MORUS ALBA 열매 추출물과 클로르헥시딘이 타액 연쇄상 구균 뮤탄스 및 pH 수준에 미치는 효능

서론 Streptococcus mutans는 충치 발생에 관여하는 주요 병원균입니다. 이것은 혐기성 그람 양성 구균으로 구강 미생물군에 자연적으로 존재하며 치아 표면에 쉽게 군집할 수 있고 세포외 다당류를 결합하여 산 생성을 시작하여 치아의 탈회 및 충치 발생을 초래합니다(Shah et al., 2018). . 콜로니화된 표면의 양은 타액의 뮤탄스 연쇄상 구균과 관련이 있습니다. 따라서, 구강 내 뮤탄스 연쇄상구균의 농도를 감소시킴으로써 충치 유발 미생물의 발생을 감소시키는 데 상당한 이점을 가질 것입니다. (Lemos et al., 2019, Forssten et al., 2010, Banas and Drake., 2018) 치아우식증은 구강의 미생물성 질환으로 구강 내 무기물의 탈회와 치아의 유기물의 용해로 확인된다. 이. 치아우식증은 역사를 통틀어 인지되어 전 세계적으로 존재하며, 44%로 보고되었지만 국가마다 심각도와 유병률이 다릅니다(J.V Soames and J.C Southam et al., 2018). 이웃 국가에서는 치아 우식증의 빈도가 상당히 높으며 중국, 이란 및 인도에서 각각 68%, 65% 및 64%로 문서화되었습니다. 파키스탄의 치아우식증 유병률도 약 62%로 상당히 높으며 이는 상당한 이환율 및 경제적 결과와 관련이 있습니다(Reddy KS, et al., 2017, Lu Liu et al., 2013). 치아 구조, 치아 표면에 형성된 당 및 생물막(Pitts, N. B et al., 2016). 충치 과정은 치아의 탈회 및 재광화 기간을 변경하는 것으로 구성되며, 순 탈회가 적절한 시간에 걸쳐 발생하면 충치가 시작됩니다. 치아우식증의 원인은 구강세균이 당분을 발효시켜 생성되는 젖산이다(Banas and Drake., 2018). 타액의 정상적인 pH 수치는 6.2~7.6입니다. 중성 pH에서는 타액의 칼슘과 인산이온이 법랑질에 결합하여 법랑질의 구조를 유지하지만 pH가 정상 이하, 즉 5.5 이하로 떨어지면 법랑질에서 칼슘과 인산이온이 용출되어 법랑질의 수산화인회석 결정에서 플라크로 미네랄 이온이 교환되어 치아의 탈회가 발생합니다(J.V Soames Oral pathology 2018).

충치 관리는 식습관을 바꾸고, 박테리아 성장을 변경하거나 억제하고, 침의 pH 수준과 완충 능력을 변경하여 치아 탈회를 줄이는 것을 강조합니다(Khirtika et al., 2017, Velmurugan et al., 2013, Yang et al., 2018). 충치 유발 미생물을 겨냥하여 구강 위생을 개선하고 치아 우식증을 예방하기 위해 다양한 항균성 합성 구강 세정제, 치약, 젤, 껌 및 바니시가 사용되었습니다. 충치 예방은 식사 후 양치질, 불소 치약, 항균 구강 세척제, 치간 세정 보조제, 타액 자극제(자일리톨, 만니톨), 소와 및 열구 밀봉제, 치아 표면에 국소 불소 도포를 통해 이루어집니다. 양치질은 또한 잇몸 염증을 줄이고 플라크 형성을 억제합니다(Velmurugan et al., 2013, Chen and Wang, 2010, Zajkani et al., 2018). 구강 세정제는 항우울증 효과가 있지만 몇 가지 단점이 있습니다. 비용이 많이 들고 치아 착색 및 구강 내 작열감을 포함한 부작용이 있습니다(Nayak et al., 2012, Aoun et al., 2018).

