Безопасность Bifidobacterium Breve PS1 для младенцев

Введение Некоторые перинатальные обстоятельства, такие как способ рождения, могут изменить состав микробиоты кишечника младенца. Например, дети, рожденные путем кесарева сечения, более склонны к дисбактериозу кишечника (включая истощение бифидобактерий) по сравнению с детьми, рожденными вагинальными родами, что приводит к увеличению частоты инфекций желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей. Интересно, что грудное вскармливание может восстанавливать популяцию бифидобактерий, что, в свою очередь, связано со снижением частоты различных инфекций.

Несмотря на важные функции, которые бифидобактерии могут выполнять в кишечнике младенцев, некоторые исследования показали, что эти бактерии могут присутствовать в низкой концентрации или даже отсутствовать у некоторых младенцев. Некоторые факторы, в том числе отсутствие грудного вскармливания, раннее отлучение от груди, антибактериальная терапия матери/младенца или состав ОПЗ могут влиять на бифидобактерии в паре мать-младенец. Таким образом, существует потребность в стратегиях разработки функциональных пищевых продуктов, в том числе детских смесей, для обеспечения штаммов бифидобактерий, естественным образом присутствующих в грудном молоке, младенцев, которые могут быть лишены таких микробов. В связи с этим целью данной работы было, во-первых, охарактеризовать потенциальные пробиотические свойства штамма бифидобактерий, выделенного из грудного молока, а затем проверить его безопасность и переносимость в популяции трехмесячных детей, находящихся на искусственном вскармливании. младенцы

Материалы и методы. Дизайн исследования. Было проведено рандомизированное двойное слепое контролируемое интервенционное исследование с двумя исследовательскими группами. Здоровые трехмесячные дети, которые по выбору их матерей находились на исключительно искусственном вскармливании с рождения, были включены в исследование после получения информированного письменного согласия родителей. Следователи принимали особые меры предосторожности и осторожности на протяжении всего общения с семьями, чтобы поддерживать и защищать, а не препятствовать грудному вскармливанию и не предлагать кормление из бутылочки родителям ребенка, находящегося на грудном вскармливании. Критерии исключения включали легкие или серьезные заболевания желудочно-кишечного тракта в анамнезе (хроническая диарея или запор в анамнезе, гастроэзофагеальный рефлюкс), операции на желудочно-кишечном тракте, аллергия на белки коровьего молока, нарушения обмена веществ (сахарный диабет, непереносимость лактозы), иммунодефицит, назначение антибиотиков за три недели до операции. включение и предшествующее использование смеси, содержащей пробиотики. Критериями исключения во время исследования были несоблюдение протокола исследования, нежелательные явления, связанные с употреблением исследуемой смеси, непосещение плановых визитов в центр первичной медико-санитарной помощи, тяжелая регургитация и/или колики, которые, по мнению педиатров, требовали назначения врача. специальной формулы.

Протокол был одобрен Комитетом по этике больницы Clínico (Мадрид, Испания) (Reference 10/017-E).

Размер выборки Размер выборки оценивался на основе первичного исхода средней прибавки массы тела младенцев между исходным визитом и визитом 1 (возраст 180 ± 5 дней). Основываясь на предыдущих публикациях, в которых рост был основной переменной результата в рамках исследования безопасности, исследование было разработано таким образом, чтобы иметь возможность обнаруживать разницу в прибавке веса, равную 0,5 стандартным отклонениям. Таким образом, в каждой формульной группе потребуется не менее 65 детей при допущении не меньшей эффективности (односторонний тест) с уровнем значимости 2,5% и мощностью 80%.

Формула исследования В общей сложности 187 младенцев (3-месячного возраста) были включены в исследование и рандомизированы в две исследовательские группы (пробиотическая группа [PG] и контрольная группа [CG]) в соответствии с рандомизацией, созданной компьютерной программой. Младенцы получали одну из следующих смесей: (a) CG: стандартная сухая детская смесь (HiPP 1, 600 г) с питательным составом в соответствии с действующими правилами ЕС, и (b) PG: та же смесь с добавлением B. breve ФС1 в дозе концентрации 107 КОЕ/г смеси. B. breve PS1 был получен на предприятиях Biopolis (Валенсия, Испания). Обе смеси употреблялись младенцами до возраста 6 месяцев (период вмешательства 3 месяца).

