비만 환자의 정신 건강을 향상시키기위한 시분해의 치료 잠재력.

비만은 전 세계적으로 가장 널리 퍼진 만성 질환 중 하나이며,식이 습관과 환경 및 유전 적 요인 사이의 복잡한 상호 작용으로 인해 발생합니다. 세계 보건기구 (World Health Organization)의 통계에 따르면 19 억 명이 넘는 성인이 과체중이며 약 6 억 6 천만 명이 비만으로 고통 받고 있습니다. 더욱이, 이들 개인은 제 2 형 당뇨병, 죽상 동맥 경화증, 심혈관 질환, 비 알코올성 지방간 질환, 생식 문제 및 일부 형태와 같은 수많은 대사 장애가 발생할 위험이 높다. 라이프 스타일과 약리학 적 개입은 비만 치료를위한 가장 중요한 전략 중 하나입니다. 그러나 엄격한 생활 습관 변화는 종종 제한된 수의 개인에 의해서만 받아 들여지고, 반대 방향성 약물은 약간의 부작용을 가질 수 있지만, 그 효능은 장기간 사용 후 종종 감소됩니다. 따라서, 충족되지 않은 요구는 비만 치료를위한 편리하고 효과적인 보조 요법의 부족이다.

우울증과 불안과 같은 비만과 기분 장애 사이에는 양방향 연관성이 있습니다. 비만은 또한 자존감뿐만 아니라 건강과 삶의 질에 부정적인 영향을 미칩니다. 구체적으로, 비만인 개인의 약 50%가 우울하고 불안한 특성을 개발하는 것으로 추정되며, 이는 여성에게 더 흔하고 비만 정도가 증가함에 따라 더 빈번합니다. 또한 비만을 가진 사람들은 종종 상당한 정서적 부담, 스트레스 증가, 매일 걱정, 심지어 일상 생활 활동을 수행하는 데 어려움을 겪습니다. 자존심과 신체 이미지에 부정적인 영향을 미치는 질병의 낙인에 추가 된이 개인의 삶의 질과 감정 상태를 악화시킵니다. 따라서 정신 건강은 비만과 밀접하게 연결되어 있으며, 신체적, 정서적 측면을 모두 다루는 것은 전반적인 복지를 촉진하는 데 중요합니다. 건강한 체중과 적절한 정신 건강을 유지하기 위해 고군분투하는 사람들을위한식이 요법, 신체 운동, 정서적, 심리적 지원의 중재를 포함하는 전체적인 접근 방식을 채택하는 것이 중요합니다.

장 뇌 축은 장과 중추 신경계 사이의 양방향 통신 네트워크로, 신경 면역 및 신경 내분비 과정을 통해 기능합니다. 우울증의 발병에 대한 관여는 가정 된 후-체인 지방산, 감마-아미노 부티르산 (GABA) 및 장내 미생물사에서 유래 한 트립토판 대사 산물과 같은 분자에 의해 가정되었다. 미생물질 항상성에서의 이상화 또는 변형의 상황에서, 장-뇌 경로는 규제가 조절되고 신경 염증 및 변경된 혈액-뇌 장벽 투과성과 관련이있다. 또한, 장 미생물 총의 변화는 세로토닌 및 도파민과 같은 신경 전달 물질의 방출, 스트레스 반응 및 시상 하부 뇌하수체-아드레날 (HPA) 축에 직접 영향을 미쳐 우울한 상태에 기여할 수 있으며, 뇌-유래 신경 영양 인자 (BDNF) 수준에 영향을 미친다. 예를 들어, 우울증은 IL-1, IL-2, IL-6, IFN-Y 및 IL-1ß와 같은 C- 반응성 단백질 (CRP) 및 사이토 카인의 방출 증가와 관련이있다.

비만은 또한 장 수준, 인슐린 저항성 및 체지방 침착 물에서 염증을 유발합니다. 이 분야의 연구에 따르면 장 미생물 총의 구성, 비만 및 인슐린 저항성 사이에는 양방향 관계가 있음을 시사합니다. 비만을 가진 사람들은 건강한 체중을 가진 사람들에 비해 미생물 조성이 다른 것으로 관찰되었습니다. 장 미생물 총에서의 이러한 변화는 식품에서 에너지를 추출하는 능력을 증가시키고, 저급 염증을 촉진하고, 지방 생성을 증가시키고, 지방산 산화를 감소 시키며, 다른 메커니즘 중에서, 간 수준에서 트리글리세리드 축적을 증가시킴으로써 비만의 진행에 더 기여할 수 있다고 믿어진다.

