유아용 Bifidobacterium Breve PS1의 안전성

소개 출생 방식과 같은 일부 주산기 환경은 영아 장내 미생물총의 구성을 변경할 수 있습니다. 예를 들어, 제왕절개로 태어난 영아는 질식 분만으로 태어난 영아에 비해 장내세균불균형(비피도박테리아 고갈 포함)이 발생하기 쉬워 위장관 및 호흡기 감염률이 증가합니다. 흥미롭게도 모유 수유는 비피도박테리움 개체군을 회복시킬 수 있으며, 이는 다양한 감염률 감소와 관련이 있습니다.

비피도박테리아가 유아의 장에서 할 수 있는 중요한 기능에도 불구하고, 일부 연구에서는 이러한 박테리아가 일부 유아에서 낮은 농도로 존재하거나 심지어 부재할 수도 있음을 보여주었습니다. 모유 수유 부족, 조기 젖 떼기, 산모/유아 항생제 요법 또는 HMO 구성을 포함한 일부 요인은 산모-영아 쌍에서 비피도박테리아에 대해 선택될 수 있습니다. 따라서, 모유에 자연적으로 존재하는 비피도박테리아 균주를 이러한 미생물이 결핍된 영아에게 제공하기 위한 분유를 비롯한 기능성 식품 개발 전략이 필요하다. 이러한 맥락에서, 이 작업의 목적은 먼저 모유에서 분리한 비피도박테리아 균주의 잠재적 프로바이오틱 특성을 특성화하고, 이후 3개월 된 분유를 먹인 집단에서 안전성과 내성을 테스트하는 것이었습니다. 유아

재료 및 방법 연구 설계 2개의 연구 그룹을 대상으로 무작위 이중 맹검 통제 개입 연구를 수행했습니다. 엄마의 선택에 따라 태어날 때부터 분유만 먹인 건강한 3개월 영아를 부모로부터 사전 서면 동의를 얻은 후 연구에 모집했습니다. 수사관은 모유 수유를 지지하고 보호하기 위해, 모유 수유를 방해하지 않고, 모유 수유 아기의 부모에게 젖병 수유를 제안하지 않기 위해 가족과 의사 소통하는 동안 특별한 예방 조치와 주의를 기울였습니다. 제외 기준은 경증 또는 중증 위장관 질환 병력(만성 설사 또는 변비, 위식도 역류 병력), 위장 수술, 우유 단백질 알레르기, 대사 장애(당뇨병, 유당 불내증), 면역 결핍, 3주 전 항생제 처방을 포함했습니다. 프로바이오틱 함유 포뮬러의 포함 및 이전 사용. 연구 중 제외 기준은 연구 프로토콜 준수 부족, 연구 공식 소비와 관련된 부작용, 1차 진료 센터에 예정된 방문 불참, 소아과 의사에 따르면 처방이 필요한 심각한 역류 및/또는 복통이었습니다. 특별한 공식의

이 프로토콜은 Hospital Clínico(스페인 마드리드)의 윤리 위원회에서 승인했습니다(참조 10/017-E).

샘플 크기 샘플 크기는 기준선 방문과 방문 1(180 ± 5일) 사이의 유아의 평균 체중 증가의 1차 결과를 기반으로 추정되었습니다. 안전성 연구의 일환으로 성장이 주요 결과 변수인 이전 간행물을 기반으로, 이 연구는 0.5 표준 편차에 해당하는 체중 증가의 차이를 감지할 수 있는 검정력을 갖도록 설계되었습니다. 따라서 유의 수준 2.5%, 검정력 80%의 비열등성(단측 검정) 가정 하에 각 공식 그룹에 최소 65명의 자녀가 필요합니다.

연구 공식 컴퓨터 프로그램에 의해 생성된 무작위화에 따라 총 187명의 영아(3개월)가 등록되어 두 연구 그룹(프로바이오틱 그룹[PG] 및 대조군[CG])으로 무작위 배정되었습니다. 영아는 다음 분유 중 하나를 받았습니다. (a) CG: 현재 EU 규정에 따른 영양 성분이 포함된 표준 분유(HiPP 1, 600g) 및 (b) PG: B. breve로 보충된 동일한 분유 107 cfu/g 제형의 농도 용량에서 PS1. B. breve PS1은 Biopolis(스페인 발렌시아) 시설에서 생산되었습니다. 두 분유 모두 생후 6개월(3개월의 개입 기간)까지 영아가 섭취했습니다.

