진행성 간암에 대한 동결절제술과 수지상세포/사이토카인 유도 킬러세포 병용요법의 안전성 및 유효성 평가

세계보건기구(WHO) 산하 국제암연구소(IARC)는 2020년에 1930만 건의 새로운 암 사례가 발생했고 거의 1000만 명이 사망한 2020년 전 세계 암 부담 데이터를 발표했다. 현재 세계 인구 5명 중 1명은 일생 동안 암에 걸리며, 남성 8명 중 1명, 여성 11명 중 1명이 암으로 사망합니다. 2017년 보건복지부의 대만 암 등록 도입에 따르면, 새로운 암 사례 수는 111,684건으로 2015년보다 5,852명이 증가했습니다. 특히 간암은 암 순위 4위다. 간암의 주요 원인은 B형 간염, C형 간염 또는 알코올로 인한 간경변증입니다. 다른 원인으로는 Aspergillus flavus 독소, 비 알코올성 지방간 질환 및 간 흡인 등이 있습니다.

면역 세포 요법은 진행성 간암 치료에서 새로운 분야입니다. 림프구 활성화 킬러(LAK) 세포, 수지상 세포(DC), 종양 침윤 림프구(TIL) 세포, 사이토카인 유도 킬러(CIK) 세포 및 림프구 활성화 림프구(LAK) 세포와 같은 많은 유형의 면역 효과 세포는 진행성 간암 치료에 사용됩니다. CIK 세포는 면역 요법 응용을 위해 개발되었습니다. CD3+CD56+ 세포, CD3+CD56- 세포, CD3-CD56+ 세포와 같은 CIK 세포는 일반 T 세포의 기능과 유사한 MHC의 비제한적 세포용해 효과를 나타내어 종양을 직접 죽이는 능력을 가지고 있습니다. CIK 세포는 LFA-1을 통해 종양 세포의 LFA-1 리간드에 결합하여 종양 세포를 죽인 다음 수용체가 NK 세포의 리간드에 결합하면 다운스트림 세포 신호 전달 경로를 시작하고 종양 세포 독성에 대해 CIK 세포를 추가로 활성화합니다. 마지막으로 CIK 세포는 Fas-FasL을 통해 신호 전달 경로를 활성화하고 암세포에서 세포사멸을 유도합니다. DC는 사이토카인 자극에 반응하여 성숙한 수지상 세포로 분화되는 단핵구의 형태로 종종 골수에서 조혈 줄기 세포와 분화됩니다. TAA(tumor-associated antigen) 식균 작용 후, 항원은 세포질 경로와 액포 경로의 두 가지 경로에 의해 처리되며, 여기에서 항원은 펩티드로 가공되어 주요 조직 적합성 복합체 클래스 I(MHC I)에 로드됩니다. 그런 다음 TAA-MHC I 복합체가 DC 표면으로 전달됩니다. DC 제시 TAA가 이동하여 림프절에 도달하면 T 세포를 프라이밍하고 항종양 면역을 촉진할 수 있습니다. 수지상 세포는 순진한 T 세포의 효율적인 활성제이며 강력한 APC입니다. 이들은 항원 제시 및 T-세포 프라이밍을 통해 면역 매개 암 제거에서 중심적인 역할을 합니다. 최근에는 DC와 CIK 세포가 함께 배양되는 복합 면역 요법인 DC-CIK 세포 요법을 위해 결합되었습니다. 치료 메커니즘 측면에서 수지상 세포는 특화된 항원 제시 세포이며 성숙한 수지상 세포는 MHC-I 경로를 통해 종양 항원을 제시하여 종양 세포의 면역 탈출 메커니즘에 효과적으로 대응할 수 있습니다. CIK의 특정 종양 살상 효과는 더욱 강화됩니다. 많은 연구에서 DC-CIK 세포로 암 환자를 치료하면 생존 시간이 크게 연장되고 환자의 면역 기능이 향상된다는 사실이 밝혀졌습니다.

