WERKZAAMHEID VAN MORUS ALBA FRUITEXTRACTEN EN CHLOORHEXIDINE OP SPEKSEL STREPTOCOCCUS MUTANS EN pH-NIVEAUS

INLEIDING Streptococcus mutans is de belangrijkste ziekteverwekker die betrokken is bij de ontwikkeling van tandcariës. Dit is een anaërobe gram-positieve coccus, van nature aanwezig in de orale microbiota en kan gemakkelijk koloniseren op het tandoppervlak en initieert de productie van zuur door extracellulair polysaccharide te combineren, wat resulteert in demineralisatie van de tand en de ontwikkeling van tandcariës (Shah et al., 2018) . De hoeveelheid gekoloniseerde oppervlakken wordt geassocieerd met Streptococcus mutans in het speeksel. Door de concentratie van Streptococcus mutans in de mondholte te verlagen, zou dit dus een aanzienlijk voordeel hebben bij het verminderen van het optreden van cariogene microben. (Lemos et al., 2019, Forssten et al., 2010, Banas en Drake., 2018) Tandcariës is een microbiële ziekte van de mondholte, die wordt geïdentificeerd door demineralisatie van de anorganische stoffen en het oplossen van de organische stoffen van de tanden. Tandcariës is door de geschiedenis heen erkend en komt over de hele wereld voor, naar verluidt 44%, maar de ernst en prevalentie veranderen in verschillende landen (J.V Soames en J.C Southam et al., 2018). In onze buurlanden is de frequentie van tandcariës vrij hoog, gedocumenteerd op respectievelijk 68%, 65% en 64% in China, Iran en India. De prevalentie van tandcariës in Pakistan is ook vrij hoog, ongeveer 62%, wat gepaard gaat met aanzienlijke morbiditeit en economische gevolgen (Reddy K S, et al., 2017, Lu Liu et al., 2013). tandstructuur, de suikers en biofilm gevormd op de tandoppervlakken (Pitts, N. B et al., 2016). Het cariësproces dat bestaat uit wisselende perioden van demineralisatie en remineralisatie van tanden, die, als netto demineralisatie gedurende voldoende tijd plaatsvindt, resulteert in het ontstaan ​​van tandcariës. De oorzaak van tandcariës is melkzuur dat wordt geproduceerd door fermentatie van suikers door orale bacteriën (Banas en Drake., 2018). De normale pH-waarde van speeksel is 6,2-7,6. Bij een neutrale pH nemen calcium- en fosfaationen uit het speeksel op in het glazuur en behouden de structuur van het glazuur, maar wanneer de pH-waarde onder normaal daalt, d.w.z. bij 5,5 of lager dan 5,5, logen de calcium- en fosfaationen uit het glazuur uit en veroorzaakt de uitwisseling van minerale ionen van hydroxyapatietkristallen van glazuur in tandplak, resulterend in demineralisatie van de tand (J.V Soames Oral pathology 2018).

De behandeling van tandcariës legt de nadruk op het verminderen van tanddemineralisatie door eetgewoonten te veranderen, bacteriegroei te veranderen of te remmen, de pH-waarde van het speeksel en de buffercapaciteit te veranderen (Khirtika et al., 2017, Velmurugan et al., 2013, Yang et al., 2018). Verschillende antimicrobiële synthetische mondspoelingen, tandpasta's, gels, kauwgom en vernissen zijn gebruikt om de mondhygiëne te verbeteren en tandcariës te voorkomen door cariogene micro-organismen aan te pakken. Cariës wordt voorkomen door na de maaltijd de mond te poetsen, door gebruik te maken van fluoridetandpasta's, antimicrobiële mondspoelingen, interdentale reinigingshulpmiddelen, speekselstimulerende middelen (xylitol, mannitol), afdichtmiddelen voor putjes en fissuren en het aanbrengen van plaatselijk fluoride op tandoppervlakken. Mondspoelingen verminderen ook tandvleesontsteking en remmen de vorming van tandplak (Velmurugan et al., 2013, Chen en Wang, 2010, Zajkani et al., 2018). Mondspoelingen hebben anticariogene effecten, maar hebben bepaalde nadelen. Ze zijn kostbaar, hebben bijwerkingen zoals verkleuring van de tanden en een branderig gevoel in de mondholte (Nayak et al., 2012, Aoun et al., 2018).

