益生菌预防白血病儿童胃肠道毒性的有效性

背景 急性淋巴细胞白血病（ALL）是一种恶性疾病，其特征是未成熟淋巴细胞不受控制的增殖。 它是儿童中最常见的肿瘤，占墨西哥所有肿瘤过程的 53.1% [1-6]。 幸运的是，通过目前的化疗治疗，98%的病例得到了缓解；然而，化疗治疗具有副作用，可能导致胃肠道毒性（7.7% 至 32.5%），这与高达 50% 的死亡率相关。

这种毒性引起的最常见胃肠道症状包括粘膜炎、胰腺炎（2%至8%）、腹泻（10%至82%）以及与芽孢杆菌属和双歧杆菌属减少相关的结肠炎，增加了坏死和肠穿孔的风险。回肠末端和盲肠。 因此，已经进行了几项研究来确定可以降低胃肠道毒性发生率的药物，例如益生菌，益生菌是一组在皮肤和粘膜上平衡生活的腐生微生物（细菌、病毒、真菌和原生动物），主要存在于肠道，引起了人们的关注。

众所周知，益生菌具有多种有益功能，例如促进碳水化合物、短链脂肪酸和钙的吸收；促进脂质和维生素的合成；调节和降低肠粘膜炎症介质的浓度；改善粘膜血流，从而降低肠道缺血区域的风险；并增强免疫系统。

尽管已经进行了使用益生菌预防或减轻化疗毒性作用的研究，但结果仍然没有定论，因为益生菌的作用是在多种组合中进行分析的，这使得很难区分每个门的具体作用。 这使得制定标准化治疗方案以提高这些患者的护理质量变得复杂。 如果该项目成功确定这些益生菌的有效性和安全性，将有助于开发新的治疗策略，旨在提高这些患者的医疗保健质量，减少化疗继发的胃肠道并发症的频率和严重程度。

目的 评估干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和两歧双歧杆菌与安慰剂相比，在降低 ALL 儿科患者胃肠道毒性风险、降低肠道通透性和改变肠道微生物群方面的有效性和安全性，且不会产生不良反应在国家儿科研究所肿瘤科接受巩固化疗。

研究概要

1. 参与者的选择和同意：

   • 将选择符合研究选择标准的参与者。
   • 将获得参与者父母或监护人的知情同意，如果适用，还需获得年龄超过 8 岁的患者的知情同意。 他们将被告知干预措施的益处、并发症和副作用（附录 1-3）。
   • 如果父母或监护人更喜欢研究项目之外的治疗，则患者将根据国家儿科研究所肿瘤服务部门使用的既定国家方案进行治疗。
   • 根据附录 4 和附录 5 使用个人数据也将获得同意。 这些数据包括参与者和父母的姓名、出生日期、性别、CURP、地址、联系电话、病史、一般习惯、病理状况、社会状况，仅供本研究项目使用。
   • 数据将严格保密，由项目人员在电子数据库中保存五年。

2. 初步评估：

   • 儿科肿瘤科医生将进行病史、体格检查、人体测量、粪便和血清采样。
   • 营养师将评估参与者的营养状况和身体成分。

   一）体检：

   • 参与者将脱掉外衣和鞋子并坐在检查台上。
   • 如有必要，儿科肿瘤科医生将使用灯和压舌板目视检查皮肤病变。
   • 将使用数字温度计测量体温。
   • 参与者将仰卧进行触诊、叩诊和/或听诊，以评估心脏和腹部状况。

   B）人体测量学

   • 使用 Seca 秤测量体重 3 次。
   • 使用测距仪测量身高三次。
   • 腰围将在最后一根肋骨下边缘和髂嵴上边缘之间的中点测量。
   • 臀围是从腰部以下 15 厘米处测量的。
   • 臂围将围绕二头肌进行测量。
   • 大腿围将围绕大腿上三分之一进行测量。

   C) 营养状况

   - 年龄别身高 (H-A)、年龄别体重 (W-A)、身高体重 (W-H) 和体重指数 (BMI) 指数将根据 NOM-008-SSA2-1993 标准进行分类。

   D) 身体成分

   • 参与者将移除金属物体，排空膀胱，并仰卧在不导电的床上。
   • 将准备好清洁毛巾和导电毛巾来放置电极。
   • 电极将被放置在手和脚上，多频生物电阻抗装置将在六个不同频率下测量身体成分。
   • 数据将根据世界卫生组织百分位数曲线进行调整。