Концентрация пробиотика в формуле была проанализирована и подтверждена до и в конце исследования. Оригинальная детская смесь HiPP была приобретена и подготовлена ​​для надлежащего использования в двойном слепом интервенционном испытании. Поэтому порошок формулы был перенесен в простые белые неразличимые банки, а подмножество было дополнено штаммом PS1.

Приготовление обеих смесей проводили в чистом помещении, оборудованном асептической тарой в помещениях Отделения. галеновой фармации и пищевых технологий Мадридского университета Комплутенсе. Весь исследовательский персонал (педиатры и исследователи), а также родители были ослеплены на протяжении всего периода исследования. Присвоение группы было выявлено только после завершения статистического анализа. Педиатры прописали количество смеси в день для младенцев в соответствии с рекомендациями ESPGHAN.

Результаты исследования Младенцы должны были пройти две клинические оценки в течение периода вмешательства: в начале исследования (возраст 3 месяца) и в конце исследования (возраст 6 месяцев). Первичным результатом исследования была средняя прибавка веса между исходной оценкой и 6-месячным возрастом. Вторичные результаты включали увеличение средней длины тела и окружности головы, нежелательные явления, связанные с употреблением смеси, уровни бифидобактерий в кале и концентрацию короткоцепочечных жирных кислот (КЦЖК) в кале.

Сбор и анализ образцов кала Образцы кала были собраны с подгузника во время обоих визитов в рамках исследования. Каждый образец фекалий от каждого участника и время отбора делили на аликвоты на четыре части, сохраняли при -20 ° C и обрабатывали в течение 1 недели. Три аликвоты использовали для оценки определенных параметров исследования, а оставшуюся четвертую аликвоту хранили при -80 °C.

Количественную оценку бифидобактерий в фекалиях проводили путем посева десятичных разведений образцов на чашки с MRS, дополненные L-цистеином (0,5 г/л) (MRS-Cys) с агаром, которые инкубировали в анаэробных условиях (85% азота, 10% водорода, 5% диоксид углерода) на анаэробной рабочей станции (MINI-MACS; DW Scientific, Шипли, Великобритания) в течение 72 ч при 37°С. В подсчет включали колонии, соответствующие грамположительным каталазонегативным и F6PPK-положительным. Обнаружение и количественное определение ДНК B. breve в образцах фекалий выполняли с помощью количественной ПЦР в реальном времени, как описано ранее.

Для количественного определения короткоцепочечных жирных кислот (SCFA) образцы фекалий гомогенизировали с 150 мМ NaHCO3 (pH 7,8) (1:5, вес/объем) в атмосфере аргона. Образцы инкубировали для ферментации в течение 24 ч при 37°С и хранили при -80°С до экстракции. Экстракцию SCFA проводили газовой хроматографией.

Статистический анализ. Количественные данные были описательно выражены в виде среднего значения и стандартного отклонения (SD). При ненормальном распределении данные были представлены в виде медианы и межквартильного диапазона (IQR).

Данные антропометрических измерений суммировали с использованием среднего значения и стандартного отклонения (SD), в то время как количество бактерий в кишечнике суммировали по медиане и межквартильному диапазону (IQR). Кроме того, антропометрические измерения были преобразованы в стандартизированные по возрасту и полу z-показатели с использованием методологии, рекомендованной ВОЗ и реализованной в пакете R anthro версии 1.0.0. Затем использовали t-критерий Стьюдента для сравнения средних значений z-показателей веса, длины тела и окружности головы по группам, получавшим лечение, через 6 месяцев. Количество бактерий в кишечнике сравнивали с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни-U. Тесты проводились при двустороннем уровне значимости 5%, и для оценок были получены 95% доверительные интервалы. Для всех сравнений различия считались значимыми при p<0,05. Статистический анализ проводился с использованием R версии 4.2.1.