클로르헥시딘은 플라크 축적을 줄이기 위해 일반적으로 사용되는 가장 효과적인 화학적 접근 방식인 금본위제입니다. 매일 클로르헥시딘(0.2%)으로 입을 헹구면 구강 내 뮤탄스 연쇄상 구균의 성장 속도가 감소하는 것으로 나타났습니다(Velmurugan et al., 2013). 그러나 구강 점막 침식, 귀밑샘 부종, 치아 착색, 작열감 및 쓴맛과 같은 특정 부작용이 있습니다. (Jacob and Nivedhitha, 2018b, Shah et al., 2018, Van der Weijden et al., 2010, Nayak et al., 2012, Solderer et al., 2019) 많은 인구가 다양한 질병에 대한 전통적 또는 대체 치료법으로 약용 식물을 사용합니다. 더 나은 안전성 프로파일, 건강에 유익한 효과, 더 낮은 비용 및 쉬운 가용성으로 인해. 의약 목적으로 사용되는 식물 종 중에는 Morus 속 식물이 있으며 가장 일반적으로 사용되는 종은 Morus alba, rubra 및 nigra이며 생명을 위협하는 다양한 감염에 대한 항균 특성도 나타냅니다(Ercisli S et al., 2006). Morus alba는 일반적으로 흰색 뽕나무라고 불리며 Morus 뽕나무과에 속하며 그렇지 않으면 Tut, shahtoot 또는 뽕나무라고도합니다. Morus Alba(흰 뽕나무)는 중국, 인도, 파키스탄 및 일본이 원산지입니다(Kumar V et al., 2008). 현재 연구에서 Morus alba 과일 추출물은 항균 특성으로 인해 구강 병원균에 대해 Streptococcus mutans에 대한 chlorhexidine과 비교할 것입니다.

문제 설명 치아 우식증은 파키스탄을 포함하여 전 세계적으로 널리 퍼져 있습니다. 그것은 치아 손실, 부정 교합 및 측두 하악 관절 문제를 유발합니다. 관련된 감염은 표면 및 심부 근막 공간으로 퍼질 위험이 있으며 심지어 생명을 위협하는 감염을 일으킬 수도 있습니다. 충치 치료는 상당히 비싸고 이미 빈곤한 사회경제적 인구에 경제적 부담을 안겨줍니다. 따라서 우수한 안전성 프로파일과 함께 우식 활동을 감소시키기 위해 항균 및 기타 유익한 효과를 가질 수 있는 천연 제품을 쉽게 구할 수 있고 비용 효율적으로 탐색할 필요가 있습니다.

연구 질문 Morus alba 과일의 수성 추출물은 치아우식증 예방에 클로르헥시딘 구강청결제만큼 효과적입니까? 목적 충치 환자의 타액 내 뮤탄스 연쇄상 구균 수 감소에 근거하여 모러스 알바 열매 추출물과 클로르헥시딘의 효능을 비교합니다.

충치 환자의 타액 pH 수준 증가에 근거하여 모러스 알바 열매 추출물과 클로르헥시딘의 효능을 비교합니다.

이론적 근거 클로르헥시딘은 화학물질로 쓴맛이 있고 구강 내 작열감을 유발하며 미용상의 이유로 환자에게 적합하지 않을 수 있습니다. 구강 병원균에 대한 항균 활성을 갖는 약초 제품에서 추출한 구강 세척제는 임상 설정에서 치아 우식증의 부담을 줄이기 위해 경제적이고 안전한 치료 옵션을 제공할 수 있습니다. 우리가 아는 한, 뽕나무 열매 추출물은 Streptococcus mutans를 포함한 구강 병원균에 대한 항균 활성에 대해 평가되지 않았습니다.

가설

귀무 가설:

Ho: 모러스 알바 열매의 수성 추출물은 충치 예방에 클로르헥시딘 구강청결제만큼 효과적이지 않습니다.

대체 가설:

하: 모러스 알바 열매의 수성 추출물은 치아우식증 예방에 클로르헥시딘 구강청결제만큼 효과가 있습니다.

