A Bifidobacterium Breve PS1 biztonsága csecsemők számára

Bevezetés Egyes perinatális körülmények, mint például a születés módja, megváltoztathatják a csecsemő bélmikrobiótájának összetételét. Például a császármetszéssel született csecsemők hajlamosak a bélrendszeri diszbiózisra (beleértve a bifidobaktériumok kimerülését is), összehasonlítva a hüvelyi úton született csecsemőkkel, ami a gyomor-bélrendszeri és légúti fertőzések megnövekedett arányához vezet. Érdekes módon a szoptatás helyreállíthatja a Bifidobacterium populációt, ami viszont a különféle fertőzések arányának csökkenésével járt.

Annak ellenére, hogy a bifidobaktériumok fontos szerepet játszhatnak a csecsemők bélrendszerében, egyes tanulmányok kimutatták, hogy ezek a baktériumok alacsony koncentrációban lehetnek jelen, vagy egyes csecsemőkben hiányozhatnak. Egyes tényezők, köztük a szoptatás hiánya, a korai elválasztás, az anya/csecsemő antibiotikum-terápia vagy a HMO összetétele, szelektálódhatnak a bifidobaktériumokkal szemben az anya-csecsemő diádban. Ezért stratégiákra van szükség a funkcionális élelmiszerek, köztük az anyatej-helyettesítő tápszerek kifejlesztésére, hogy az anyatejben természetesen jelenlévő bifidobaktérium-törzseket biztosítsanak az ilyen mikrobáktól megfosztott csecsemőknek. Ebben az összefüggésben a munka célja először is az volt, hogy jellemezze az anyatejből izolált bifidobaktérium törzs lehetséges probiotikus tulajdonságait, majd tesztelje biztonságosságát és toleranciáját egy 3 hónapos tápszerrel táplált populációban. csecsemők

Anyagok és módszerek Vizsgálati terv Egy randomizált, kettős vak, kontrollált beavatkozási vizsgálatot végeztünk két vizsgálati csoport részvételével. Egészséges, három hónapos csecsemőket, akik anyjuk döntése alapján születésüktől kezdve kizárólag tápszerrel táplálkoztak, a szülők tájékozott, írásos beleegyezése után vettek részt a vizsgálatban. A nyomozók különös óvintézkedéseket és körültekintést tettek a családdal folytatott kommunikáció során annak érdekében, hogy támogassák és védjék, és ne gátolják a szoptatást, és ne javasolják a szoptatott baba szüleinek a lombikbébiét. A kizárási kritériumok közé tartozott az anamnézisben szereplő enyhe vagy súlyos gyomor-bélrendszeri rendellenességek (kórtörténetében krónikus hasmenés vagy székrekedés, gastrooesophagealis reflux), gyomor-bélrendszeri műtét, tehéntejfehérje allergia, anyagcserezavarok (cukorbetegség, laktóz intolerancia), immunhiány, antibiotikum felírása három héttel a kezelés előtt. probiotikum tartalmú tápszer felvétele és korábbi használata. A vizsgálat során a kizárási kritériumok a következők voltak: a vizsgálati protokollnak való megfelelés hiánya, a vizsgálati tápszer fogyasztásával kapcsolatos nemkívánatos események, az alapellátási központ tervezett látogatásának elmulasztása, valamint a súlyos regurgitáció és/vagy kólika, amely a gyermekorvosok szerint vényköteles volt. egy speciális képlet.

A protokollt a Hospital Clínico (Madrid, Spanyolország) etikai bizottsága hagyta jóvá (hivatkozás 10/017-E).

A minta mérete A minta méretét a csecsemők átlagos súlygyarapodásának elsődleges eredménye alapján becsülték meg a kiindulási vizit és az 1. vizit között (180 ± 5 napos életkor). A korábbi publikációk alapján, ahol a növekedés volt az elsődleges kimeneti változó a biztonsági tanulmány részeként, a tanulmányt úgy tervezték meg, hogy képes legyen kimutatni a súlygyarapodásban bekövetkező különbséget, amely 0,5 szórással egyenlő. Így a nem alsóbbrendűség (egyoldalú teszt) feltételezése mellett minden tápszercsoportban legalább 65 gyerekre lenne szükség, 2,5%-os szignifikanciaszinttel és 80%-os erővel.

Vizsgálati képlet Összesen 187 (3 hónapos) csecsemőt vontak be, és randomizáltak két vizsgálati csoportba (probiotikus csoport [PG] és kontrollcsoport [CG]), egy számítógépes program által generált randomizálásnak megfelelően. A csecsemők a következő tápszerek egyikét kapták: (a) CG: szabványos porított anyatej-helyettesítő tápszer (HiPP 1, 600 g), amelynek tápanyag-összetétele megfelel a jelenlegi EU-előírásoknak, és (b) PG: ugyanaz a tápszer B. breve-vel kiegészítve. PS1 107 cfu/g képlet koncentrációban. A B. breve PS1-et a Biopolis (Valencia, Spanyolország) létesítményeiben gyártották. Mindkét tápszert a csecsemők 6 hónapos korukig fogyasztották (3 hónapos beavatkozási időszak).

