP, SOD, CAT); (ii) wprowadzą standaryzowane warunki przedtestowe (12-godzinny post; testy poranne o stałych godzinach; ograniczenia dietetyczne/aktywnościowe z udokumentowanym przestrzeganiem); oraz (iii) wdrożą tygodniowe przerwy między interwencjami.
Wszystkie porównania będą wewnątrzosobowe względem kontroli białego chleba.

Procedury pobierania próbek krwi Próbki krwi zostaną pobrane od uczestników po 12-godzinnym nocnym poście na początku każdej interwencji i w ciągu 2-godzinnego okresu.
Próbki zostaną zebrane w probówkach z heparyną sodową (końcowe stężenie 0,1%).
Do oznaczeń insuliny i GLP-1, krew zostanie odwirowana przy 2000× g przez 10 minut w 4°C, a supernatat zostanie zamrożony w -80°C.
Do pomiarów statusu przeciwutleniającego, osocze zostanie oddzielone od czerwonych krwinek poprzez wirowanie przy 1500× g przez 1 minutę w 4°C.
Osocze zostanie natychmiast zamrożone w -80°C do późniejszej analizy całkowitej reaktywnej mocy przeciwutleniającej (TRAP), podczas gdy czerwone krwinki zostaną umyte z bydlęcą surowicą albuminową (BSA), odwirowane 3 razy przy 1500× g przez 15 minut, za każdym razem odrzucając supernatat.
Przed przechowywaniem w -80°C, czerwone krwinki zostaną rozcieńczone roztworem hipotonicznym dla katalazy (CAT, stosunek 1:10) i dysmutazy ponadtlenkowej (SOD, stosunek 1:28) do dalszej analizy.

Biomarkery statusu przeciwutleniającego Całkowita Reaktywna Moc Przeciwutleniająca (TRAP) W skrócie, 10 µL supernatantu zostanie zmieszane z mieszaniną 1:1 150 µM 2,20-azyno-bis(3-etylobenzotiazolino-6-sulfonowego kwasu) i 10 mM 2,20-azobis(2-amidynopropanu), wcześniej inkubowaną w 45°C przez 30 minut.
Kinetyka zostanie określona przy 734 nm po 10, 30 i 50 sekundach od dodania próbki.
Pojemność przeciwutleniającą zmierzy się porównując z Trolox®.

Pomiar całkowitego białka Ilościowe oznaczanie białka całkowitego zostanie wykonane z użyciem erytrocytów do normalizacji aktywności enzymów SOD i CAT.
W tym celu zostanie użyty zestaw Pierce BCA Protein Assay Kit (Thermofisher), oparty na krzywej albuminowej wykonanej z Albumin Standart (Thermofisher).
Wszystkie protokoły będą stosowane zgodnie z zaleceniami producenta.

Dysmutaza ponadtlenkowa (SOD) Ten test opiera się na redukcji cytochromu c przez rodnik ponadtlenkowy w układzie ksantyna/oksydaza ksantynowa.
W skrócie, 5 µL homogenizowanych próbek zostanie zmieszane z 0,5 mM ksantyną (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) i 20 µM cytochromem C (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) rozpuszczonymi w buforze fosforanowym.
Ten roztwór zostanie zmieszany z oksydazą ksantynową (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) i 0,1 mM EDTA (1:40).
Aktywność enzymatyczna zostanie wykryta przy 550 nm w spektrofotometrze Rayleigh UV-2601.
Każda próbka zostanie przeanalizowana w trzech powtórzeniach.

Katalaza (CAT) Aktywność katalazy zostanie określona poprzez pomiar utraty absorbancji przy 240 nm mieszaniny reakcyjnej składającej się z 100 µL 0,3 M H2O2 (Merck, Darmstadt, Niemcy) w 2,9 mL buforu fosforanowego (50 mM Na2HPO4 i 50 mM NaH2PO4, pH 7,8) i 50 µL próbek.
Pomiary będą wykonywane przez 90 sekund w spektrofotometrze Rayleigh UV-2601.
Każda próbka zostanie przeanalizowana w trzech powtórzeniach.

Glukoza, Insulina i GLP-1 Próbki krwi włośniczkowej zostaną pobrane z palca uczestnika za pomocą pasków testowych glukozy (One Touch II) przed spożyciem białego chleba (czas 0) i po spożyciu z lub bez żelków (po 15, 30, 60, 90 i 120 minutach).
Próbki krwi zostaną pobrane do stężeń insuliny w punktach czasowych 0 i 120 minut, które zostaną zmierzone za pomocą testu immunochemiluminescencyjnego zgodnie z zaleceniami producenta.
Poziomy GLP-1 w osoczu ludzkim zostaną zmierzone w 0 i 120 minutach za pomocą zestawu GLP-1 ELISA Kit (BMS2194; ThermoFisher Scientific) zgodnie z instrukcjami producenta.
Przyrostowy obszar pod krzywą (AUC) dla każdego 120 minut glukozy w osoczu, insuliny i GLP-1 zostanie obliczony za pomocą reguły trapezów z wartościami na czczo uznanymi za linię bazową.

Analiza statystyczna Wielkość próby i moc: To badanie zostało zaprojektowane jako wczesnofazowa, ostra, wewnątrzpodmiotowa interwencja, w której każdy uczestnik służył jako własna kontrola w trzech warunkach (linia bazowa, GMM, GM) z tygodniową przerwą.
Biorąc pod uwagę efektywność projektów wewnątrzpodmiotowych, badacze planują skromną wielkość próby (n = 10 ukończonych).
Analiza wrażliwości wskazuje, że dla dwustronnych porównań sparowanych z α = 0,05 i 80% mocą, n = 10 może wykryć duży standaryzowany efekt wewnątrzpodmiotowy około Cohen's dz ≈ 0,9-1,0.
Test Shapiro-Wilka zostanie użyty do potwierdzenia normalności danych.
Korelacje rang Spearmana zostaną użyte w każdym warunku interwencji (analizując GM i GMM osobno) do zbadania związków między poposiłkowymi ekspozycjami glikemicznymi, insulinemicznymi i GLP-1 (glikemiczny AUC, insulinowy AUC i GLP-1 AUC), a zmiennymi związanymi z przeciwutleniaczami: aktywność SOD, osoczowy TRAP (TEAC), aktywność katalazy i spożycia dietetyczne z FFQ (witamina C, witamina E, karoteny, całkowite polifenole i błonnik).
Badacze podadzą współczynnik Spearmana i dwustronne wartości p (n = 10).
Biorąc pod uwagę pilotażowy, generujący hipotezy charakter badania, analizy będą eksploracyjne i nie implikują przyczynowości; korekty na wielokrotne porównania nie zostaną zastosowane.
Wielokrotne porównania zostaną wykonane za pomocą testu Kruskala-Wallisa przy założeniu wartości p mniejszej niż 0,05 jako istotnej.
Wszystkie analizy zostaną wykonane z oprogramowaniem GraphPad Prism wersja 9.0.