문헌 검토 충치는 치아 구조, 당, 치아 표면의 미생물 생물막 사이의 연결로 구성됩니다(Pitts, N. B et al., 2016). Streptococcus mutans와 타액 pH는 치아우식증을 유발하는 두 가지 주요 요인이므로 이를 표적으로 삼는 것이 이 세계적인 질병을 해결하는 효율적인 경로가 될 수 있습니다. 클로르헥시딘은 우수한 항균제이며 구강 건강과 위생을 유지하는 데 도움이 되는 것으로 간주됩니다. 마찬가지로 클로르헥시딘만큼 효과적인 많은 약초가 도입되었습니다. (Sajjan et al., 2016, Ahmed et al., 2017, Jacob and Nivedhitha, 2018, Carounanidy et al., 2007, Esther et al., 2017) 약용 식물은 다음과 같은 이유로 많은 집단에서 치료제로 사용되었습니다. 쉬운 가용성, 안전 및 비용 효율성. 뽕나무 종은 또한 의학적 특성을 가지고 있으며 항당뇨병, 신경보호, 지질저하제 및 완하제로 사용되었습니다(Anna Gryn-Rynko et al., 2016). 전 세계적으로 100종이 넘는 뽕나무가 있으며 파키스탄에는 25종의 뽕나무가 있습니다. 가장 흔한 뽕나무속 종은 Morus alba, rubra 및 nigra입니다(Imran M., Khan H., et al., 2010).

모러스 알바 열매는 플라보놀, 폴리페놀, 알칼로이드 및 다당류와 같은 많은 활성 물질을 함유하고 있습니다(Gundogdu M et al., 2011). 모러스 알바는 비타민 A, 비타민 B1, 엽산, 비타민 C, 미네랄, 탄수화물, 아미노산, 지방산, 안토시아닌 및 사포닌의 풍부한 공급원입니다(Jiang Y et al., 2015).

기존의 중국 천연 약물에서 뽕나무 열매는 당뇨병, 고혈압, 빈혈 및 관절통을 치료하기 위해 사람들의 약물에 사용되었습니다. 모러스 알바는 항당뇨병, 구충제, 항균, 항불안, 간 보호 및 신장 보호 특성으로 알려져 있습니다(Wang, J.; et al., 2013, Yang, X. L et al., 2010, Khalid, S et al., 2017 ). 뽕나무 열매는 같은 종이지만 항산화 특성과 화학 성분이 다를 수 있습니다. 모러스 알바의 미네랄 성분에는 칼륨(K), 나트륨(Na), 인(P), 칼슘(Ca), 아연(Zn), 철(Fe), 구리(Cu), 망간(Mn), 셀레늄(Se)이 포함됩니다. ), 마그네슘(Mg), 크롬(Cr) 및 비소(As)(Liang, L et al., 2012).

모러스 알바 껍질의 메탄올 추출물과 그 성분은 항균제로 사용됩니다(Kuete, et al., 2009). Morus alba 뿌리 껍질에서 얻은 항균제 "kuwanon G"는 8.0 μg/ml의 MIC에서 Streptococcus mutans에 대한 활성을 나타냈습니다. kuwanon G의 살균 시험은 Streptococcus mutans를 농도 20 μg/ml에서 60초 만에 완전히 불활성화시키는 것으로 나타났다(Park, K. M et al., 2002).

Jha et al에 따르면 그는 그람 양성균(Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis) 및 그람 음성균(Pseudomonas aeruginosa 및 Escherichia coli)에 대한 Morus alba 잎(수성 추출물)의 항균 활성을 평가했습니다. 항균 활성 결과 Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus 및 Escherichia coli가 조추출물에 가장 민감한 균종임을 확인하였으며, 0.2-26mg/mL(S. Jha, A.K et al., 2013).

