침습성 폐 아스페르길루스증에 대한 기관지폐포세척 횡류장치 검사: 다기관 연구

프로젝트 전망 IPA의 조기 진단을 위한 민감하고 특정한 바이오마커는 생존을 개선하기 위해 시급히 필요합니다. 이 다기관 연구에서 우리는 IPA의 초기 병상 진단을 위한 새로운 측면 흐름 장치 테스트의 가능성을 평가할 것입니다.

연구 가설을 성공적으로 구현하려면 IPA 분야의 견고한 배경이 필요합니다. 이를 고려할 때 나는 나의 전문적 경험과 호스트 기관 및 관련 실험실의 기술 및 과학적 전문 지식이 결합되어 매우 경쟁력 있고 유망한 환경을 조성한다고 확신합니다. 제안된 연구의 성공 여부는 협업에 크게 좌우됩니다. 지난 4년 동안 나는 혈액종양 악성종양 환자들 사이에서 IPA 분야에서 광범위하게 일했으며, 이를 통해 프로젝트의 성공에 필수적인 필요한 접촉과 협력을 확립할 수 있었습니다. 따라서 이 다기관 연구의 주요 강점은 3명의 뛰어난 전문가(Prof. Lass-Flörl, Buchheidt 교수 및 Willinger 교수)는 최근 몇 년/10년 동안 IPA 진단 분야에서 광범위하게 발표했습니다. 나는 우리의 결과가 IPA의 전체 분야에 대해 광범위하게 구현될 것이라고 확신합니다. 분명히 그들은 새로운 현장 진료 애플리케이션의 임상 성능에 대한 우리의 이해를 크게 향상시킬 것입니다.

이 프로젝트는 환자 치료에 큰 영향을 미칠 것으로 예상됩니다. 측면 흐름 장치 테스트의 확립은 신속하고 정직하게 침대 옆에서 사용 가능한 테스트 결과로 이어질 수 있으므로 생명을 구하는 데 도움이 될 수 있는 적절한 항진균 요법을 조기에 시작할 수 있습니다.

1. 배경

   침습성 진균 감염(IFI)은 혈액종양 악성종양 환자의 이환율과 사망률의 중요한 원인입니다(1-3). 침습성 곰팡이 감염(IMI), 특히 침습성 아스페르길루스증(IA)은 이러한 환자들 사이에서 IFI의 주요 원인이며 침습성 칸디다 감염이 그 뒤를 따릅니다(2, 4). 적절한 치료가 없을 경우 80-90%의 조악한 사망률로 인해 시기 적절한 진단과 항진균제 치료의 조기 시작이 IFI의 성공적인 치료에 핵심 요소입니다. 다양한 연구에서 항진균제 치료의 조기 시작이 IFI 생존을 80% 이상으로 향상시킬 수 있음을 보여주었습니다(5, 6). 그러나 IFI의 임상 징후와 증상 및 방사선 소견은 종종 불특정합니다. 따라서 일관되게 조기에 설득력 있는 진단을 내릴 수 없다는 것이 하나의 핵심 문제로 남아 있습니다. EORTC(European Organization for Research and Treatment of Cancer Invasive Fungal Infections Cooperative Group)와 국립알레르기전염병연구소(National Institute of Allergy and Infectious Disease, MSG)의 Mycoses Study Group은 기회주의적 IFI에 대한 합의된 정의를 확립함으로써 이 문제를 해결하는 데 어느 정도 성공했습니다(7 ). 그러나 EORTC/MSG 가이드라인의 정의는 문헌 검토뿐만 아니라 전문가 의견 및 후속 국제적 합의를 기반으로 합니다. 주된 이유는 정의의 세부 사항을 평가하는 연구가 부분적으로 단순히 사용할 수 없었기 때문입니다. 최근 코호트 연구에서 우리 작업 그룹은 기준에 대한 몇 가지 수정을 제안했습니다(8).