Chloorhexidine is de gouden standaard, veelgebruikte en meest effectieve chemische benadering om de ophoping van tandplak te verminderen. Het is aangetoond dat dagelijks spoelen van de mond met chloorhexidine (0,2%) de groeisnelheid van streptococcus mutans in de mondholte vermindert (Velmurugan et al., 2013). Het heeft echter bepaalde bijwerkingen, zoals erosie van het mondslijmvlies, zwelling van de parotis, verkleuring van de tanden, een branderig gevoel en een bittere smaak. (Jacob en Nivedhitha, 2018b, Shah et al., 2018, Van der Weijden et al., 2010, Nayak et al., 2012, Solderer et al., 2019) Veel bevolkingsgroepen gebruiken medicinale planten als traditionele of alternatieve behandelingen voor verschillende aandoeningen vanwege hun betere veiligheidsprofielen, gezondheidsbevorderende effecten, lagere kosten en gemakkelijke beschikbaarheid. Onder de plantensoorten die voor medicinale doeleinden worden gebruikt, bevinden zich die van het geslacht Morus, waaronder de meest gebruikte soorten zijn Morus alba, rubra en nigra, die ook antimicrobiële eigenschappen hebben getoond tegen verschillende levensbedreigende infecties (Ercisli S et al., 2006). Morus alba, gewoonlijk witte moerbeiboom genoemd, en het behoort tot de familie Moraceae en wordt ook wel Tut, shahtoot of moerbeiboom genoemd. Morus Alba (witte moerbei) komt oorspronkelijk uit China, India, Pakistan en Japan (Kumar V et al., 2008). In de huidige studie zal Morus alba-fruitextract worden vergeleken met chloorhexidine met Streptococcus mutans tegen orale pathogenen vanwege zijn antimicrobiële eigenschappen.

Probleemstelling Tandcariës komt overal ter wereld veel voor, ook in Pakistan; het veroorzaakt tandverlies, malocclusie en temporomandibulair gewrichtsproblemen. De daarmee gepaard gaande infecties kunnen het risico met zich meebrengen dat ze zich verspreiden naar oppervlakkige en diepe fasciale ruimten en kunnen zelfs levensbedreigende infecties veroorzaken. De behandeling van tandcariës is vrij duur en vormt een economische last voor onze toch al achtergestelde, lage sociaaleconomische bevolking. Er is dus behoefte aan onderzoek naar natuurlijke producten die antimicrobiële en andere gunstige effecten kunnen hebben om de cariësactiviteit te verminderen, samen met goede veiligheidsprofielen, gemakkelijk verkrijgbaar en kosteneffectief.

Onderzoeksvraag Zijn de waterige extracten van Morus alba fruit even effectief als chloorhexidine mondwater voor de preventie van tandcariës? Doelstellingen Het vergelijken van de werkzaamheid van extracten van Morus alba-vruchten met chloorhexidine bij patiënten met tandcariës op basis van een vermindering van het aantal Streptococcus mutans in hun speeksel.

Om de werkzaamheid van Morus alba-fruitextracten te vergelijken met chloorhexidine bij patiënten met tandcariës op basis van een toename van hun speeksel-pH-waarden.

Achtergrond Chloorhexidine is een chemische stof die een bittere smaak heeft en een branderig gevoel in de mondholte veroorzaakt en om cosmetische redenen mogelijk niet haalbaar is voor patiënten. Mondwater afgeleid van kruidenproducten, met antimicrobiële activiteit tegen orale pathogenen, kan een economische en veilige behandelingsoptie bieden om de last van tandcariës in onze klinische opstelling te verminderen. Voor zover wij weten, is het extract van de moerbeiboom niet geëvalueerd op zijn antimicrobiële activiteit tegen orale pathogenen, waaronder Streptococcus mutans.

Hypothese

nulhypothese:

Ho: Waterige extracten van Morus alba-fruit zijn niet even effectief als mondwater met chloorhexidine voor de preventie van tandcariës.

Alternatieve hypothese:

Ha: Waterige extracten van Morus alba-fruit zijn even effectief als mondwater met chloorhexidine voor de preventie van tandcariës.

