Bezpečnost Bifidobacterium Breve PS1 pro kojence

Úvod Některé perinatální okolnosti, jako je způsob porodu, mohou změnit složení střevní mikroflóry kojence. Například kojenci narození císařským řezem jsou náchylní ke střevní dysbióze (včetně vyčerpání bifidobakterií) ve srovnání s dětmi narozenými vaginálním porodem, což vede ke zvýšenému výskytu infekcí gastrointestinálního a respiračního traktu. Je zajímavé, že kojení může obnovit populaci Bifidobacterium, což bylo spojeno s poklesem četnosti různých infekcí.

Navzdory důležitým funkcím, které bifidobakterie mohou hrát ve střevě kojenců, některé studie ukázaly, že tyto bakterie mohou být u některých kojenců přítomny v nízké koncentraci nebo dokonce nepřítomné. Některé faktory, včetně nedostatečného kojení, předčasného odstavení, antibiotické terapie pro matku/dítě nebo složení HMO, mohou selektovat proti bifidobakteriím v dyádě matka-dítě. Proto existuje potřeba strategií pro vývoj funkčních potravin, včetně kojenecké výživy, pro poskytování bifidobakteriálních kmenů přirozeně přítomných v lidském mléce kojencům, kteří mohou být zbaveni takových mikrobů. V této souvislosti bylo cílem této práce nejprve charakterizovat potenciální probiotické vlastnosti bifidobakteriálního kmene izolovaného z lidského mléka a následně otestovat jeho bezpečnost a toleranci v populaci tříměsíčních krmených umělou výživou. kojenců

Materiály a metody Návrh studie Byla provedena randomizovaná dvojitě zaslepená kontrolovaná intervenční studie se dvěma studijními skupinami. Zdravá, tříměsíční kojenci, která byla podle volby jejich matek od narození výlučně krmena umělou výživou, byla zařazena do studie po obdržení informovaného písemného souhlasu od rodičů. Vyšetřovatelé přijali během komunikace s rodinami zvláštní opatření a péči, aby podpořili a ochránili kojení a neodrazovali od kojení a nenavrhovali rodičům kojeného dítěte krmení z láhve. Kritéria vyloučení zahrnovala anamnézu mírných nebo závažných gastrointestinálních poruch (chronický průjem nebo zácpa v anamnéze, gastroezofageální reflux), gastrointestinální chirurgii, alergii na bílkovinu kravského mléka, metabolické poruchy (diabetes, intolerance laktózy), imunodeficienci, předepisování antibiotik tři týdny před zařazení a předchozí použití formule obsahující probiotika. Kritéria pro vyloučení během studie byla nedodržování protokolu studie, nežádoucí příhody související s konzumací studijního vzorce, neúčast na plánovaných návštěvách centra primární péče a těžká regurgitace a/nebo kolika, které podle pediatrů vyžadovaly předpis speciální formule.

Protokol schválila Etická komise Hospital Clínico (Madrid, Španělsko) (Reference 10/017-E).

Velikost vzorku Velikost vzorku byla odhadnuta na základě primárního výsledku průměrného váhového přírůstku kojenců mezi základní návštěvou a návštěvou 1 (180 ± 5 dnů věku). Na základě předchozích publikací, kde byl růst primární výslednou proměnnou v rámci studie bezpečnosti, byla studie navržena tak, aby měla schopnost detekovat rozdíl v přírůstku hmotnosti rovnající se 0,5 směrodatné odchylky. Za předpokladu non-inferiority (jednostranný test) by tedy v každé skupině vzorců bylo potřeba alespoň 65 dětí s hladinou významnosti 2,5 % a silou 80 %.

Vzorec studie Celkem 187 kojenců (ve věku 3 měsíců) bylo zařazeno a randomizováno do dvou studijních skupin (probiotická skupina [PG] a kontrolní skupina [CG]) podle randomizace vytvořené počítačovým programem. Kojenci dostávali jednu z následujících výživ: (a) CG: standardní práškovou kojeneckou výživu (HiPP 1, 600 g) s nutričním složením v souladu s platnými předpisy EU a (b) PG: stejnou výživu doplněnou o B. breve PSI v koncentrační dávce 107 cfu/g vzorce. B. breve PS1 byl vyroben v závodech Biopolis (Valencia, Španělsko). Obě výživy kojenci konzumovali do věku 6 měsíců (3měsíční intervenční období).

