Probioottien tehokkuus maha-suolikanavan toksisuuden ehkäisyssä leukemiaa sairastavilla lapsilla

Tausta Akuutti lymfoblastinen leukemia (ALL) on pahanlaatuinen sairaus, jolle on tunnusomaista epäkypsien lymfoidisolujen hallitsematon lisääntyminen. Se on yleisin kasvain lapsilla, ja se edustaa jopa 53,1 % kaikista onkologisista prosesseista Meksikossa [1-6]. Onneksi nykyisillä kemoterapeuttisilla hoidoilla taudin remissio saavutetaan 98 %:ssa tapauksista; kemoterapeuttisilla hoidoilla on kuitenkin sivuvaikutuksia, jotka voivat johtaa maha-suolikanavan toksisuuteen (7,7 - 32,5 %), joka liittyy jopa 50 %:n kuolleisuuteen.

Yleisimpiä tästä toksisuudesta johtuvia maha-suolikanavan oireita ovat mukosiitti, haimatulehdus (2–8 %), ripuli (10–82 %) ja paksusuolentulehdus, joka liittyy Bacillus spp:n ja Bidifobacterium spp:n vähentymiseen, mikä lisää nekroosin ja suoliston perforaation riskiä. terminaalinen sykkyräsuoli ja umpisuoli. Tästä syystä on tehty useita tutkimuksia sellaisten aineiden tunnistamiseksi, jotka voivat vähentää maha-suolikanavan toksisuuden esiintyvyyttä, kuten probiootit, jotka ovat ryhmä saprofyyttisiä mikro-organismeja (bakteerit, virukset, sienet ja alkueläimet), jotka elävät tasapainossa iholla ja limakalvoilla, pääasiassa suolisto, ovat saaneet huomiota.

Probiooteilla tiedetään olevan useita hyödyllisiä tehtäviä, kuten hiilihydraattien, lyhytketjuisten rasvahappojen ja kalsiumin imeytymisen edistäminen; lipidien ja vitamiinien synteesin helpottaminen; moduloida ja vähentää tulehdusvälittäjien pitoisuutta suolen limakalvossa; parantaa limakalvon verenkiertoa, mikä vähentää iskeemisten alueiden riskiä suolessa; ja vahvistaa immuunijärjestelmää.

Vaikka probioottien käyttöä kemoterapian myrkyllisten vaikutusten ehkäisemiseksi tai vähentämiseksi on tutkittu, tulokset ovat edelleen epäselviä, koska probioottien vaikutusta on analysoitu useissa yhdistelmissä, mikä vaikeuttaa spesifisten vaikutusten erottamista suvuittain. Tämä vaikeuttaa standardisoitujen hoitojärjestelmien luomista näiden potilaiden hoidon laadun parantamiseksi. Jos tämä projekti onnistuu tunnistamaan näiden probioottien tehokkuuden ja turvallisuuden, se mahdollistaa uusien terapeuttisten strategioiden kehittämisen, joilla pyritään parantamaan näiden potilaiden terveydenhuollon laatua ja vähentämään kemoterapian antamisesta johtuvien maha-suolikanavan komplikaatioiden esiintymistiheyttä ja vakavuutta.

Tavoite Arvioida Lactobacillus casein, Lactobacillus rhamnosuksen ja Bifidobacterium bifidumin annon tehokkuutta ja turvallisuutta lumelääkkeeseen verrattuna ruoansulatuskanavan toksisuuden vähentämisessä, suoliston läpäisevyyden vähentämisessä ja suoliston mikrobiston muuttamisessa ilman haittavaikutuksia lapsipotilailla, joilla on diagnosoitu ALL. saa konsolidoivaa kemoterapiaa Instituto Nacional de Pediatrían onkologiassa.

Tutkimuksen yleinen kuvaus

1. Osallistujien valinta ja suostumus:

   • Opintojakson valintakriteerit täyttävät osallistujat valitaan.
   • Tietoinen suostumus saadaan osallistujan vanhemmilta tai huoltajilta ja tarvittaessa potilaalta, jos hän on yli 8-vuotias. Heille tiedotetaan interventioiden hyödyistä, komplikaatioista ja haittavaikutuksista (Liite 1-3).
   • Jos vanhemmat tai huoltajat suosivat tutkimusprojektin ulkopuolista hoitoa, potilasta hoidetaan Instituto Nacional de Pediatrían onkologiapalvelussa käytössä olevien kansallisten käytäntöjen mukaisesti.
   • Suostumus hankitaan myös henkilötietojen käyttöön liitteiden 4 ja 5 mukaisesti. Nämä tiedot sisältävät osallistujien ja vanhempien nimet, syntymäajan, sukupuolen, CURP:n, osoitteen, yhteysnumeron, sairaushistorian, yleiset tottumukset, patologiset tilat, sosiaaliset tilat, joita käytetään yksinomaan tässä tutkimusprojektissa.
   • Tietoja käsitellään luottamuksellisesti, ja niitä säilytetään sähköisessä tietokannassa viiden vuoden ajan projektin henkilöstön toimesta.