면역계 및 염증을 조절하는 데 장내 미생물 총의 역할을 고려할 때, 우리는 만성 염증이 우울증과 불안을 포함한 비만 및 심리적 장애와 관련이 있음을 관찰합니다. 장 미생물 총의 이러한 변화는 전신 염증 및 면역 기능 장애에 기여할 수 있으며, 이는 비만과 심리적 장애 모두에 영향을 줄 수 있습니다. 일부 장내 박테리아는 세로토닌 또는 GABA와 같이 장 수준에서 흡수 될 수있는 신경 전달 물질을 생성하는 능력이 있으며, 이는 기분과 불안을 조절하는 데 중요합니다. 장 미생물 총의 구성의 변화는 이들 신경 전달 물질의 생성에 영향을 줄 수 있으므로 정신 건강에 영향을 줄 수 있다고 생각된다.

칼로리 제한 및 신체 운동과 같은 라이프 스타일 수정은 체중 감량을위한 최상의 요법으로 간주되지만 장 미생물 총의 변조와 같은 다른 보조 옵션이있어 비만이있는 사람들에게 유용 할 수 있습니다. 비만이있는 개인에게 프리 바이오 틱스, 프로바이오틱스 및 시바이오틱스가 투여 된 연구는 장 미생물 총의 조절을 통해 체중 감소 및 기타 대사 매개 변수에 유익한 효과를 보여 주었다. 비만의 장 뇌 축과 심리적 장애와의 관계를 암시하는 새로운 증거로 인해 장 미생물 총을 회복하기위한 치료법으로서 이러한 치료의 발달에 대한 관심이 높아졌습니다.

프리 바이오 틱스는 건강 증진 및 질병 예방에 유익한 역할을 고려하여 기능적 식품입니다. 예를 들어, 대사 과정을 조절하고 건강을 촉진하는 능력으로 인해 생물 활성 화합물로 간주되는 탄닌이 있습니다. 섭취 한 많은 타닌은 대장에 도달하며 장 미생물 총은 아세테이트, 프로 피오 네이트 및 부티레이트와 같은 단락 지방산을 포함하여 대사 산물로 변환합니다. 이 단락 지방산은 숙주의 장 및 전반적인 건강에 다양한 유익한 영향을 줄 수있는 중요한 대사 산물입니다. 또한 다음 메커니즘을 통해 잠재적 인 항 당뇨병 효과를 발휘합니다. (i) 혈액 내 인슐린 및 프로 인슐린 수준의 개선 : 다당류에 결합하기위한 탄닌의 친화력은 지연 및 위장관에서 포도당의 이용 가능성을 감소시킵니다. 또한, 몇몇 연구는 가수 분해성 타닌 및 응축 된 탄닌을 통해 각각 α- 아밀라제 및 α- 글루코시다 제의 활성을 억제 할 가능성이보고되었다. (ii) 인슐린-민감성 조직에 대한 인슐린-유사 효과 : 프로시 아니 딘은 세포 내 인슐린 신호 전달 경로의 특정 성분에 작용할 수있다. (iii) 췌장 세포의 항산화 환경의 조절 : 산화 스트레스는 췌장 세포 아 pop 토 시스를 결정함에 따라 인슐린 저항성에서 역할을하는 것으로 여겨진다. 또한, 췌장에서 항산화 효소와 관련된 유전자의 발현은 낮다. 탄닌의 높은 항산화 용량은 항 염증 특성 (TNFα, IL-1, IL-6 수준 등을 감소시키는) 및 심장 보호 특성 (수퍼 옥사이드 디스 뮤 타제, 감소 ROS 등)과 함께 인슐린 저항성의 발병 기전에 대항 할 수 있습니다.

구체적으로, 고 분자량 탄닌은 결장에서 장내 미생물에 도달한다. 이 경우, 화합물은 미생물에 의해 대사되어, 원래 분자와 비교하여 다른 생체 이용률, 활성 또는 기능적 효과를 갖는 대사 산물을 생성한다. 마지막으로, 탄닌은 장내 미생물 총의 조성 및 기능을 조절하여 병원체를 선택적으로 억제하고 유익한 박테리아의 성장을 촉진 할 수있다.