Koncentrace probiotika ve výživě byla analyzována a potvrzena před a na konci studie. Původní kojenecká výživa HiPP byla zakoupena a připravena pro vhodné použití ve dvojitě zaslepené intervenční studii. Proto byl prášek formule převeden do obyčejných bílých nerozeznatelných plechovek a podskupina byla doplněna o kmen PS1.

Příprava obou receptur byla prováděna v čistém prostoru vybaveném aseptickým balicím zařízením v prostorách kliniky. z galenické farmacie a potravinářské technologie na Complutense University v Madridu. Veškerý studijní personál (pediatři a výzkumní pracovníci) i rodiče byli po celou dobu studie zaslepeni. Přiřazení skupiny bylo odhaleno až po dokončení statistické analýzy. Pediatři předepsali množství umělé výživy za den, které se má podávat kojencům podle pokynů ESPGHAN.

Výsledky studie U kojenců byla naplánována dvě klinická hodnocení během období intervence: na začátku studie (ve věku 3 měsíců) a na konci studie (ve věku 6 měsíců). Primárním výsledkem studie byl průměrný přírůstek hmotnosti mezi výchozím hodnocením a 6. měsícem věku. Sekundární výsledky zahrnovaly průměrnou délku a přírůstek obvodu hlavy, nežádoucí účinky spojené s konzumací umělé výživy, hladiny fekálních bifidobakterií a fekální koncentraci mastných kyselin s krátkým řetězcem (SCFA).

Sběr a analýza vzorků stolice Vzorky stolice byly odebrány z pleny při obou studijních návštěvách. Každý vzorek stolice od každého účastníka a doba odběru byla rozdělena na čtyři části, uchována při -20 °C a zpracována do 1 týdne. Tři alikvoty byly použity k vyhodnocení definovaných parametrů studie a zbývající čtvrtý alikvot byl uložen při -80 °C.

Kvantifikace bifidobakterií ve stolici byla provedena nanesením dekadických ředění vzorků na misky MRS doplněné agarovými misky s L-cysteinem (0,5 g/l) (MRS-Cys), které byly inkubovány anaerobně (85 % dusík, 10 % vodík, 5 % oxid uhličitý) v anaerobní pracovní stanici (MINI-MACS; DW Scientific, Shipley, Spojené království) po dobu 72 hodin při 37 °C. Výčet zahrnoval kolonie, které odpovídaly Gram-pozitivní kataláza-negativní a F6PPK-pozitivní. Detekce a kvantifikace DNA B. breve ve vzorcích stolice byla provedena kvantitativní PCR v reálném čase, jak bylo popsáno dříve.

Pro kvantifikaci mastných kyselin s krátkým řetězcem (SCFA) byly vzorky stolice homogenizovány se 150 mM NaHC03 (pH 7,8) (1:5, hmotn./obj.) v argonové atmosféře. Vzorky byly inkubovány pro fermentaci po dobu 24 hodin při 37 °C a skladovány při -80 °C až do extrakce. Extrakce SCFA byla provedena plynovou chromatografií.

Statistická analýza Kvantitativní data byla vyjádřena popisně jako průměr a standardní odchylka (SD). Pokud data nebyla normálně distribuována, byla prezentována jako medián a interkvartilní rozmezí (IQR).

Data antropometrického měření byla shrnuta pomocí průměru a standardní odchylky (SD), zatímco počty střevních bakterií byly shrnuty podle mediánu a interkvartilního rozmezí (IQR). Kromě toho byla antropometrická měření převedena na z-skóre standardizované podle věku a pohlaví pomocí metodologie doporučené WHO a implementované v balíčku R anthro verze 1.0.0. Dále byl studentův t-test použit k porovnání středních hodnot z skóre pro hmotnost, délku a obvod hlavy v léčebné skupině v časovém bodě 6 měsíců. Počty střevních bakterií byly porovnány pomocí Mann-Whitney-U neparametrického testu. Testy byly provedeny na oboustranné 5% hladině významnosti a pro odhady byly získány 95% intervaly spolehlivosti. Pro všechna srovnání byly rozdíly považovány za významné při p < 0,05. Statistické analýzy byly provedeny pomocí R verze 4.2.1