1-deoxynojirmiycin(모루스 알바 잎의 성분)과 모루스 알바 잎의 조 에탄올 추출물의 항균 활성을 평가했습니다. 1-deoxynojirmiycin과 뽕나무 잎(조추출물) 모두 Streptococcus mutans에 대해 강한 정균 활성을 보였지만, 1-deoxynojirmiycin은 뽕나무 조추출물(125mg/mg/mL)보다 낮은 MIC 값(15.6mg/ml)을 보였다. ( B. 이슬람., 외 2008). 모러스 알바 잎의 에탄올 추출물은 Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida krusei, Candida albicans, Aspergillus flavus 및 Candida tropicalis에 대한 항균 활성을 나타냈습니다(Oliveira et al., 2015).

안토시아닌은 항균, 항산화, 신경 보호 및 항염증 특성과 같은 많은 생물학적 활동을 담당하는 페놀 화합물인 Morus alba 과일의 가장 중요한 구성 요소입니다(Liu LK et al., 2008). 시아니딘-3-글루코시드 및 시아니딘-3-루티노시드는 뽕나무 열매에서 분리되는 주요 안토시아닌이다(Suh H.J et al 2003, Liu X.et al 2004). 모러스 알바의 활성 성분은 안토시아닌이며 모루스 종의 열매에 존재하는 안토시아닌은 대장균, 녹농균 및 황색포도상구균에 대한 항균 활성을 나타냈다(Chen H., et al 2017). 안토시아닌이 항균 효과를 생성하는 제안된 메커니즘에는 핵산과 단백질의 누출과 함께 병원체의 세포막에 대한 작용이 포함됩니다(Bajpai et al., 2013). 안토시아닌은 미생물의 슈퍼옥사이드 디스뮤타제, 알칼리성 포스파타제 및 ATP 생성을 억제하여 TCA 주기를 억제합니다(Li et al., 2010). 이러한 모든 메커니즘은 병원성 세포의 용해를 초래합니다.

Shumaila Naz 등은 수인성 미생물 병원체(Listeria monocytogene, Salmonella enteric, Moraxella catarrhalis, Legionella pneumophila, Micrococcus luteus, Proteus mirabilis, Clostridium sp., Serratia sp., Aeromonas hydrophila, Corneybacterium sp.)에 대한 뽕나무 열매 추출물의 항균 활성을 확인했습니다. ., Bacillus subtilis, E. coli, Bacillus megaterium, Bacillus thuringiensis, Streptococcus pyogenes, Actinomyces sp., Staphylococcus aureus, Vibrio cholera, Salmonella typhi, Bacillus anthracis 및 Streptococcus pneumonia)는 다른 물 샘플에서 분리되었습니다. 결과는 뽕나무 열매 추출물이 수인성 미생물 병원균에 효과적이라는 것을 나타냅니다(Shumaila Naz et al., 2018).

모러스 알바의 안전성 프로필 1gm/kg의 최대 용량으로 7일 동안 쥐에게 모루스 알바 추출물을 위내 투여한 결과 독성 효과가 나타나지 않았습니다(Jiao Y et al., 2017). 쥐에게 250mg/kg 용량으로 2주간 모러스 알바 에탄올 추출물을 투여했을 때 독성 효과가 나타나지 않은 쥐를 대상으로 한 연구(Hwang et al., 2016). 뽕나무 열매에서 추출한 안토시아닌을 먹인 쥐에 대한 또 다른 연구. 안토시아닌은 쥐의 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST) 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제 ALT 수치를 감소시켰습니다. (간보호 효과) 샘플 크기 계산 샘플 크기는 다음 통계를 고려하여 Open Epi 샘플 크기 계산기를 사용하여 추정했습니다. pH 수준 변화(Chlorhexidine) = 6.88±0.20(Velmurugan et al., 2013), 뽕나무 추출물의 pH 20% 차이를 8.256±0.24로 고려 검정력= 90% 신뢰수준= 95% 계산된 표본 크기는 각 그룹에서 1로 나왔습니다. 그러나 정규성 가정에 따라 각 그룹에 40명의 환자가 있는 120명의 환자를 포함할 것입니다.