LITERATUUROVERZICHT Tandcariës bestaat uit verbindingen tussen de tandstructuren, suikers en de microbiële biofilm op de tandoppervlakken (Pitts, N. B et al., 2016). Streptococcus mutans en speeksel-pH zijn de twee belangrijkste factoren die tandcariës veroorzaken en daarom kan het aanpakken ervan een efficiënte manier zijn om deze wereldwijde ziekte aan te pakken. Chloorhexidine is een uitstekend antimicrobieel middel en wordt beschouwd als een zegen voor het behoud van mondgezondheid en hygiëne. Evenzo zijn er veel kruidenmiddelen geïntroduceerd die even effectief zijn als chloorhexidine. (Sajjan et al., 2016, Ahmed et al., 2017, Jacob en Nivedhitha, 2018, Carounanidy et al., 2007, Esther et al., 2017) Medicinale planten worden door veel bevolkingsgroepen gebruikt als therapeutisch middel vanwege hun gemakkelijke beschikbaarheid, veiligheid en kosteneffectiviteit. De morus-soorten hebben ook geneeskrachtige eigenschappen en zijn gebruikt als antidiabeticum, neuroprotectief, hypolipidimisch en als laxeermiddel (Anna Gryn-Rynko et al., 2016). Meer dan 100 soorten morus zijn over de hele wereld aanwezig en in Pakistan zijn er 25 soorten morus beschikbaar. De meest voorkomende morussoorten zijn Morus alba, rubra en nigra (Imran M., Khan H., et al., 2010).

Morus alba fruit bevat veel werkzame stoffen, zoals flavonolen, polyfenolen, alkaloïden en polysacchariden (Gundogdu M et al., 2011). Morus alba is de rijke bron van vitamine A, vitamine B1, foliumzuur, vitamine C, mineralen, koolhydraten, aminozuren, vetzuren, anthocyanine en saponinen (Jiang Y et al., 2015).

In conventionele Chinese natuurlijke medicatie zijn moerbeivruchten gebruikt in medicijnen voor de behandeling van diabetes, hypertensie, bloedarmoede en gewrichtspijn. Morus alba staat bekend om zijn antidiabetische, antihelmintische, antimicrobiële, anxiolytische, hepatoprotectieve en nefroprotectieve eigenschappen (Wang, J.; et al., 2013, Yang, X. L et al., 2010, Khalid, S et al., 2017 ). De Morus-vrucht, hoewel van dezelfde soort, kan verschillende antioxiderende eigenschappen en een verschillende chemische samenstelling hebben. De minerale elementen in Morus alba omvatten kalium (K), natrium (Na), fosfor (P), calcium (Ca), zink (Zn), ijzer (Fe), koper (Cu), mangaan (Mn), selenium (Se ), magnesium (Mg), chroom (Cr) en arseen (As) (Liang, L et al., 2012).

Het methanolische extract van de schors van Morus alba en zijn bestanddelen worden gebruikt als antimicrobiële middelen (Kuete, et al., 2009). Het antimicrobiële middel "kuwanon G", verkregen uit de bast van de wortel van Morus alba, vertoont activiteit tegen Streptococcus mutans bij een MIC van 8,0 μg/ml. De bacteriedodende test van kuwanon G gaf aan dat het Streptococcus mutans volledig inactiveerde bij een concentratie van 20 μg/ml in 60 seconden (Park, K. M et al., 2002).

Volgens Jha et al beoordeelde hij de antimicrobiële activiteit van Morus alba-bladeren (waterig extract) op gram-positieve (Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis) en gram-negatieve bacteriën (Pseudomonas aeruginosa en Escherichia coli). Resultaten van de antimicrobiële activiteit bevestigden dat Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus en Escherichia coli de meest gevoelige bacteriesoorten waren voor ruw extract, toonden de MIC-waarde bij een concentratie van 0,2-26 mg/ml (S. Jha, AK et al., 2013).

De antimicrobiële activiteit van 1-deoxynojirmiycine (component van Morus alba-bladeren) en ruw ethanolisch extract van Morus alba-bladeren werden beoordeeld. Zowel de 1-deoxynojirmiycine- als de morus alba-bladeren (ruw extract) vertoonden een sterke bacteriostatische activiteit tegen Streptococcus mutans, maar de 1-deoxynojirmiycine vertoonde een lagere MIC-waarde (15,6 mg/ml) dan het ruwe extract van Morus alba (125 mg/mg/ml). (B. Islam., et al. 2008). Het ethanolische extract van Morus alba-bladeren vertoonde antimicrobiële activiteit tegen Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida krusei, Candida albicans, Aspergillus flavus en Candida tropicalis (Oliveira et al., 2015).

