소아 백혈병의 위장관 독성 예방을 위한 프로바이오틱스의 효과

배경 급성 림프구성 백혈병(ALL)은 미성숙 림프구 세포의 조절되지 않는 증식을 특징으로 하는 악성 질환입니다. 이는 멕시코에서 전체 종양학적 과정의 최대 53.1%를 차지하는 어린이에게 가장 흔한 신생물입니다[1-6]. 다행스럽게도 현재의 화학요법 치료법을 사용하면 98%의 사례에서 질병 완화가 달성됩니다. 그러나 화학요법 치료에는 최대 50%의 사망률과 관련된 위장관 독성(7.7~32.5%)을 유발할 수 있는 부작용이 있습니다.

이러한 독성으로 인해 발생하는 가장 흔한 위장관 증상으로는 점막염, 췌장염(2~8%), 설사(10~82%), Bacillus spp 및 Bidifobacterium spp 감소와 관련된 대장염이 있으며 이는 장의 괴사 및 장 천공 위험을 증가시킵니다. 말단 회장 및 맹장. 따라서 주로 피부와 점막에서 평형을 유지하며 살아가는 부생 미생물(박테리아, 바이러스, 진균, 원생동물)의 그룹인 프로바이오틱스와 같은 위장관 독성의 발생을 감소시킬 수 있는 제제를 확인하기 위한 여러 연구가 진행되어 왔습니다. 소장이 주목을 받았습니다.

프로바이오틱스는 탄수화물, 단쇄 지방산 및 칼슘의 흡수를 촉진하는 것과 같은 여러 가지 유익한 기능을 가지고 있는 것으로 알려져 있습니다. 지질과 비타민의 합성을 촉진합니다. 장 점막의 염증 매개체 농도를 조절하고 감소시킵니다. 점막 혈류를 개선하여 장의 허혈성 부위의 위험을 줄입니다. 면역 체계를 강화하십시오.

화학 요법의 독성 효과를 예방하거나 감소시키기 위해 프로바이오틱스의 사용에 대한 연구가 진행되었지만, 프로바이오틱스의 효과가 여러 조합으로 분석되어 문별 특정 효과를 구별하기 어렵기 때문에 결과는 여전히 결정적이지 않습니다. 이는 이러한 환자의 치료 품질을 향상시키기 위한 표준화된 치료 계획의 생성을 복잡하게 만듭니다. 이 프로젝트가 이러한 프로바이오틱스의 효과와 안전성을 성공적으로 확인한다면, 해당 환자의 의료 질을 개선하고 화학요법 투여로 인한 2차 위장 합병증의 빈도와 심각도를 줄이는 것을 목표로 하는 새로운 치료 전략의 개발이 가능해질 것입니다.

목적 ALL로 진단된 소아 환자에서 위장 독성 위험 감소, 장 투과성 감소, 장내 미생물 변화 없이 락토바실러스 카제이, 락토바실러스 람노서스 및 비피도박테리움 비피덤 투여의 효과와 안전성을 위약과 비교하여 평가하는 것입니다. Instituto Nacional de Pediatría의 종양학 서비스에서 통합 화학 요법을 받고 있습니다.

연구에 대한 일반적인 설명

1. 참가자 선택 및 동의:

   • 연구 선택 기준을 충족하는 참가자가 선택됩니다.
   • 참가자의 부모나 보호자, 그리고 적절한 경우 8세 이상인 환자의 경우 사전 동의를 얻습니다. 중재의 이점, 합병증 및 부작용에 대한 정보를 받게 됩니다(부록 1-3).
   • 부모 또는 보호자가 연구 프로젝트 이외의 치료를 선호하는 경우, 환자는 Instituto Nacional de Pediatría의 종양학 서비스에서 사용되는 확립된 국가 프로토콜에 따라 치료됩니다.
   • 또한 부록 4 및 5에 따라 개인 데이터 사용에 대한 동의를 얻습니다. 이 데이터에는 참가자 및 부모 이름, 생년월일, 성별, CURP, 주소, 연락처 번호, 병력, 일반적인 습관, 병리학적 상태, 사회적 조건이 포함되며 본 연구 프로젝트에만 사용됩니다.
   • 데이터는 엄격한 기밀로 처리되며 프로젝트 담당자에 의해 5년 동안 전자 데이터베이스에 저장됩니다.

