Innocuité de Bifidobacterium Breve PS1 pour les nourrissons

Introduction Certaines circonstances périnatales, comme le mode d'accouchement, peuvent modifier la composition du microbiote intestinal du nourrisson. Par exemple, les nourrissons nés par césarienne sont sujets à une dysbiose intestinale (y compris une déplétion de bifidobactéries) par rapport à ceux nés par accouchement vaginal, ce qui entraîne une augmentation du taux d'infections gastro-intestinales et respiratoires. Fait intéressant, l'allaitement peut restaurer la population de Bifidobacterium, qui à son tour était associée à une diminution du taux de diverses infections.

Malgré les fonctions importantes que les bifidobactéries peuvent jouer dans l'intestin du nourrisson, certaines études ont montré que ces bactéries peuvent être présentes à une faible concentration ou même absentes chez certains nourrissons. Certains facteurs, notamment l'absence d'allaitement, le sevrage précoce, l'antibiothérapie mère/nourrisson ou la composition du HMO peuvent s'opposer aux bifidobactéries dans la dyade mère-nourrisson. Par conséquent, il existe un besoin de stratégies pour développer des aliments fonctionnels, y compris des préparations pour nourrissons, afin de fournir des souches bifidobactériennes naturellement présentes dans le lait maternel aux nourrissons qui peuvent être privés de tels microbes. Dans ce contexte, les objectifs de ce travail étaient, dans un premier temps, de caractériser les propriétés probiotiques potentielles d'une souche bifidobactérienne isolée du lait maternel et, dans un second temps, de tester son innocuité et sa tolérance dans une population d'enfants de 3 mois nourris au lait maternisé. nourrissons

Matériels et méthodes Conception de l'étude Une étude d'intervention contrôlée randomisée en double aveugle avec deux groupes d'étude a été réalisée. Des nourrissons de trois mois en bonne santé, qui, en raison du choix de leur mère, ont été exclusivement nourris au lait maternisé dès la naissance, ont été recrutés dans l'étude après avoir obtenu le consentement écrit éclairé des parents. Les enquêteurs ont pris des précautions et des précautions particulières tout au long de leur communication avec les familles afin de soutenir et de protéger, et de ne pas décourager l'allaitement, et de ne pas suggérer l'alimentation au biberon aux parents d'un bébé allaité. Les critères d'exclusion comprenaient des antécédents de troubles gastro-intestinaux légers ou graves (antécédents de diarrhée chronique ou de constipation, reflux gastro-oesophagien), de chirurgie gastro-intestinale, d'allergie aux protéines de lait de vache, de troubles métaboliques (diabète, intolérance au lactose), d'immunodéficience, de prescription d'antibiotiques trois semaines avant l'inclusion et l'utilisation antérieure d'une préparation contenant des probiotiques. Les critères d'exclusion au cours de l'étude étaient le non-respect du protocole de l'étude, les événements indésirables liés à la consommation de la formule à l'étude, l'absence de visites programmées au centre de soins primaires et les régurgitations et/ou coliques sévères qui, selon les pédiatres, nécessitaient une prescription. d'une formule spéciale.

Le protocole a été approuvé par le comité d'éthique de l'hôpital Clínico (Madrid, Espagne) (référence 10/017-E).

Taille de l'échantillon La taille de l'échantillon a été estimée sur la base du résultat principal de la prise de poids moyenne des nourrissons entre la visite de référence et la visite 1 (180 ± 5 jours d'âge). Sur la base de publications précédentes où la croissance était la principale variable de résultat dans le cadre d'une étude de sécurité, l'étude a été conçue pour avoir un pouvoir de détection d'une différence de gain de poids égale à 0,5 écart-type. Ainsi, il faudrait au moins 65 enfants dans chaque groupe de formule sous l'hypothèse de non-infériorité (test unilatéral), avec un seuil de signification de 2,5 % et une puissance de 80 %.

Formule d'étude Au total, 187 nourrissons (âgés de 3 mois) ont été recrutés et randomisés en deux groupes d'étude (groupe probiotique [PG] et groupe témoin [CG]), selon une randomisation générée par un programme informatique. Les nourrissons ont reçu l'une des préparations suivantes : (a) CG : une préparation en poudre standard pour nourrissons (HiPP 1, 600 g) avec une composition nutritionnelle conforme à la réglementation européenne en vigueur, et (b) PG : la même préparation complétée par B. breve PS1 à une dose de concentration de 107 ufc/g de formule. B. breve PS1 a été produit dans les installations de Biopolis (Valence, Espagne). Les deux formules ont été consommées par les nourrissons jusqu'à l'âge de 6 mois (période d'intervention de 3 mois).