   EORTC/MSG 기준을 사용할 때 IFI의 유병률은 얻기 쉽지 않은 균학적 증거에 크게 의존합니다. 문화 기반 진단 접근법은 IFI 위험이 있는 환자의 심각한 의학적 상태로 인해 종종 방해를 받는 침습적 진단 절차를 요구할 뿐만 아니라 실제로 자주 위음성 결과를 초래합니다. 따라서 IFI의 부담에 대한 현실적인 그림을 만들고 IFI 환자의 조기 진단 및 치료를 가능하게 하기 위해 신속하게 이용 가능한 검사 결과를 가진 항원 검사가 점점 더 중요해지고 있습니다(1). 항원 검사는 조기 진단을 용이하게 할 뿐만 아니라 잦은 과잉 치료를 예방할 수 있습니다. 여러 프랑스 병원에서 하루 동안 항진균제 치료를 평가한 Azoulay와 동료들의 최근 연구에 따르면 실제로 항진균제를 투여받은 대부분의 환자는 IFI가 없었습니다(9). 과잉 치료는 비용을 상당히 증가시킬 뿐만 아니라(대부분의 항진균제에 대한 일일 비용 600-1000€) 내성 발달로 이어질 수도 있습니다(10). 매우 민감하고 특이적으로 신속하게 이용 가능한 항원 검사/바이오마커의 사용은 임상의가 실제로 IFI를 가지고 있기 때문에 치료의 혜택을 받는 환자에게만 항진균제 치료를 시작하도록 안내할 수 있습니다. 마지막으로 중요한 항원 검사는 조기 반응 평가, 치료 모니터링 및 IA 환자의 항진균제 치료 중단 시기 결정을 포함한 치료 계층화에도 유용할 수 있습니다(11-12).

   GM 테스트의 주요 제한 사항 중 하나는 주로 일상적으로 테스트하는 표본의 수에 따라 센터마다(하루 미만에서 최대 며칠까지) 결과에 도달하는 시간이 다르다는 것입니다(테스트가 96개 플레이트로 수행되기 때문입니다. 테스트), 임상 환경과 테스트가 수행되는 검사실 사이의 이동 거리/시간. 이러한 한계는 영국 Exeter 대학의 Thornton 교수가 개발한 IA용 현장 검사인 측면 흐름 장치 검사로 극복됩니다. 이 단일 샘플 테스트는 BAL 및 혈청 검체를 사용하여 모든 실험실에서 쉽게 수행할 수 있으며 결과를 얻는 데 걸리는 시간은 약 20분입니다. 최근 연구는 인간 BAL 및 혈청 샘플에서 테스트의 엄청난 잠재력을 보여주었습니다(13-15). 아주 최근 연구에서 우리 실무 그룹은 혈액학적 악성 종양 환자와 고형 장기 이식(SOT) 후 환자의 기관지 폐포 세척(BAL) 샘플을 사용하여 LFD 검사를 후향적으로 평가했습니다. 37명의 환자의 39개 BAL 샘플이 포함되었습니다(29개 샘플 혈액 악성 종양 및 10개 샘플 SOT; 12개 가능한 IPA, 9개 가능한 IPA, 16개 IPA 없음). 가능한 IPA에 대한 BAL LFD 테스트의 민감도와 특이도는 각각 100%와 81%였습니다. LFD가 음성인 경우의 GM 수치는 LFD가 양성인 환자보다 유의하게 낮았다(P<0.0001). 우리는 BAL 표본의 LFD 테스트가 쉽게 수행되고 정확하고 신속하게 사용할 수 있는 결과를 제공한다고 결론지었습니다. 따라서 이 새로운 현장 검사는 혈액 악성 종양 및 SOT 환자의 BAL 표본에서 IPA를 검출하기 위한 매우 유망한 진단 방법일 수 있습니다(16). 또 다른 최근 연구는 호중구 감소증 기니 피그 모델에서 LFD 분석이 여러 실험실과 연구 간에 재현 가능함을 입증했습니다(17). 그러나 테스트를 추가로 평가하려면 다기관 연구가 필요합니다(16).

   제안된 연구에서 우리는 BAL 측면 흐름 장치 테스트를 평가하고 결과를 일상적으로 수행되는 Galactomannan 값과 배양 및 PCR 결과와 비교할 것입니다.

2. 연구 설계 및 방법 2.1. 연구 설계 연구 설계는 탐구적이고 후향적이며 다중 중심적입니다. 연구는 13개월 동안 2013년 3월에 시작됩니다.

   2.2. 연구 사이트

   1. 오스트리아 그라츠 의과대학 내과 감염내과
   2. 오스트리아 인스브루크 의과대학 위생의료미생물학부
   3. 오스트리아 비엔나 의과대학 임상미생물학부
   4. 독일 하이델베르크 대학교 만하임 대학교 병원

   2.3. 연구 모집단 침습성 폐 아스페르길루스증의 위험이 있는 성인 환자로부터 저장되었거나 일상적으로 얻은 모든 BAL 샘플은 연구에 포함될 수 있습니다. 치료하는 임상의는 BAL 측면 흐름 장치 테스트 결과를 보지 못하므로 테스트는 환자 관리/치료 결정에 영향을 미치지 않습니다. 치료하는 임상의는 BAL 측면 흐름 장치 테스트 결과에 눈이 멀게 됩니다. 따라서 테스트 결과는 임상/치료 결정에 영향을 미치지 않으므로 포함된 환자에게 영향을 미치지 않습니다.

