Seguridad de Bifidobacterium Breve PS1 para bebés

Introducción Algunas circunstancias perinatales, como el modo de nacimiento, pueden alterar la composición de la microbiota intestinal infantil. A modo de ejemplo, los bebés nacidos por cesárea son propensos a la disbiosis intestinal (incluida la disminución de las bifidobacterias) en comparación con los nacidos por parto vaginal, lo que lleva a una mayor tasa de infecciones gastrointestinales y del tracto respiratorio. Curiosamente, la lactancia materna puede restaurar la población de Bifidobacterium, que a su vez se asoció con una disminución en la tasa de diversas infecciones.

A pesar de las funciones importantes que las bifidobacterias pueden desempeñar en el intestino de los bebés, algunos estudios han demostrado que estas bacterias pueden estar presentes en una concentración baja o incluso ausentes en algunos bebés. Algunos factores, como la falta de lactancia materna, el destete temprano, la terapia antibiótica maternoinfantil o la composición de HMO pueden seleccionar contra las bifidobacterias en la díada madre-bebé. Por lo tanto, existe la necesidad de estrategias para desarrollar alimentos funcionales, incluida la fórmula infantil, para proporcionar cepas de bifidobacterias naturalmente presentes en la leche humana a los bebés que pueden verse privados de dichos microbios. En este contexto, los objetivos de este trabajo fueron, en primer lugar, caracterizar las propiedades probióticas potenciales de una cepa de bifidobacteria aislada de la leche humana y, posteriormente, probar su seguridad y tolerancia en una población de lactantes de 3 meses de edad alimentados con fórmula. infantes

Materiales y métodos Diseño del estudio Se llevó a cabo un estudio de intervención controlado, aleatorizado, doble ciego, con dos grupos de estudio. Los bebés sanos de tres meses de edad, que debido a la elección de sus madres fueron alimentados exclusivamente con fórmula desde el nacimiento, fueron incluidos en el estudio después de obtener el consentimiento informado por escrito de los padres. Los investigadores tomaron precauciones y cuidados especiales a lo largo de su comunicación con las familias para apoyar y proteger, y no desalentar la lactancia materna, y no sugerir la alimentación con biberón a los padres de un bebé amamantado. Los criterios de exclusión incluyeron antecedentes de trastornos gastrointestinales leves o graves (antecedentes de diarrea crónica o estreñimiento, reflujo gastroesofágico), cirugía gastrointestinal, alergia a la proteína de la leche de vaca, trastornos metabólicos (diabetes, intolerancia a la lactosa), inmunodeficiencia, prescripción de antibióticos tres semanas antes de inclusión y uso previo de fórmula que contiene probióticos. Los criterios de exclusión durante el estudio fueron la falta de cumplimiento del protocolo del estudio, los eventos adversos relacionados con el consumo de la fórmula del estudio, la no asistencia a las visitas programadas al centro de atención primaria y la regurgitación severa y/o cólico que, según los pediatras, necesitaba prescripción. de una fórmula especial.

El protocolo fue aprobado por el Comité Ético del Hospital Clínico (Madrid, España) (Referencia 10/017-E).

Tamaño de la muestra El tamaño de la muestra se calculó en función del resultado primario de aumento de peso promedio de los lactantes entre la visita inicial y la visita 1 (180 ± 5 días de edad). Basado en publicaciones anteriores donde el crecimiento era la variable de resultado principal como parte de un estudio de seguridad, el estudio se diseñó para tener un poder para detectar una diferencia en el aumento de peso igual a 0,5 desviaciones estándar. Así, se necesitarían al menos 65 niños en cada grupo de fórmula bajo el supuesto de no inferioridad (test unilateral), con un nivel de significancia del 2,5% y una potencia del 80%.

Fórmula del estudio Un total de 187 bebés (3 meses de edad) fueron reclutados y aleatorizados en dos grupos de estudio (grupo probiótico [PG] y grupo control [GC]), según una aleatorización generada por un programa informático. Los lactantes recibieron una de las siguientes fórmulas: (a) CG: una fórmula infantil en polvo estándar (HiPP 1, 600 g) con una composición nutricional de acuerdo con la normativa vigente de la UE, y (b) PG: la misma fórmula suplementada con B. breve PS1 a una dosis de concentración de 107 ufc/g de fórmula. B. breve PS1 se produjo en las instalaciones de Biopolis (Valencia, España). Ambas fórmulas fueron consumidas por los lactantes hasta los 6 meses de edad (período de intervención de 3 meses).

