Bifidobacterium Breve PS1:n turvallisuus vauvoille

Johdanto Jotkut perinataaliset olosuhteet, kuten syntymätapa, voivat muuttaa vauvan suoliston mikrobiston koostumusta. Esimerkiksi keisarinleikkauksella syntyneet lapset ovat alttiita suoliston dysbioosille (mukaan lukien bifidobakteerien väheneminen) verrattuna emättimen kautta syntyneisiin lapsiin, mikä johtaa ruoansulatuskanavan ja hengitysteiden infektioiden lisääntymiseen. Mielenkiintoista on, että imetys voi palauttaa Bifidobacterium-populaation, mikä puolestaan ​​​​on liittynyt erilaisten infektioiden määrän vähenemiseen.

Huolimatta tärkeistä toiminnoista, joita bifidobakteerit voivat suorittaa pikkulasten suolistossa, jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, että näitä bakteereja voi esiintyä pieninä pitoisuuksina tai jopa puuttua joillakin vauvoilla. Jotkut tekijät, mukaan lukien imetyksen puute, varhainen vieroitus, äidin/lapsen antibioottihoito tai HMO-koostumus, voivat valita bifidobakteereja vastaan ​​äiti-vauva-dyadissa. Siksi tarvitaan strategioita funktionaalisten elintarvikkeiden, mukaan lukien äidinmaidonkorvikkeen, kehittämiseksi, jotta äidinmaidossa luonnollisesti esiintyviä bifidobakteerikantoja voidaan tarjota imeväisille, jotka saattavat jäädä ilman tällaisia ​​mikrobeja. Tässä yhteydessä tämän työn tavoitteena oli ensinnäkin luonnehtia äidinmaidosta eristetyn bifidobakteerikannan mahdollisia probioottisia ominaisuuksia ja sen jälkeen testata sen turvallisuutta ja sietokykyä 3 kuukauden ikäisessä korvikkeella ruokitussa populaatiossa. pikkulapsille

Materiaalit ja menetelmät Tutkimussuunnittelu Suoritettiin satunnaistettu kaksoissokkoutettu kontrolloitu interventiotutkimus kahdella tutkimusryhmällä. Terveet, kolmen kuukauden ikäiset vauvat, jotka äitinsä valinnan vuoksi saivat syntymästään lähtien yksinomaan maidolla ruokittua, otettiin mukaan tutkimukseen, kun vanhemmilta oli saatu tietoinen kirjallinen suostumus. Tutkijat noudattivat erityisiä varotoimia ja huolellisuutta koko kommunikoinnin ajan perheiden kanssa tukeakseen ja suojellakseen, eivätkä lannistaneet imetystä eivätkä ehdottaneet pulloruokintaa imetettävän vauvan vanhemmille. Poissulkemiskriteerit sisälsivät lieviä tai vakavia maha-suolikanavan sairauksia (aiemmin krooninen ripuli tai ummetus, gastroesofageaalinen refluksi), maha-suolikanavan leikkaus, lehmänmaidon proteiiniallergia, aineenvaihduntahäiriöt (diabetes, laktoosi-intoleranssi), immuunipuutos, antibioottiresepti kolme viikkoa ennen probioottia sisältävän kaavan sisällyttäminen ja aikaisempi käyttö. Poissulkemiskriteereinä tutkimuksen aikana olivat tutkimusprotokollan noudattamatta jättäminen, tutkimusreseptin nauttimiseen liittyvät haittatapahtumat, määrättyjen käyntien puuttuminen perusterveydenhuollossa sekä vaikea regurgitaatio ja/tai koliikki, jotka lastenlääkärien mukaan vaativat reseptiä. erityisellä kaavalla.

Protokollan hyväksyi Hospital Clínicon (Madrid, Espanja) eettinen komitea (viite 10/017-E).

Otoskoko Näytteen koko arvioitiin vauvojen keskimääräisen painonnousun ensisijaisen tuloksen perusteella lähtötilanteen ja 1. käynnin välillä (180 ± 5 päivän ikä). Perustuen aikaisempiin julkaisuihin, joissa kasvu oli pääasiallinen tulosmuuttuja osana turvallisuustutkimusta, tutkimuksen tarkoituksena oli havaita 0,5 keskihajonnan suuruinen ero painonnousussa. Näin ollen kuhunkin kaavaryhmään tarvittaisiin vähintään 65 lasta oletuksena ei-alempiarvoisuus (yksipuolinen testi) merkitsevyystasolla 2,5 % ja teholla 80 %.

Tutkimuskaava Yhteensä 187 vauvaa (3 kuukauden ikäisiä) otettiin mukaan ja satunnaistettiin kahteen tutkimusryhmään (probioottiryhmä [PG] ja kontrolliryhmä [CG]) tietokoneohjelman tuottaman satunnaistuksen mukaisesti. Imeväiset saivat jommankumman seuraavista äidinmaidonkorvikkeista: (a) CG: normaali jauhemainen äidinmaidonkorvike (HiPP 1, 600 g), jonka ravintokoostumus on voimassa olevien EU-säädösten mukainen, ja (b) PG: sama kaava täydennettynä B. brevellä PS1 konsentraatioannoksella 107 pmy/g kaavaa. B. breve PS1 valmistettiin Biopoliksen tuotantolaitoksissa (Valencia, Espanja). Imeväiset söivät molempia korvikkeita 6 kuukauden ikään asti (3 kuukauden interventiojakso).