연구 방법론 연구 환경 이 연구는 Lasbella 지역 Uthal의 치의학과와 Lasbella 농업, 수자원 및 해양 과학 대학(LUAWMS) Balochistan의 식물 병리학과에서 수행될 것입니다.

연구 설계 무작위 통제 임상 시험 이중 맹검 연구로서 연구원과 환자 모두 결과를 편향되지 않게 유지하기 위해 눈이 멀게 됩니다. 그러나 공동 조사자는 환자가 금 표준 또는 약초 ​​구강청결제를 받고 있음을 알 수 있습니다.

연구 기간 연구 기간은 Ziauddin University의 RAC, ERC 및 BASR에서 연구 승인 후 6개월에서 1년입니다.

샘플링 기법 비확률 연속 샘플링 기법이 샘플 선택에 사용됩니다.

선택 기준 포함 기준 18-40세의 모든 환자는 입에 20개 이상의 치아가 있고 사랑니는 포함하지 않습니다.

어느 성별의 환자. 활성 및 치료되지 않은 우식 병변이 있는 환자(적어도 하나의 우식 치아가 환자의 구강에 존재해야 함).

제외기준 교정치료 중인 환자 이미 항생제 치료 또는 항균 린스를 받고 있는 환자 클로르헥시딘 구강청정제에 알레르기가 있는 환자 동의를 얻지 못한 환자 연구에 사용된 재료 및 방법 연구에 사용된 재료는 클로르헥시딘 구강청결제, 모러스 알바 열매, pH 측정기, Streptococcus mutans에 대한 선택적 한천 및 배양 플레이트, 테스트 튜브 및 타액 수집 키트.

MORUS ALBA COLLECTION Morus alba(White Mulberry) 과일은 정통 허브 매장에서 구입하고 Morus alba 과일은 LUAWMS의 식물학 부서에서 인증합니다.

MORUS ALBA FRUIT의 수성 추출물 준비 준비는 식물 병리학 LUAWMS 부서에서 수행됩니다. Morus alba 열매는 증류수로 세척하고 건조시킵니다. 그런 다음 과일 재료(Morus alba)를 절구와 유봉으로 갈아줍니다. 20% 수성 제제의 경우 분쇄된 분말 20g에 증류수 100ml를 첨가하고 진탕 배양기에서 8시간 동안 배양합니다. (30% 수성 제제의 경우 분쇄 분말 30g에 증류수 100ml를 첨가합니다.) 수성 추출물은 Watman No. 1(Schuell and Schleicher 125mm Cat No. 1001 125) 여과지(Shumaila naz et al., 2018)를 통해 여과됩니다.

참가자의 표준화 포함 기준에 따라 선택된 과목은 표준화됩니다. 참가자는 하루에 두 번(아침 식사 후 및 취침 시간) 양치질을 하고 정크 푸드를 피하도록 조언받을 것입니다. 참가자는 하루에 2번 이하의 단 음료(차, 커피, 단 음료)를 섭취하도록 조언받을 것입니다. 이 지침은 참가자들에게도 서면으로 제공됩니다. 참가자는 이 지침에 따라 행동하도록 지시받으며 기본 타액 샘플을 위해 1주일 후에 호출됩니다.

데이터 수집 절차 포함 기준을 충족하는 총 120명의 환자가 연구에 등록됩니다. 모든 참가자로부터 정보에 입각한 동의를 얻습니다. 동의를 받는 동안 환자는 금본위제(클로르헥시딘) 또는 약초 ​​구강청결제를 받을 것이라는 정보를 받게 됩니다. 그룹 A, B 또는 C의 환자 선택은 난수표 방법으로 수행됩니다. 그룹을 A, B 및 C로 표시하는 것은 공동 조사자가 수행합니다. 그룹 목록은 불투명한 봉투에 밀봉되며 연구가 완료되면 개봉됩니다.