2. 초기 평가:

   • 소아 종양 전문의는 병력, 신체 검사, 인체 측정, 대변 및 혈청 샘플링을 수행합니다.
   • 영양사는 참가자의 영양 상태와 신체 구성을 평가합니다.

   가) 신체검사:

   • 참가자는 겉옷과 신발을 벗고 검사대에 앉습니다.
   • 소아 종양 전문의는 필요한 경우 램프와 설압자를 사용하여 피부 병변을 육안으로 검사합니다.
   • 체온은 디지털 체온계로 측정됩니다.
   • 참가자는 심장 및 복부 상태를 평가하기 위해 촉진, 타진 및/또는 청진을 위해 반듯이 누워 있습니다.

   나) 인체측정학

   • 체중은 Seca 저울을 사용하여 3회 측정됩니다.
   • 높이는 스타디오미터를 사용하여 3회 측정됩니다.
   • 허리둘레는 마지막 갈비뼈 아래쪽 가장자리와 장골능선 위쪽 가장자리 사이의 중간점에서 측정됩니다.
   • 엉덩이 둘레는 허리 아래 15cm 지점에서 측정됩니다.
   • 팔 둘레는 이두근 주위를 측정합니다.
   • 허벅지 둘레는 허벅지 위쪽 1/3 지점에서 측정됩니다.

   다) 영양상태

   - 연령별 신장(H-A), 연령별 체중(W-A), 신장 대비 체중(W-H), 체질량 지수(BMI) 지수는 NOM-008-SSA2-1993 표준에 따라 분류됩니다.

   D) 신체 구성

   • 참가자는 금속 물체를 제거하고 방광을 비운 다음 비전도성 침대에 반듯하게 누워 있습니다.
   • 전극 배치는 클렌징 타월과 전기 전도성 타월을 준비합니다.
   • 전극은 손과 발에 배치되며 다중 주파수 생체 전기 임피던스 장치는 6가지 다른 주파수에서 신체 구성을 측정합니다.
   • 데이터는 WHO 백분위수 곡선에 따라 조정됩니다.

   E) 대변 샘플

   • 참가자는 제공된 키트와 지침을 사용하여 집에서 대변 샘플을 수집합니다.
   • 샘플은 분석을 위해 당일 Instituto Nacional de Pediatría로 쿨러에 넣어 운반되며 프로젝트가 끝날 때까지 -70°C의 냉동고에 보관됩니다.

   F) 혈청 샘플

   • 말초 정맥 천자를 통해 3ml의 혈액 샘플을 수집합니다.
   • 샌드위치 효소 면역분석 기술을 사용하여 베타-락토글로불린에 대한 항체를 측정하기 위해 혈청 샘플을 처리합니다.

   평가는 1주차, 4주차, 8주차에 임상 상태, 인체 측정, 체성분에 대해 매주 실시되며, 1주차와 8주차에는 대변 및 혈청 샘플이 실시됩니다.

3. 개입 준비:

   • 중재는 Baker Company Class II Type A2 수직 층류 후드에서 준비됩니다.
   • 필요한 양의 동결건조된 프로바이오틱스 분말과 미결정 셀룰로오스를 25rpm의 속도로 5분간(시계 방향 2:30 및 시계 반대 방향 2:30) 혼합하고 L. 카세이 및 L. rhamnosus 25억 용량으로 캡슐화합니다. 캡슐당 CFU, B. bifidum은 캡슐당 10억 CFU, 위약은 미결정 셀룰로오스 300mg입니다.
   • 각 시술은 라벨이 붙은 멸균 백에 보관되며 2~8°C에서 냉장 보관됩니다.
   • 박테리아학 실험실에서 희석 및 서열 분석을 통해 캡슐의 UFC 함량 품질을 검사하며, 편차가 있을 경우 공정 조정이 이루어집니다.