   기저 질환, IFI의 EORTC 상태(둘 다 BAL 샘플과 함께 제공되는 임상 순서에서 이용 가능) 및 기타 미생물학적/진균학적 검사 결과가 전자 데이터베이스에 기록됩니다. 환자와 관련된 개인 데이터는 필요하지 않습니다.

   2.3.1 주요 포함 기준

   1. 18세 이상의 환자.
   2. 일상적인 임상에서 얻은 BAL 샘플.

   3. IFI의 위험이 있습니다(주치의에 따름). 위험 요인에는 다음이 포함될 수 있습니다.

      • 열성 호중구 감소증
      • 유도 화학 요법
      • 동종 줄기 세포 이식/이식 대 숙주 질환
      • IFI가 의심되는 임상/방사선/진균학적 소견
      • 고형 장기 이식
      • ICU 환자
      • 간경화 2.3.2 주요 제외 기준
   1. 18세 미만.
   2. 임상 일상에서 얻은 BAL 샘플이 없습니다.

   d.) IFI에 대한 위험이 없습니다.

   2.4. 측면 흐름 장치 테스트 앞서 설명한 측면 흐름 장치는 침습성 아스페르길루스증의 위험이 있는 환자의 BAL에서 평가됩니다. 간략하게 설명하면, Aspergillus의 활발한 성장 동안 구성적으로 분비되는 세포외 항원의 에피토프에 대한 면역글로불린 G(IgG) 단클론 항체(JF5)는 다공성 니트로셀룰로오스 막의 포획 구역에 고정됩니다. JF5 IgG는 또한 콜로이드 금 입자에 접합되어 검출 시약 역할을 합니다. 표적 항원과 결합한 항체-금 접합체를 포함하는 방출 패드에 BAL 유체(100 μl의 순수한 시료, 전처리 없음)를 첨가한 후 다공성 막을 통과하여 고정화된 JF5 IgG 단일클론 항체와 결합 캡처 영역. 측면 흐름 장치(LFD) 결과는 샘플을 로드한 후 15분 후에 판독됩니다. 결합된 항원-항체-골드 복합체는 항원 농도에 비례하는 강도를 갖는 빨간색 선(테스트의 경우 T)으로 관찰되며 음성, 약한 양성, 중간 양성 또는 강한 양성으로 분류됩니다(그림 1). 별도의 영역(대조군의 경우 C)에서 막에 고정된 항마우스 면역글로불린은 내부 대조군 역할을 합니다(13, 15). 자세한 제품 정보는 첨부된 간행물 "침습성 아스페르길루스증의 신속한 혈청진단을 위한 면역크로마토그래피 측면 흐름 장치 개발"(14)에서 확인할 수 있습니다.

   장치가 의료 진단 장치로 유럽에서 사용하도록 CE 마크를 획득하는 과정에 있기 때문에 현재 결과는 다중 센터 프로토타입 테스트 비교로만 볼 수 있습니다(환자 관리에 대한 임상적 영향 없음).

3. 통계적 고려 사항 다변량 분석을 포함한 통계적 분석은 ao와 협력하여 수행됩니다. 대학 Prof. Dipl.-Ing. 닥터테크. 그라츠 의과대학 및 의과대학 의료 정보학, 통계 및 문서화 연구소의 Josef Haas 도즈. 잡지. 잘츠부르크 대학의 Herbert Schwetz 박사.

3.1. 샘플 크기 계산 탐색적 연구 설계로 인해 통계적 샘플 크기 계산이 불가능합니다. 샘플 크기는 관련 센터에서 최근 발표된 역학 데이터를 사용하여 계산되었습니다(3, 16). 조사할 환자의 제안된 수는 추가 연구를 위한 데이터를 생성하기에 대표적이고 적절하며 통계 고문이 적절하다고 간주했습니다.

3.2. 통계 분석 통계 분석은 위에서 언급한 당사의 전문 협력업체와 협력하여 SPSS를 사용하여 수행됩니다.

참조

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