Anthocyanines zijn het belangrijkste bestanddeel van Morus alba-fruit, dit zijn fenolische verbindingen die verantwoordelijk zijn voor veel biologische activiteiten, zoals antimicrobiële, antioxiderende, neuroprotectieve en ontstekingsremmende eigenschappen (Liu LK et al., 2008). De cyanidine-3-glucoside en cyanidine-3-rutinoside zijn de belangrijkste anthocyanines die worden afgescheiden uit moerbeivruchten (Suh H.J et al 2003, Liu X.et al 2004). Het actieve ingrediënt van Morus alba is anthocyanine en anthocyanine aanwezig in de vrucht van Morus-soorten vertoonde antibacteriële activiteiten tegen E. coli, Pseudomonas aeruginosa en Staphylococcus aureus (Chen H., et al 2017). De voorgestelde mechanismen waarmee anthocyanine antimicrobiële effecten produceert, omvatten actie op het celmembraan van de ziekteverwekker met het lekken van zijn nucleïnezuur en eiwitten (Bajpai et al., 2013). Anthocyanine veroorzaakt remming van microbiële superoxide-dismutase, alkalische fosfatase en ATP-productie met daaropvolgende remming van de TCA-cyclus (Li et al., 2010). Al deze mechanismen resulteren in de lysis van pathogene cellen.

Shumaila Naz et al. bevestigden de antimicrobiële werking van extracten van moerbeivruchten tegen watergedragen microbiële pathogenen (Listeria monocytogene, Salmonella enteric, Moraxella catarrhalis, Legionella pneumophila, Micrococcus luteus, Proteus mirabilis, Clostridium sp., Serratia sp., Aeromonas hydrophila, Corneybacterium sp. ., Bacillus subtilis, E. coli, Bacillus megaterium, Bacillus thuringiensis, Streptococcus pyogenes, Actinomyces sp., Staphylococcus aureus, Vibrio cholera, Salmonella typhi, Bacillus anthracis en Streptococcus pneumonia) geïsoleerd uit verschillende watermonsters. De resultaten gaven aan dat extracten van moerbeivruchten effectief zijn tegen watergedragen microbiële pathogenen (Shumaila Naz et al., 2018).

VEILIGHEIDSPROFIELEN VAN MORUS ALBA De intragastrische toediening van Morus alba-extract bij ratten gedurende 7 dagen bij de maximale dosis van 1 gm/kg veroorzaakte geen toxische effecten (Jiao Y et al., 2017). Een studie uitgevoerd bij ratten waarbij de effecten van ethanolische extracten van Morus alba bij ratten bij een dosis van 250 mg/kg gedurende 2 weken toediening geen toxische effecten veroorzaakten (Hwang et al., 2016). Een andere studie uitgevoerd op ratten die werden gevoed met anthocyanen afkomstig van moerbeivruchten. De anthocyaninen verlaagden de verhoogde niveaus van aspartaataminotransferase (AST) en alanineaminotransferase ALT bij ratten. (Hepatoprotectieve effecten) STEEKPROEFGROOTTE BEREKENING De steekproefomvang werd geschat met behulp van de Open Epi-calculator voor de steekproefomvang door rekening te houden met de volgende statistieken; Verandering in pH-waarde (chloorhexidine) = 6,88 ± 0,20 (Velmurugan et al., 2013) en rekening houdend met 20% verschil in pH voor moerbei-extracten als 8,256 ± 0,24 Power of test= 90% Betrouwbaarheidsniveau= 95% De berekende steekproefomvang kwam uit op 1 in elke groep. Ik zal echter 120 patiënten opnemen met 40 patiënten in elke groep volgens de aanname van normaliteit.

ONDERZOEKSMETHODOLOGIE Onderzoekssetting Dit onderzoek zal worden uitgevoerd op de afdeling Tandheelkunde, Burgerlijk ziekenhuis Uthal, district Lasbella en op de afdeling Plantenpathologie, Lasbella University of Agriculture, Water and Marines Sciences (LUAWMS) Balochistan.