포뮬러의 프로바이오틱스 농도는 연구 전과 연구 종료 시에 분석 및 확인되었습니다. 오리지널 HiPP 유아용 조제분유를 구입하여 이중 맹검 개입 시험에서 적절하게 사용할 수 있도록 준비했습니다. 따라서 분유를 구별할 수 없는 일반 흰색 주석으로 옮기고 하위 집합에 균주 PS1을 보충했습니다.

Dpt 시설의 무균 포장 장치가 제공된 무균실에서 두 제형의 준비를 수행했습니다. Complutense University of Madrid의 Galenic Pharmacy and Food Technology 전공. 모든 연구 인력(소아과 의사 및 연구원)과 부모는 전체 연구 기간 동안 눈이 멀었습니다. 그룹 할당은 통계 분석이 완료된 후에야 공개되었습니다. 소아과 의사는 ESPGHAN 지침에 따라 영아에게 투여할 일일 분유의 양을 처방했습니다.

연구 결과 유아는 개입 기간 동안 두 가지 임상 평가를 받을 예정이었습니다: 기준선(생후 3개월) 및 연구 종료 시점(생후 6개월). 시험의 주요 결과는 기준선 평가와 생후 6개월 사이의 평균 체중 증가였습니다. 2차 결과에는 평균 길이 및 머리 둘레 증가, 분유 소비와 관련된 부작용, 분변 비피도박테리아 수준 및 분변 단쇄 지방산(SCFA) 농도가 포함되었습니다.

배설물 샘플 수집 및 분석 배설물 샘플은 두 연구 방문 모두에서 기저귀에서 수집되었습니다. 각 참가자의 대변 샘플과 샘플링 시간을 4부분으로 나누어 -20°C에서 보존하고 1주일 이내에 처리했습니다. 3개의 분취량을 사용하여 정의된 연구 매개변수를 평가하고 나머지 네 번째 분취량을 -80°C에 보관했습니다.

대변의 비피도박테리아 정량화는 L-시스테인(0.5g/L)(MRS-Cys) 한천 플레이트가 보충된 MRS 플레이트에 샘플의 소수 희석액을 도금하여 수행되었으며, 이 플레이트는 혐기성(85% 질소, 10% 수소, 5% 37ºC에서 72시간 동안 혐기성 워크스테이션(MINI-MACS; DW Scientific, Shipley, United Kingdom)에서 이산화탄소). 열거에는 그람 양성 카탈라아제 음성 및 F6PPK 양성에 해당하는 콜로니가 포함되었습니다. 배설물 샘플에서 B. breve DNA의 검출 및 정량화는 이전에 설명한 실시간 정량적 PCR에 의해 수행되었습니다.

단쇄 지방산(SCFA) 정량화를 위해 대변 샘플을 아르곤 분위기에서 150mM NaHCO3(pH 7.8)(1:5, wt/v)로 균질화했습니다. 샘플을 37°C에서 24시간 동안 발효를 위해 배양하고 추출할 때까지 -80°C에서 보관했습니다. SCFA의 추출은 가스크로마토그래피로 수행하였다.

통계 분석 정량적 데이터는 평균과 표준 편차(SD)로 기술적으로 표현되었습니다. 정규 분포가 아닌 경우 데이터는 중앙값 및 사분위수 범위(IQR)로 표시되었습니다.

인체 측정 데이터는 평균 및 표준 편차(SD)를 사용하여 요약되었으며, 장내 세균 수는 중앙값 및 사분위수 범위(IQR)로 요약되었습니다. 또한 R 패키지 anthro 버전 1.0.0에서 구현되고 WHO에서 권장하는 방법론을 사용하여 인체 측정 측정을 연령 및 성별 표준화 z-점수로 변환했습니다. 다음으로 스튜던트 t-테스트를 ​​사용하여 6개월 시점에서 체중, 길이 및 머리둘레에 대한 z 점수의 처리군별 평균을 비교하였다. Mann-Whitney-U 비모수 테스트를 사용하여 장내 세균 수를 비교했습니다. 테스트는 양측 5% 유의 수준에서 수행되었으며 추정치에 대해 95% 신뢰 구간을 얻었습니다. 모든 비교에서 차이는 p< 0.05에서 유의한 것으로 간주되었습니다. 통계 분석은 R 버전 4.2.1을 사용하여 수행되었습니다.