La concentration du probiotique dans la formule a été analysée et confirmée avant et à la fin de l'étude. La préparation pour nourrissons HiPP originale a été achetée et préparée pour une utilisation appropriée dans un essai d'intervention en double aveugle. Par conséquent, la poudre de formule a été transférée dans des boîtes de conserve blanches non distinguables et un sous-ensemble a été complété avec la souche PS1.

La préparation des deux formules a été effectuée dans une salle blanche munie d'un dispositif d'emballage aseptique dans les installations du Dpt. de pharmacie galénique et de technologie alimentaire de l'Université Complutense de Madrid. Tout le personnel de l'étude (pédiatres et chercheurs) ainsi que les parents ont été maintenus en aveugle pendant toute la durée de l'étude. L'affectation du groupe n'a été révélée qu'à la fin de l'analyse statistique. Les pédiatres prescrivaient les quantités de préparations par jour à administrer aux nourrissons conformément aux directives de l'ESPGHAN.

Résultats de l'étude Les nourrissons devaient recevoir deux évaluations cliniques au cours de la période d'intervention : au départ (3 mois) et à la fin de l'étude (6 mois). Le critère de jugement principal de l'essai était le gain de poids moyen entre l'évaluation initiale et l'âge de 6 mois. Les critères de jugement secondaires comprenaient le gain moyen de longueur et de circonférence crânienne, les événements indésirables associés à la consommation de préparations pour nourrissons, les niveaux de bifidobactéries fécales et la concentration fécale d'acides gras à chaîne courte (SCFA).

Collecte et analyse d'échantillons fécaux Des échantillons fécaux ont été prélevés sur la couche lors des deux visites d'étude. Chaque échantillon fécal de chaque participant et moment de l'échantillonnage a été aliquoté en quatre parties, conservé à -20 ° C et traité en 1 semaine. Trois aliquotes ont été utilisées pour évaluer les paramètres d'étude définis, et la quatrième aliquote restante a été stockée à -80 °C.

La quantification des bifidobactéries dans les matières fécales a été réalisée en étalant des dilutions décimales des échantillons sur des plaques MRS additionnées de plaques de gélose à la L-cystéine (0,5 g/L) (MRS-Cys), qui ont été incubées en anaérobiose (85 % d'azote, 10 % d'hydrogène, 5 % dioxyde de carbone) dans un poste de travail anaérobie (MINI-MACS ; DW Scientific, Shipley, Royaume-Uni) pendant 72 h à 37 °C. Le dénombrement incluait les colonies qui correspondaient à Gram-positif catalase-négatif et F6PPK-positif. La détection et la quantification de l'ADN de B. breve dans les échantillons fécaux ont été réalisées par PCR quantitative en temps réel comme décrit précédemment.

Pour la quantification des acides gras à chaîne courte (SCFA), les échantillons fécaux ont été homogénéisés avec du NaHCO3 150 mM (pH 7,8) (1:5, poids/volume) dans une atmosphère d'argon. Les échantillons ont été incubés pour la fermentation pendant 24 h à 37°C et conservés à -80°C jusqu'à l'extraction. L'extraction des SCFA a été réalisée par chromatographie en phase gazeuse.

Analyse statistique Les données quantitatives ont été exprimées de manière descriptive sous forme de moyenne et d'écart type (ET). Lorsqu'elles n'étaient pas distribuées normalement, les données étaient présentées sous forme de médiane et d'intervalle interquartile (IQR).

Les données de mesure anthropométriques ont été résumées à l'aide de la moyenne et de l'écart type (SD), tandis que les numérations bactériennes intestinales ont été résumées par médiane et intervalle interquartile (IQR). De plus, les mesures anthropométriques ont été converties en scores z standardisés selon l'âge et le sexe à l'aide de la méthodologie recommandée par l'OMS et mise en œuvre dans le package R anthro version 1.0.0. Ensuite, le test t de l'étudiant a été utilisé pour comparer les moyennes par groupe de traitement des scores z pour le poids, la taille et la circonférence de la tête au point de temps de 6 mois. Les numérations bactériennes intestinales ont été comparées à l'aide du test non paramétrique de Mann-Whitney-U. Les tests ont été effectués au niveau de signification bilatéral de 5 % et les intervalles de confiance à 95 % ont été obtenus pour les estimations. Pour toutes les comparaisons, les différences ont été considérées comme significatives à p < 0,05. Les analyses statistiques ont été réalisées sous R version 4.2.1