Onderzoeksopzet Gerandomiseerd gecontroleerd klinisch onderzoek Het is een dubbelblind onderzoek, waarin zowel de onderzoeker als de patiënt geblindeerd zijn om de resultaten onbevooroordeeld te houden. De mede-onderzoeker weet echter of de patiënt de gouden standaard of kruidenmondwater krijgt.

Studieduur De studieduur is 6 maanden tot 1 jaar na goedkeuring van de studie van RAC, ERC en BASR van Ziauddin University.

Bemonsteringstechniek Non-Probability opeenvolgende bemonsteringstechniek zal worden gebruikt voor de steekproefselectie

Selectiecriteria Inclusiecriteria Alle patiënten van 18-40 jaar met minstens 20 tanden in hun mond, exclusief verstandskiezen.

De patiënten van beide geslachten. De patiënten met actieve en onbehandelde carieuze laesies (er moet ten minste één carieuze tand aanwezig zijn in de mondholte van de patiënt).

Uitsluitingscriteria De patiënten die een orthodontische behandeling ondergaan De patiënten die al een antibiotische therapie of antimicrobiële spoeling ondergaan. De patiënten die allergisch zijn voor mondwater met chloorhexidine. De patiënten van wie de toestemming niet kon worden verkregen. MATERIALEN EN METHODE MATERIALEN DIE IN HET ONDERZOEK WORDEN GEBRUIKT. buizen en speekselverzamelingskits.

MORUS ALBA-COLLECTIE Morus alba-fruit (witte moerbei) wordt verkregen van een authentieke kruidenwinkel en het Morus alba-fruit wordt geauthenticeerd door de Botany-afdeling van LUAWMS.

BEREIDING VAN WATERIG EXTRACT VAN MORUS ALBA FRUIT De bereiding zal gebeuren op de afdeling Plantenziektekunde LUAWMS. Morus alba-fruit wordt gewassen met gedestilleerd water en gedroogd. Vervolgens wordt het vruchtmateriaal (Morus alba) met behulp van vijzel en stamper vermalen. Voor 20% waterige bereiding wordt 100 ml gedestilleerd water toegevoegd aan 20 g gemalen poeder en gedurende 8 uur in een schudincubator geïncubeerd. (Voor 30% waterige bereiding wordt 100 ml gedestilleerd water toegevoegd aan 30 g gemalen poeder). Waterige extracten worden gefilterd door Watman nr. 1 (Schuell en Schleicher 125 mm Cat nr. 1001 125) filtreerpapier (Shumaila naz et al., 2018).

STANDAARDISERING VAN DEELNEMERS De vakken die geselecteerd zijn op basis van inclusiecriteria worden gestandaardiseerd. De deelnemers krijgen het advies om twee keer per dag hun tanden te poetsen ('s morgens na het ontbijt en voor het slapen gaan) en om junkfood te vermijden. Deelnemers wordt geadviseerd om niet vaker dan 2 keer per dag suikerhoudende dranken (thee, koffie, gezoete drank) te nemen. Deze instructies worden ook schriftelijk aan de deelnemers verstrekt. De deelnemers krijgen instructies om naar deze richtlijnen te handelen en worden na 1 week gebeld voor basisspeekselmonsters.

GEGEVENSVERZAMELINGSPROCEDURE In totaal zullen 120 patiënten die aan de inclusiecriteria voldoen, in het onderzoek worden opgenomen. Geïnformeerde toestemmingen zullen worden verkregen van alle deelnemers. Terwijl ze toestemming geven, zullen de patiënten worden geïnformeerd dat ze ofwel de gouden standaard (chloorhexidine) of kruidenmondwater zullen krijgen. De selectie van patiënten in groep A, B of C zal gebeuren door middel van de Random Number Table-methode. Het labelen van groep als A, B en C gebeurt door medeonderzoeker. De lijst met groepen wordt verzegeld in een ondoorzichtige envelop en wordt geopend wanneer de studie is voltooid.

ONDERZOEKSGROEPEN In totaal zullen 120 deelnemers deelnemen aan het onderzoek. De deelnemers worden gelijk verdeeld in drie groepen (groep A, B en C). De deelnemers van groep A krijgen mondwater met chloorhexidine en de deelnemers van groep B en C krijgen respectievelijk 20% en 30% waterig extract van Morus alba-fruit.