A probiotikum koncentrációját a képletben elemezték és megerősítették a vizsgálat előtt és végén. Az eredeti HiPP csecsemőtápszert megvásárolták és előkészítették a megfelelő felhasználásra egy kettős vak beavatkozási kísérlet során. Ezért a formulaport sima fehér, megkülönböztethetetlen konzervdobozokba vittük át, és egy részhalmazt kiegészítettek a PS1 törzzsel.

Mindkét tápszer elkészítése a Dpt. létesítményeiben aszeptikus csomagoló berendezéssel ellátott tiszta helyiségben történt. a Madridi Complutense Egyetem Galenikus Gyógyszerészet és Élelmiszertechnológia szakán. A vizsgálatban részt vevő összes személyzetet (gyermekorvosokat és kutatókat), valamint a szülőket a vizsgálat teljes időtartama alatt vakon tartották. A csoportbeosztás csak a statisztikai elemzés befejezése után derült ki. A gyermekorvosok az ESPGHAN irányelveit követve írták elő a csecsemőknek beadandó tápszer napi mennyiségét.

A vizsgálat eredményei A csecsemőket a beavatkozási időszak alatt két klinikai értékelésnek vetették alá: a kiinduláskor (3 hónapos korban) és a vizsgálat végén (6 hónapos korban). A vizsgálat elsődleges eredménye az átlagos súlygyarapodás volt a kiindulási értékelés és a 6 hónapos életkor között. A másodlagos kimenetelek közé tartozott az átlagos hosszúság és a fejkörfogat növekedése, a tápszer fogyasztásával kapcsolatos mellékhatások, a széklet bifidobaktérium-szintje és a rövid láncú zsírsavak (SCFA) székletkoncentrációja.

Székletminta gyűjtése és elemzése Mindkét vizsgálati látogatás alkalmával székletmintákat vettünk a pelenkából. Az egyes résztvevőktől származó minden székletmintát és a mintavételi időt négy részre osztották, -20 °C-on tárolták és 1 héten belül feldolgozták. Három alikvot részt használtunk a meghatározott vizsgálati paraméterek értékelésére, a fennmaradó negyedik alikvotot pedig -80 °C-on tároltuk.

A bifidobaktériumok mennyiségi meghatározását a székletben úgy végeztük, hogy a minták decimális hígításait L-cisztein (0,5 g/L) (MRS-Cys) agarlemezekkel kiegészített MRS lemezekre szélesztettük, amelyeket anaerob módon (85% nitrogén, 10% hidrogén, 5%) inkubáltunk. szén-dioxid) anaerob munkaállomáson (MINI-MACS; DW Scientific, Shipley, Egyesült Királyság) 72 órán keresztül 37 °C-on. A felsorolás tartalmazza azokat a telepeket, amelyek Gram-pozitív kataláz-negatívnak és F6PPK-pozitívnak feleltek meg. A B. breve DNS kimutatását és mennyiségi meghatározását a székletmintákban valós idejű kvantitatív PCR-rel végeztük a korábban leírtak szerint.

A rövid szénláncú zsírsavak (SCFA) mennyiségi meghatározásához a székletmintákat 150 mM NaHCO3-mal (pH 7,8) (1:5, tömeg/térf.) homogenizáltuk argonatmoszférában. A mintákat 24 órán keresztül 37 °C-on inkubáltuk fermentációhoz, és -80 °C-on tároltuk az extrakcióig. Az SCFA extrakcióját gázkromatográfiával végeztük.

Statisztikai elemzés A kvantitatív adatokat leíró módon az átlag és a szórás (SD) formájában fejeztük ki. Ha nem normális eloszlású, az adatokat medián és inter-kvartilis tartományként (IQR) mutattuk be.

Az antropometrikus mérési adatokat az átlag és a standard deviáció (SD), míg a bélbaktériumok számát medián és inter-kvartilis tartomány (IQR) alapján összegeztük. Ezenkívül az antropometrikus méréseket a WHO által ajánlott módszertan segítségével, az R csomag anthro 1.0.0 verziójában implementálva életkor és nem szerinti standardizált z-pontszámokká konvertálták. Ezt követően a hallgató t-próbáját használták a súly, hossz és fejkörfogat z pontszámainak kezelési csoportonkénti átlagainak összehasonlítására a 6 hónapos időpontban. A bélbaktériumok számát a Mann-Whitney-U nem-paraméteres teszttel hasonlítottuk össze. A teszteket a kétoldali 5%-os szignifikancia szinten végeztük, és a becslésekhez a 95%-os konfidencia intervallumokat kaptuk. Valamennyi összehasonlításnál a különbségeket p<0,05 értéknél tekintettük szignifikánsnak. A statisztikai elemzéseket az R 4.2.1-es verziójával végeztük