Probiootin pitoisuus kaavassa analysoitiin ja vahvistettiin ennen tutkimusta ja sen lopussa. Alkuperäinen HiPP äidinmaidonkorvike ostettiin ja valmisteltiin sopivaa käyttöä varten kaksoissokkoutetussa interventiokokeessa. Siksi kaavajauhe siirrettiin tavallisiin valkoisiin erottumattomiin tölkkeihin ja osajoukkoa täydennettiin kannalla PS1.

Molempien seosten valmistus suoritettiin puhtaassa huoneessa, jossa oli aseptinen pakkauslaite Dpt:n tiloissa. Galenic Pharmacy and Food Technology Madridin Complutense-yliopistosta. Kaikki tutkimushenkilöstö (lastenlääkärit ja tutkijat) sekä vanhemmat pidettiin sokeina koko tutkimusajan. Ryhmätehtävä paljastettiin vasta tilastollisen analyysin valmistuttua. Lastenlääkärit määräsivät vauvoille annettavat korvikemäärät päivässä ESPGHAN-ohjeiden mukaisesti.

Tutkimustulokset Imeväisille suunniteltiin kaksi kliinistä arviointia interventiojakson aikana: lähtötilanteessa (3 kuukauden ikäinen) ja tutkimuksen lopussa (6 kuukauden ikäinen). Kokeen ensisijainen tulos oli keskimääräinen painonnousu lähtötilanteen arvioinnin ja 6 kuukauden iän välillä. Toissijaisiin tuloksiin sisältyivät keskipituuden ja pään ympärysmitan kasvu, reseptin kulutukseen liittyvät haittatapahtumat, ulosteen bifidobakteeritasot ja lyhytketjuisten rasvahappojen (SCFA) pitoisuus ulosteessa.

Ulostenäytteen otto ja analyysi Ulostenäytteet otettiin vaipasta molemmilla tutkimuskäynneillä. Jokainen ulostenäyte jokaiselta osallistujalta ja näytteenottoaika jaettiin neljään osaan, säilytettiin -20 °C:ssa ja käsiteltiin viikon sisällä. Kolmea alikvoottia käytettiin määritettyjen tutkimusparametrien arvioimiseen, ja loput neljäs osa säilytettiin -80 °C:ssa.

Bifidobakteerien kvantifiointi ulosteessa suoritettiin maljaamalla näytteiden desimaalilaimennokset MRS-maljoille, joita oli täydennetty L-kysteiinillä (0,5 g/l) (MRS-Cys) agarmaljoilla, joita inkuboitiin anaerobisesti (85 % typpeä, 10 % vetyä, 5 % hiilidioksidi) anaerobisessa työasemassa (MINI-MACS; DW Scientific, Shipley, Yhdistynyt kuningaskunta) 72 tunnin ajan 37 ºC:ssa. Luettelo sisälsi pesäkkeet, jotka vastasivat grampositiivisia katalaasinegatiivisia ja F6PPK-positiivisia. B. breven DNA:n havaitseminen ja kvantifiointi ulostenäytteistä suoritettiin reaaliaikaisella kvantitatiivisella PCR:llä, kuten aiemmin on kuvattu.

Lyhytketjuisten rasvahappojen (SCFA) kvantifiointia varten ulostenäytteet homogenisoitiin 150 mM NaHC03:lla (pH 7,8) (1:5, paino/tilavuus) argonatmosfäärissä. Näytteitä inkuboitiin fermentaatiota varten 24 tuntia 37 °C:ssa ja säilytettiin -80 °C:ssa uuttamiseen asti. SCFA:n uutto suoritettiin kaasukromatografialla.

Tilastollinen analyysi Kvantitatiiviset tiedot ilmaistiin kuvailevasti keskiarvona ja keskihajonnana (SD). Kun tiedot eivät jakautuneet normaalisti, ne esitettiin mediaani- ja kvartiilien välisenä vaihteluvälinä (IQR).

Antropometriset mittaustiedot koottiin käyttäen keskiarvoa ja standardipoikkeamaa (SD), kun taas suoliston bakteerimäärät koottiin mediaanin ja kvartiilien välisen alueen (IQR) mukaan. Lisäksi antropometriset mittaukset muunnettiin iän ja sukupuolen mukaan standardoiduiksi z-pisteiksi WHO:n suosittelemalla metodologialla ja toteutettiin R-paketin anthro-versiossa 1.0.0. Seuraavaksi opiskelijan t-testiä käytettiin vertaamaan painon, pituuden ja pään ympärysmitan z-pisteiden keskiarvoja hoitoryhmittäin 6 kuukauden ajankohdassa. Suoliston bakteerimääriä verrattiin käyttämällä Mann-Whitney-U ei-parametrista testiä. Testit suoritettiin kaksipuolisella 5 %:n merkitsevyystasolla ja arvioille saatiin 95 %:n luottamusvälit. Kaikissa vertailuissa eroja pidettiin merkitsevinä arvolla p < 0,05. Tilastolliset analyysit suoritettiin R-versiolla 4.2.1