프로바이오틱스는 적절한 조건과 양으로 투여 될 때 장의 미생물 균형을 향상시키는 미생물의 제조입니다. 이들 미생물은 인간 결장 상피에서 IL-8 사이토 카인의 유도를 방지 할뿐만 아니라 장 투과성을 감소시켜 내 독소 혈증을 억제함으로써 염증을 억제하고 면역계를 조절하는 것으로 나타났다. 프로 바이오 틱 중재는 장 미생물 총의 풍부함과 기능을 향상시킴으로써 비만 및 관련 합병증의 치료에 기여할 수 있습니다. 따라서, 프리 바이오 틱 및 프로 바이오 틱 중재 (synbiotics)의 조합은 대사 장애에 대한 상승적 및 효과적인 요법을 제공 할 수있다. 또한, 주요 우울 장애와 같은 정신 질환에서 시체적 보충의 긍정적 인 역할이 기록되어있다. 이 경우, 시성 생물학은 트립토판 대사를 향상시키고 편도체 피질에서 도파민 대사 산물 농도를 감소시킴으로써 우울증 증상을 향상시킬 수있다.

Synbiotics는 미생물 총의 유형과 기능성을 개선하고 장 염증을 줄이며 신체에 이러한 영향을 미치는 호르몬의 생산 증가를 통해 포만을 촉진하는 데 도움이 될 수 있다고 제안되었습니다. 따라서 이것은 비만 관리에 도움이 될 수 있습니다. Synbiotics는 G- 단백질-커플 링 된 수용체에 결합하고 장내 엔도 크린 L 세포로부터 글루카곤-유사 펩티드 1 (GLP-1) 및 펩티드 YY (PYY)의 분비를 증가시키는 단락 지방산을 생성함으로써 다량 영양소 대사를 조절하는 데 중요한 역할을 할 수있다. 이러한 결합은 췌장 β- 세포에 의해 인슐린 생성을 유발하고, 글루카곤 분비를 억제하며, 간 글루코 네오 제네시스를 감소 시키며, 인슐린 감수성을 증가시킬 수있다. Synbiotics는 또한 장 기능을 향상시키고, 뮤신 생성을 높이고, 결장에서 병원성 그램 음성 박테리아의 수를 줄입니다. 이러한 변화는 점막 벽 및 대사 내 독소 세미 혈증을 가로 지르는 리포 폴리 사카 라이드 (LPS)의 전이를 감소시켜 궁극적으로 인슐린 수용체 기능 및 더 낮은 인슐린 수준의 개선을 유발할 수 있습니다. 이전의 연구에 따르면 그들의 투여는 우울증이나 불안의 비만과 전형적인 심리적 증상 모두에 유리하다는 것이 밝혀졌습니다. 6 주간의 종교적 개입은 위약에 비해 우울증 증상을 크게 감소시킬 수 있습니다. 이 분야에서 2017 메타 분석은 프로바이오틱스가 건강한 성인 자원 봉사자의 불안, 우울증 및 인식 된 스트레스를 포함한 심리적 증상을 감소시킬 수 있다고 제안했습니다. 장 미생물 총은 세로토닌과 같은 신경 전달 물질을 직접 생성하고 생산에 영향을 줄 수 있습니다. 또한 면역 조절 기능이 있으며 전 염증성 사이토 카인 IL-1 및 IL-6의 생성을 통해 시상 하부 뇌하수체 축을 활성화시킬 수있다.

이러한 맥락에서, 비만이있는 개인의 탄닌 및 유익한 장 균주로 구성된 싱 바이오 틱과의 개입은 항산화 용량과 단편 체인 지방산 생산을 증가시켜 건강에 유익한 영향을 미쳐서 자랑하고 기분에 관여하는 신경 전달 물질의 생산을 조절하고, Mucosal Protection, Mucosal Prossence, 강한 투과성을 촉진함으로써 건강에 유익한 영향을 줄 수있다.

따라서, 종교적 중재를 결합하면 대사 및 심리적 장애 모두에 대해 상승하고 효과적인 치료법을 제공 할 수있다. 의학적 치료, 정신 건강에 대한 심리적 지원 및 시생적 치료를 포함하여 비만을 포괄적으로 해결하면 감정 상태, 비만 및 심리적 장애가 향상 될 수 있습니다. 궁극적으로 영향을받는 개인의 삶의 질을 향상시킬 수 있습니다. 이 분야의 연구가 여전히 진행 중이며 이러한 상호 작용을 완전히 이해하기 위해 더 많은 증거가 필요하지만, 장 미생물 총 건강이 복잡하고 중요한 방식으로 신체적, 정신적 건강에 영향을 줄 수 있다는 증거가 증가하고 있습니다. 균형 잡힌식이 요법, 섬유질이 풍부한 식품 및 프로바이오틱스 섭취뿐만 아니라 스트레스 감소를 통해 건강한 장 미생물 총을 홍보하는 것은 비만과 심리적 장애, 심지어 다른 치료법과 상승적으로 다루는 데 유리할 수 있습니다.