4. 참가자 할당:

   • 참가자는 컴퓨터에서 생성된 순서를 사용하여 중재에 무작위로 할당되며 균형 잡힌 5개 블록으로 조정됩니다. (부록 7).
   • 외부 연구자는 순서의 무작위 번호로 라벨이 붙은 불투명 봉투에 개입 이름을 배치합니다.
   • 참가자는 중재에 할당될 무작위 번호를 추첨하여 수석 조사관에게 전달합니다.

5. 중재 관리:

   • 참가자는 냉장 젤 팩과 함께 쿨러에 보관된 할당된 개입의 14-16 캡슐이 담긴 병을 받게 됩니다.
   • 참가자는 일주일 동안 아침 식사 전과 점심 전에 한 캡슐을 복용하고, 로그북에 준수 사항을 기록하고 이 과정을 8주 동안 반복합니다.

6. 임상 평가:

   - 점막염, 설사, 대장염, 고창, 복부 팽만, 변비에 대해 CTCAE(Common Terminology Criteria for Adverse Events) 척도(V 4.02)에 따라 매주 임상 평가를 실시한다[39]. 필요한 경우 소아 종양 전문의는 종양학 서비스 계획에 따라 치료를 시작합니다.

7. 데이터 수집:

   • 항생제가 필요하거나 화학 요법 통합 단계가 완료되면 참가자는 연구에서 제외되고 최종 평가가 수행됩니다.
   • 주간 임상 평가, 영양 평가 및 연구 후속 조치의 데이터는 데이터 수집 양식(부록 8)에 기록되고 맹검 연구자가 STATA 18을 사용하여 통계 분석을 위해 전자 Excel 데이터베이스에 입력합니다.

샘플 크기는 Reyna-Figueroa의 연구 데이터를 기반으로 계산되었으며, 이 연구에서는 L. rhamnosus 투여 중 설사 발생률이 0%인 반면 프로바이오틱스를 투여받지 않은 참가자의 경우 10%였습니다. 비율 공식을 사용하여 알파 오차 0.05, 검정력 80%, 손실률 20% 추정을 통해 4개 그룹 각각에 대해 30명의 참가자로 구성된 표본 크기가 결정되었습니다.

통계 분석 연구 대상 표본의 특성을 이해하고 Kolmogorov-Smirnoff 정규성 검정을 사용하여 각 변수의 분포 유형을 결정하기 위해 중심 경향 측정을 사용하여 기술 분석을 수행합니다. 정량적 변수의 경우 분포 유형에 따라 평균 및 표준 편차 또는 최소값과 최대값이 있는 중앙값이 계산되고 표 형식으로 요약됩니다. 그리고 적절하게 상자 그림이나 막대 채팅으로 그래픽으로 표현된 데이터.

네 가지 개입 간의 정량적 변수를 비교하기 위해 다방향 ANOVA 테스트가 사용됩니다. 정성적 변수의 경우 카이제곱 검정을 사용하여 그룹을 비교하고 참가자의 영양 상태를 조정합니다.

위장관 독성 및 부작용의 위험도는 상대적 위험도 또는 Peto의 승산비와 95% 신뢰구간으로 분석됩니다. 개입 간의 차이는 Kaplan-Meier 및 Log-Rank 테스트를 통한 생존 분석을 사용하여 분석됩니다. 서열분석 데이터는 Qiime2 프로그램을 사용하여 분석되고 필터링되어 Silva 데이터베이스를 사용하여 계통수를 생성합니다. 각 분류 수준에 해당하는 플롯이 생성됩니다. 알파(그룹 내) 및 베타(그룹 간) 다양성은 ANCOM 프로그램의 주성분 분석을 사용하여 안수 플롯으로 표시됩니다.

연구를 중단한 환자의 결과는 마지막 기록까지 분석되며 모든 분석은 치료 의도에 따라 수행됩니다.