연구 그룹 총 120명의 참가자가 연구에 포함될 것입니다. 참가자는 세 그룹(그룹 A, B 및 C)으로 균등하게 나뉩니다. 그룹 A의 참가자에게는 클로르헥시딘 구강청결제가 제공되고 그룹 B와 C의 참가자에게는 각각 20%와 30%의 모러스 알바 열매 수성 추출물이 제공됩니다.

타액 pH 분석 타액 pH 레벨 분석은 pH 미터를 사용하여 수행되며 타액 pH는 각 구강 세척제 사용 후 기준선과 15일에 기록됩니다.

실험 절차 5ml 기준 무자극 타액 샘플은 피험자로부터 수동적 침흘림 기법으로 채취한 다음 3ml는 타액 pH 측정에 사용하고 나머지 타액 샘플은 0C에 보관한 다음 실험을 위해 실험실로 옮깁니다. Streptococcus mutans의 평가. 기본 타액 샘플을 채취한 후 참가자는 10ml의 각 구강 세척제를 입에 30초 동안 헹구고 뱉은 후 물을 받습니다. 참가자는 15일 동안 하루에 두 번 절차를 반복합니다. 15일 후, Streptococcus mutans 평가를 위해 참가자로부터 타액 샘플을 다시 채취하고 얻은 결과를 Streptococcus mutans에 대한 기본 타액 샘플과 비교합니다.

배양 절차 미생물 함량을 평가하는 기술은 희석 및 스프레드 플레이트 방법입니다. 타액 미생물 분석은 각 타액 샘플을 증류수에 1:10 비율로 희석하여 수행됩니다. 각 샘플은 MSA(Mitis salivarius agar media)가 있는 플레이트에 스트리킹됩니다. 그런 다음 플레이트를 37°C에서 48시간 동안 배양하고 자가 조명 쌍안 현미경으로 Streptococcus mutans 콜로니(CFU)의 수를 계산합니다. 모든 결과는 사전 설계된 형식으로 기록됩니다. (Smariti sexena et al,. 2017, Velmurugan 외. 2013, Hongkun Wu et al., 2003) 통계 분석 SPSS 버전 23을 사용하여 데이터를 분석합니다. 수치 데이터에 대해 평균 및 표준 편차를 취합니다. 범주형 데이터에 대해 빈도 및 백분율을 사용합니다.

각 그룹의 세균 수와 pH 값의 사전 및 사후 개입 값을 비교하기 위해 paired-t 테스트를 수행하고 세 그룹 간의 비교를 위해 사후 Tukey 테스트를 사용한 ANOVA를 적용합니다. P < 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다.

윤리적 고려 Ziauddin University의 윤리 위원회에서 윤리적 승인을 받습니다. 측정을 기록하기 전에 각 피험자로부터 정보에 입각한 동의를 얻습니다. 연구를 통해 수집된 모든 정보는 엄격하게 기밀로 유지됩니다. 모든 주제의 익명성은 신중한 정보 저장을 통해 유지됩니다. 치과 관련 문제가 발견되면 환자에게 알리고 필요한 치료를 위해 관련 클리닉에 의뢰합니다.

연구의 의의 우리 연구의 결과가 Morus alba가 더 효과적이라는 것을 증명한다면, 천연 원료에서 추출한 것이므로 미래에 충치 예방을 위해 안전하고 저렴하며 환경 친화적인 약제를 사용할 수 있을 것입니다. Morus alba는 어린이와 자극, 미각 변화, 작열감 및 미용상의 이유로 합성 구강 세척제를 사용할 수 없는 사람들에게도 사용할 수 있습니다.

Morus alba는 다른 한방 제품과 마찬가지로 환경 친화적이며 항균 구강 린스로서의 제형은 현재 치과용 운반의 표준 약제인 화학적으로 생성된 구강 린스 클로르헥시딘이 생성하는 환경에 대한 독성 영향을 최소화하는 데 도움이 됩니다. 이 연구의 결과는 항균 잠재력을 위해 전통적으로 사용되는 다른 허브 제품에 대한 다른 연구의 문을 열 수 있습니다.