La concentración del probiótico en la fórmula fue analizada y confirmada antes y al final del estudio. La fórmula infantil HiPP original se compró y preparó para el uso apropiado en un ensayo de intervención doble ciego. Por lo tanto, la fórmula en polvo se transfirió a latas blancas indistinguibles y un subconjunto se complementó con la cepa PS1.

La preparación de ambas fórmulas se realizó en una sala limpia provista de un dispositivo de envasado aséptico en las instalaciones del Dpt. de Farmacia Galénica y Tecnología de los Alimentos de la Universidad Complutense de Madrid. Todo el personal del estudio (pediatras e investigadores), así como los padres, permanecieron ciegos durante todo el período del estudio. La asignación del grupo solo se reveló al finalizar el análisis estadístico. Los pediatras prescribieron las cantidades de fórmula por día a administrar a los lactantes siguiendo las pautas de la ESPGHAN.

Resultados del estudio Se programó que los bebés recibieran dos evaluaciones clínicas durante el período de intervención: al inicio (3 meses de edad) y al final del estudio (6 meses de edad). El resultado primario del ensayo fue el aumento de peso promedio entre la evaluación inicial y los 6 meses de edad. Los resultados secundarios incluyeron la longitud promedio y el aumento del perímetro cefálico, los eventos adversos asociados con el consumo de fórmula, los niveles de bifidobacterias fecales y la concentración fecal de ácidos grasos de cadena corta (SCFA).

Recolección y análisis de muestras fecales Se recolectaron muestras fecales del pañal en ambas visitas de estudio. Cada muestra fecal de cada participante y tiempo de muestreo se alicuotó en cuatro partes, se conservó a -20 °C y se procesó en 1 semana. Se utilizaron tres alícuotas para evaluar los parámetros de estudio definidos y la cuarta alícuota restante se almacenó a -80 °C.

La cuantificación de bifidobacterias en heces se realizó sembrando diluciones decimales de las muestras en placas MRS suplementadas con placas de agar L-cisteína (0,5 g/L) (MRS-Cys), que se incubaron anaeróbicamente (85 % nitrógeno, 10 % hidrógeno, 5 % dióxido de carbono) en una estación de trabajo anaeróbica (MINI-MACS; DW Scientific, Shipley, Reino Unido) durante 72 h a 37ºC. La enumeración incluyó las colonias que correspondían a Gram-positivas catalasa-negativas y F6PPK-positivas. La detección y cuantificación del ADN de B. breve en las muestras fecales se realizó mediante PCR cuantitativa en tiempo real como se describió anteriormente.

Para la cuantificación de ácidos grasos de cadena corta (AGCC), las muestras fecales se homogeneizaron con NaHCO3 150 mM (pH 7,8) (1:5, peso/volumen) en una atmósfera de argón. Las muestras se incubaron para la fermentación durante 24 h a 37 °C y se almacenaron a -80 °C hasta la extracción. La extracción de SCFA se realizó por cromatografía de gases.

Análisis estadístico Los datos cuantitativos se expresaron descriptivamente como media y desviación estándar (DE). Cuando no se distribuían normalmente, los datos se presentaban como la mediana y el rango intercuartílico (RIC).

Los datos de las mediciones antropométricas se resumieron mediante la media y la desviación estándar (DE), mientras que los recuentos de bacterias intestinales se resumieron mediante la mediana y el rango intercuartílico (RIC). Además, las medidas antropométricas se convirtieron en puntajes z estandarizados por edad y sexo utilizando la metodología recomendada por la OMS e implementada en el paquete R anthro versión 1.0.0. A continuación, se utilizó la prueba t de Student para comparar las medias por grupo de tratamiento de las puntuaciones z para el peso, la longitud y la circunferencia de la cabeza en el punto temporal de 6 meses. Los recuentos de bacterias intestinales se compararon mediante la prueba no paramétrica de Mann-Whitney-U. Las pruebas se realizaron con un nivel de significancia bilateral del 5 % y se obtuvieron los intervalos de confianza del 95 % para las estimaciones. Para todas las comparaciones, las diferencias se consideraron significativas a p< 0,05. Los análisis estadísticos se realizaron utilizando R versión 4.2.1