2. Alkuarvioinnit:

   • Lasten onkologi suorittaa sairaushistorian, fyysisen tutkimuksen, antropometrian, uloste- ja seeruminäytteenoton.
   • Ravitsemusterapeutti arvioi osallistujan ravitsemustilan ja kehon koostumuksen.

   A) Fyysinen tarkastus:

   • Osallistuja riisuu päällysvaatteet ja kengät ja istuu tutkimuspöydälle.
   • Lasten onkologi tarkastaa silmämääräisesti ihovaurioita lampun ja kielenpainatuksen avulla tarvittaessa.
   • Kehon lämpötila mitataan digitaalisella lämpömittarilla.
   • Osallistujat makaavat selällään tunnustelua, lyömäsoittimia ja/tai auskultaatiota varten sydämen ja vatsan tilan arvioimiseksi.

   B) Antropometria

   • Paino mitataan kolme kertaa Seca-vaa'alla.
   • Korkeus mitataan kolme kertaa stadiometrillä.
   • Vyötärön ympärysmitta mitataan viimeisen kylkiluun alareunan ja suoliluun harjanteen yläreunan välisestä keskipisteestä.
   • Lantion ympärysmitta mitataan 15 cm vyötärön alapuolelta.
   • Käsivarren ympärysmitta mitataan hauislihaksen ympäriltä.
   • Reiden ympärysmitta mitataan reiden yläkolmanneksen ympäriltä.

   C) Ravitsemustila

   - Pituus-ikää (H-A), paino-ikää (W-A), paino-pituutta (W-H) ja painoindeksiä (BMI) koskevat indeksit luokitellaan NOM-008-SSA2-1993 standardien mukaisesti.

   D) Kehon koostumus

   • Osallistujat poistavat metalliesineet, tyhjentävät rakkonsa ja makaavat selällään sähköä johtamattomalle sängylle.
   • Elektrodien asettaminen valmistetaan puhdistuspyyhkeellä ja sähköä johtavalla pyyhkeellä.
   • Elektrodit asetetaan käsiin ja jalkoihin, ja monitaajuinen biosähköinen impedanssilaite mittaa kehon koostumusta kuudella eri taajuudella.
   • Tiedot mukautetaan WHO:n prosenttipistekäyriin.

   E) Ulostenäytteet

   • Osallistujat keräävät ulostenäytteitä kotona mukana toimitettujen sarjojen ja ohjeiden avulla.
   • Näytteet kuljetetaan jäähdyttimessä Instituto Nacional de Pediatríaan samana päivänä analysointia varten ja niitä säilytetään pakastimessa -70°C:ssa projektin loppuun asti.

   F) Seeruminäytteet

   • 3 ml:n verinäyte otetaan perifeerisellä laskimopunktiolla.
   • Seeruminäytteitä käsitellään beetalaktoglobuliinin vastaisten vasta-aineiden määrittämiseksi käyttämällä sandwich-entsyymi-immunomääritystekniikkaa.

   Kliinisen tilan, antropometrian ja kehon koostumuksen arvioinnit suoritetaan viikoittain viikoilla 1, 4 ja 8 sekä uloste- ja seeruminäytteitä viikoilla 1 ja 8.

3. Interventioiden valmistelu:

   • Interventiot valmistetaan Baker Company Class II Type A2 pystysuorassa laminaarivirtauskuvussa.
   • Tarvittavat määrät lyofilisoitua probioottista jauhetta ja mikrokiteistä selluloosaa sekoitetaan 5 minuuttia (2:30 myötäpäivään ja 2:30 vastapäivään) nopeudella 25 rpm ja kapseloidaan annoksella: L. casei ja L. rhamnosus 2,5 miljardia CFU kapselia kohti, B. bifidum 1 miljardi CFU kapselia kohti ja lumelääke 300 mg mikrokiteistä selluloosaa.
   • Jokainen interventio varastoidaan merkittyihin steriileihin pusseihin ja jäähdytetään 2–8 °C:seen.
   • Kapseleiden laatu tarkastetaan UFC-sisällön suhteen Bacteriology Laboratoryssa laimentamalla ja sekvensoimalla, ja kaikki poikkeamat johtavat prosessin säätöihin.