최근 암치료의 경향은 종양의 냉동절제와 면역세포치료를 병행할 경우 좋은 보완효과를 가져 암치료의 효능을 획기적으로 향상시킬 수 있음을 확인하였다. 냉동요법은 동결과 해동을 반복하여 발생하는 삼투압 쇼크의 물리적 변화를 통해 종양 세포의 괴사를 일으켜 종양 항원을 방출하고 항종양 면역 반응을 활성화시키는 것으로 알려져 있습니다. 2013년 4기 폐암 환자를 대상으로 실시한 후향적 연구에서는 면역세포 DC-CIK와 결합한 냉동절제술의 효능을 조사했으며 DC-CIK를 사용한 냉동절제술이 환자의 전체 생존(OS)을 유의하게 연장하는 것으로 나타났습니다. 2017년 임상시험 결과, NK 세포 요법을 이용한 냉동절제술이 진행성 폐암 환자의 임상 반응률과 질병 조절률(DCR)을 개선했으며, PR 환자의 비율(63.3% vs. 43.3%, P<0.01) 및 질병조절률(진행성 간세포암종에 대한 임상시험 결과, 2015년부터 2017년까지 입원한 61명의 환자 중 NK 면역요법을 이용한 냉동절제술이 환자의 무진행생존기간(PFS)을 유의하게 연장(9.5%)한 것으로 나타났다. (PFS) (9.1개월 vs. 7.6개월, P=0.0107), 반응률(60% vs. 46.1%, P<0.05) 및 질병 조절률(85.7% vs. 69.2%, P<0.05).

시험은 단일 암, 통제되지 않은, 공개 라벨, 비무작위 할당 설계로 설계되었습니다. 진행성 간암 환자에서 냉동절제술을 이용한 간종양 절제 전후 자가 DC-CIK 면역세포를 이용한 간동맥 주입의 효능과 안전성을 조사하였다. DC-CIK 면역세포치료제 기술은 보희바이오텍과 공동으로 개발했으며, 세포핵심기술은 일본 하스미 박사의 자가면역세포치료제로부터 기술이전됐다. 이 프로그램은 치료 전과 치료 후 종양 크기와 종양 지수의 변화를 추적하고 안전성 평가를 통해 이번 시험 치료의 안전성과 유효성을 평가할 예정이다.

임상 시험 기간 동안 임상 평가 결과를 보완하기 위해 탐색적 지표 분석을 위해 환자로부터 말초 혈액을 채취합니다. 2013년 임상 연구 결과에 따르면 표준 치료에 실패한 4기 고형암 환자는 일본 하스미 박사의 자가면역세포 치료 후 CD8+CD56+ 세포수가 증가해 1년 후까지 추적 관찰을 지속했다. . 2019년에는 소라페닙으로 치료받은 유리 DNA 농도가 높은 간암 환자군이 유리 DNA 농도가 낮은 환자군보다 질병 통제력이 낮았다는 연구 결과도 나왔다. 복제수 변경(CNA) 프로파일을 얻기 위한 무세포 DNA(cfDNA)의 전체 게놈 시퀀싱은 소라페닙 치료 결과의 예측 인자로 사용될 수 있습니다. 따라서 본 임상시험에서는 치료 전후 환자의 혈액샘플을 채취하여 밀도를 이용하여 Buffy coat와 Plasma를 분리하여 면역세포군의 분포와 혈액 내 cfDNA(cell-free DNA)의 변화를 별도로 분석하였다. 구배 원심 분리기 및 Qubit 2.0 Fluorometer 사용. qubit dsDNA High Sensitivity assay kit(Life Technology, Carlsbad, CA, USA)를 이용하여 free DNA의 양을 정량화하고 free DNA의 copy number를 검출하고 free DNA를 분석하여 가능한 biomarker를 찾아냈다. 치료 효과 추적에 사용됩니다.