   E) 粪便样本

   • 参与者将使用提供的套件和说明在家中收集粪便样本。
   • 样品将在当天用冷藏箱运送至国家儿科研究所进行分析，并储存在-70°C 的冰箱中直至项目结束。

   F) 血清样本

   • 通过外周静脉穿刺采集3ml血样。
   • 将使用夹心酶免疫分析技术对血清样本进行处理，以确定抗 β-乳球蛋白的抗体。

   每周对第 1、4 和 8 周的临床状况、人体测量和身体成分进行评估，并在第 1 和 8 周评估粪便和血清样本。

3. 干预措施的准备：

   • 干预措施将在 Baker Company II 级 A2 型垂直层流罩中进行准备。
   • 将所需量的冻干益生菌粉末和微晶纤维素以 25 rpm 的速度混合 5 分钟（顺时针 2:30 和逆时针 2:30），并以 25 亿粒干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的剂量封装每粒胶囊 CFU，每粒双歧双歧杆菌 10 亿 CFU，安慰剂 300 毫克微晶纤维素。
   • 每次干预都将储存在贴有标签的无菌袋中并冷藏在 2 至 8°C 下。
   • 胶囊将在细菌学实验室通过稀释和测序进行 UFC 含量质量检查，任何偏差都将导致工艺调整。

4. 参与者分配：

   • 参与者将被随机分配到使用计算机生成的序列进行干预，并以五人为一组进行平衡调整。 （附录7）。
   • 外部研究人员将干预名称放入不透明信封中，并标有序列的随机数字。
   • 参与者将抽取一个随机数字来分配给干预措施，并传达给主要研究者。

5. 干预管理：

   • 参与者将收到装有 14-16 粒指定干预胶囊的瓶子，这些胶囊储存在带有冷藏凝胶包的冷藏箱中。
   • 参与者将在早餐前服用一粒胶囊，午餐前服用一粒胶囊，为期一周，将遵守情况记录在日志中，并重复此过程八周。

6. 临床评价：

   - 每周对粘膜炎、腹泻、结肠炎、胀气、腹胀和便秘进行临床评估，根据不良事件通用术语标准 (CTCAE) 量表 (V 4.02) [39] 进行分级。 如有必要，儿科肿瘤科医生将根据肿瘤科服务计划开始治疗。

7. 数据收集：

   • 如果需要抗生素或化疗巩固阶段完成，参与者将从研究中被淘汰，并将进行最终评估。
   • 每周临床评估、营养评估和研究随访的数据将记录在数据收集表（附录 8）中，并输入电子 Excel 数据库，由盲法研究人员使用 STATA 18 进行统计分析。

样本量是根据 Reyna-Figueroa 的研究数据计算的，该研究报告称，在服用鼠李糖乳杆菌期间，腹泻发生率为 0%，而未接受益生菌的参与者的腹泻发生率为 10%。 使用比例公式，α 误差为 0.05，功效为 80%，估计损失率为 20%，四组中每组的样本量确定为 30 名参与者。

统计分析 将使用集中趋势测量进行描述性分析，以了解研究样本的特征，并使用柯尔莫哥洛夫-斯米尔诺夫正态性检验确定每个变量的分布类型。 对于定量变量，将根据分布类型计算平均值和标准差或具有最小值和最大值的中位数，并以表格形式汇总；以及通过适当的箱线图或条形图以图形方式表示的数据。

为了比较四种干预措施之间的定量变量，将使用多向方差分析检验。 对于定性变量，将使用卡方检验来比较各组，并根据参与者的营养状况进行调整。

胃肠道毒性和不良事件的风险将通过相对风险或Peto优势比和95%置信区间进行分析。 将使用 Kaplan-Meier 和 Log-Rank 检验的生存分析来分析干预措施之间的差异。 测序数据将使用 Qiime2 程序进行分析，并使用 Silva 数据库进行过滤以生成系统发育树。 将为每个分类级别生成相应的图。 Alpha（组内）和 Beta（组间）多样性将通过使用 ANCOM 程序的主成分分析的排序图来呈现。

指出退出研究的患者将对其结果进行分析，直至其最后记录，所有分析都将在意向治疗的基础上进行。