4. Osallistujien jako:

   • Osallistujat jaetaan satunnaisesti interventioihin käyttämällä tietokoneella luotua sekvenssiä, joka säädetään tasapainotetuissa viiden lohkoissa. (Liite 7).
   • Ulkopuolinen tutkija sijoittaa interventioiden nimet läpinäkymättömiin kirjekuoriin, jotka on merkitty sekvenssin satunnaisilla numeroilla.
   • Osallistujat arvostavat interventioon osoitettavan satunnaisluvun, joka ilmoitetaan päätutkijalle.

5. Interventiohallinto:

   • Osallistujat saavat pullot, joissa on 14-16 kapselia määrätystä interventiosta, säilytettynä jäähdyttimessä jäähdytettyjen geelipakkausten kanssa.
   • Osallistujat ottavat yhden kapselin ennen aamiaista ja yhden ennen lounasta viikon ajan, kirjaamalla noudattamisen lokikirjaan ja toistaen tätä prosessia kahdeksan viikon ajan.

6. Kliininen arviointi:

   - Mukosiitin, ripulin, paksusuolentulehduksen, ilmavaivojen, vatsan turvotuksen ja ummetuksen varalta suoritetaan viikoittain kliiniset arvioinnit, jotka luokitellaan haittatapahtumien yleisten terminologiakriteerien (CTCAE) asteikon (V 4.02) mukaisesti [39]. Tarvittaessa lastenonkologi aloittaa hoidon onkologian palvelusuunnitelman mukaisesti.

7. Tiedonkeruu:

   • Jos antibiootteja tarvitaan tai kemoterapian konsolidointivaihe on saatu päätökseen, osallistujat eliminoidaan tutkimuksesta ja suoritetaan lopulliset arvioinnit.
   • Tiedot viikoittaisista kliinisistä arvioinneista, ravitsemusarvioinneista ja tutkimusten seurannasta tallennetaan tiedonkeruulomakkeelle (Liite 8) ja syötetään sähköiseen Excel-tietokantaan tilastollista analyysiä varten STATA 18:lla sokean tutkijan toimesta.

Otoskoko laskettiin Reyna-Figueroan tutkimuksen tietojen perusteella, joka raportoi 0 %:n ripulin ilmaantuvuuden L. rhamnosuksen annon aikana verrattuna 10 %:iin osallistujilla, jotka eivät saaneet probiootteja. Käyttäen suhteellista kaavaa, alfa-virheellä 0,05, 80 % teholla ja arvioimalla 20 %:n häviöprosentti, määritettiin 30 osallistujan otoskoko jokaiselle neljälle ryhmälle.

Tilastollinen analyysi Suoritetaan kuvaava analyysi käyttämällä keskeisen taipumuksen mittareita tutkitun otoksen ominaisuuksien ymmärtämiseksi ja kunkin muuttujan jakauman tyypin määrittämiseksi Kolmogorov-Smirnoff-normaalisuustestillä. Kvantitatiivisille muuttujille lasketaan keski- ja keskihajonta tai mediaani minimi- ja maksimiarvoineen jakauman tyypistä riippuen ja niistä esitetään yhteenveto taulukkomuodossa. ja tiedot, jotka esitetään graafisesti boxplot- tai baarikeskusteluilla tarpeen mukaan.

Kvantitatiivisten muuttujien vertaamiseksi neljän intervention välillä käytetään monisuuntaista ANOVA-testiä. Laadullisten muuttujien osalta khin-neliötestiä käytetään ryhmien vertailuun osallistujien ravitsemustilan mukaan.

Ruoansulatuskanavan toksisuuden ja haittatapahtumien riskiä analysoidaan suhteellisella riskillä tai Peton todennäköisyyssuhteella ja 95 %:n luottamusvälillä. Interventioiden välisiä eroja analysoidaan eloonjäämisanalyysillä Kaplan-Meier- ja Log-Rank-testeillä. Sekvensointitiedot analysoidaan Qiime2-ohjelmalla, suodatetaan fylogeneettisen puun luomiseksi Silva-tietokannan avulla. Jokaiselle taksonomiselle tasolle luodaan vastaavat tontit. Alfa (ryhmän sisäinen) ja beeta (ryhmien välinen) monimuotoisuus esitetään ordinaatiokaavioilla käyttäen pääkomponenttianalyysiä ANCOM-ohjelmalla.

Todettiin, että tutkimuksesta keskeyttäneiden potilaiden tulokset analysoidaan viimeiseen tietueeseensa asti ja kaikki analyysit tehdään hoidon aikomuksen perusteella.