SPEEKSEL pH-ANALYSE De analyse van het speeksel-pH-niveau wordt uitgevoerd met behulp van een pH-meter en de speeksel-pH wordt geregistreerd bij aanvang en 15 dagen na het gebruik van het respectievelijke mondwater.

EXPERIMENTELE PROCEDURE De ongestimuleerde speekselmonsters van 5 ml worden van de deelnemers genomen door passieve kwijlingstechniek, vervolgens wordt 3 ml gebruikt voor het meten van de speeksel-pH en het resterende speekselmonster wordt bij 0 C bewaard en vervolgens naar het laboratorium overgebracht voor de test. beoordeling van Streptococcus mutans. Nadat er basisspeekselmonsters zijn genomen, wordt de deelnemers gevraagd om 10 ml mondwater gedurende 30 seconden in hun mond te spoelen en vast te houden voordat ze het uitspugen. De procedure wordt herhaald door de deelnemers, tweemaal per dag gedurende 15 dagen. Na 15 dagen zullen er opnieuw speekselmonsters van deelnemers worden genomen voor beoordeling van Streptococcus mutans en de verkregen resultaten zullen worden vergeleken met baseline speekselmonsters voor Streptococcus mutans.

KWEEKPROCEDURE De techniek voor het beoordelen van het microbiële gehalte is de verdunnings- en spreidplaatmethode. Microbiële speekselanalyse wordt uitgevoerd door elk speekselmonster in een verhouding van 1:10 te verdunnen in gedestilleerd water. Elk monster zal dan uitgestreken worden in een plaat met Mitis salivarius agar media (MSA). De platen worden vervolgens 48 uur bij 37°C geïncubeerd en het aantal Streptococcus mutans-kolonies (CFU) wordt geteld onder een zelfverlichtende binoculaire microscoop. Alle bevindingen worden vastgelegd in vooraf ontworpen proforma. (Smariti sexena et al,. 2017, Velmurugan et al. 2013, Hongkun Wu et al., 2003) STATISTISCHE ANALYSE De gegevens worden geanalyseerd met behulp van SPSS versie 23. Gemiddelde en standaarddeviatie worden genomen voor numerieke gegevens. Frequentie en percentages worden genomen voor categorische gegevens.

Er zal een paired-t-test worden uitgevoerd voor vergelijking tussen pre- en postinterventiewaarden van bacterietellingen en pH-waarden voor elke groep en de ANOVA met post-hoc Tukey's test zal worden toegepast voor vergelijking tussen drie groepen. P < 0,05 wordt als statistisch significant beschouwd.

ETHISCHE OVERWEGING Ethische goedkeuring zal worden verkregen van de ethische commissie van Ziauddin University. Geïnformeerde toestemming zal van elk onderwerp worden verkregen voordat een meting wordt opgenomen. Alle informatie die uit het onderzoek wordt verzameld, wordt strikt vertrouwelijk behandeld. De anonimiteit van alle onderwerpen wordt gehandhaafd door zorgvuldige opslag van informatie. Als er tandheelkundige problemen worden opgemerkt, worden de patiënten geïnformeerd en doorverwezen naar de relevante klinieken voor de noodzakelijke behandeling.

BETEKENIS VAN DE STUDIE Als uit de resultaten van onze studie blijkt dat Morus alba effectiever is, dan zal er in de toekomst een veilig, goedkoop en milieuvriendelijk middel beschikbaar zijn voor de preventie van tandcariës. De Morus alba kan ook worden gebruikt voor kinderen en mensen die geen synthetische mondwater kunnen gebruiken vanwege irritatie, smaakverandering, branderig gevoel en om cosmetische redenen.

Morus alba is, net als andere kruidenproducten, milieuvriendelijk en de formulering ervan als een antimicrobiële orale spoeling helpt de toxische effecten op het milieu te minimaliseren die worden veroorzaakt door chemisch geproduceerde orale spoeling chloorhexidine, dat momenteel de gouden standaard is voor tandheelkundige dragers. De resultaten van deze studie kunnen deuren openen voor ander onderzoek naar andere kruidenproducten die traditioneel worden gebruikt vanwege hun antimicrobiële potentieel.