따라서, 우리의 목표는 젖산 박테리아, 비피도 박테리아 및 탄닌 기반 피토 콤플렉스로 구성된 싱 바이오 틱의 섭취가 염증성 또는 우울한 증상, 혈당 프로파일 및 비만 환자의 인슐린 저항성을 개선 할 수 있는지 여부를 결정하는 것입니다. 신경 전달 물질 생산 및 장 미생물 총의 차등 변경.

우울 및/또는 불안 장애를 나타내는 비만 환자에게 임상 기준, 전향 적, 무작위, 이중 맹검, 위약 대조 중재 연구가 제안됩니다.

제안 된 목표를 달성하기 위해 우울 및/또는 불안 장애를 나타내는 비만 환자 (n = 60)와 장애가없는 환자 (n = 60)가 포함됩니다. 우울증과 불안에 대한 진단 기준은 DSM-5에서 확립 된 진단 기준입니다. 또한, 각 그룹은 무작위로 2 개의 하위 그룹으로 나뉘어지며, 그 중 하나는 Synbiotic을 받고 다른 그룹은 12 주 동안 해당 위약 (그룹당 N = 30)을 받게됩니다. 무작위 배정 프로세스는 무작위 할당을 위해 소프트웨어 프로그램을 사용하여 수행됩니다. Peset Hospital 박사의 내분비학 및 영양 상담에서 비만 부서에 참석하여 다음 기준을 충족함에 따라 환자들은 연구에 순차적으로 등록 될 것입니다.

• 포함 기준 : 18 세에서 65 세 사이의 BMI가 30-40 kg/m² 인 환자, 알려진 질병 기간은 5 년 이상입니다. 또한, 모든 환자는 연구 전 3 개월 동안 안정적인 체중 (<5% 변동)을 유지합니다.
• 제외 기준 : 연구 시작 3 개월 전에 항생제를 복용 한 환자뿐만 아니라 프로바이오틱스 및/또는 프리 바이오 틱스를 포함하는 보충제의 사전 사용. 또한 장 질환으로 진단 된 환자와 이전의 위장 수술을받은 환자. 비만, 제 1 형 당뇨병, 임신 또는 수유, 활성 신 생물 질환 및 간 또는 신부전이 확립 된 원인은 제외됩니다. 마지막으로, 다른 진단 된 정신 장애가있는 환자는 불안 및/또는 우울증과 다른 환자와 연구 시작 전에 항우울제 치료를받는 환자도 제외 될 것입니다.

연구를 시작하기 전에 환자 또는 법정 담당자는 연구의 목표를 설명하고 가능한 의심을 해결 한 후 사전 동의서에 서명합니다. 이 연구는 헬싱키의 인간 실험과 그 이후의 업데이트를 위해 확립 된 윤리 지침을 준수합니다. 또한 병원의 윤리위원회의 승인을받을 것입니다. 연구 중에 수집 된 의료 정보 및 모든 데이터는 개인 데이터 보호 및 해당 Royal Decree 1720/07에 관한 유기법 15/1999에 따라 기밀로 유지됩니다.

연구가 시작될 때, 영양사-영양사는 휴식 에너지 ​​소비를 계산하기 위해 개별화 된 영양 평가를 수행 할 것이며, 개인화 된 저속식이 다이어트가 생성 될 것이며, 각 개인의 총 일일 에너지 소비에서 500 kcal을 줄이면서 각 다량의 대기인의 권장 섭취량을 유지하면서, 30-55% 단백질의 권장 섭취량을 유지합니다 (30-35%). 식이 모니터링은 모니터링 부작용과 함께 편견을 피하고식이 요법 준수를 강화하는 데 도움이됩니다. 처리 그룹은 싱 바이오 틱 제형을 갖는 캡슐을 받고 대조군은 위약 캡슐 (Maltodextrin)을 받게되며, 두 그룹 모두 매일 12 주 동안이를 취하도록 지시받을 것이다. synbiotic은 Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei 및 bifidobacterium lactis (각각 2 × 10 ℃ CFU/g)로 구성된 프로 바이오 틱 부분 및 다양한 소스에서 추출 된 Tannins (350 Mg)를 기반으로 한 식물성 부분으로 구성됩니다. 위약은 싱 바이오 틱 캡슐과 동일하게 보입니다. 시험에 참여하는 직원의 맹목을 유지하기 위해, 연구 제품의 준비 및 컨테이너 충전은 실바티 아임과 SACCO에 의해 수행 될 것입니다.

중재가 시작될 때, 환자의 현재 상태에 대한 정보를 수집하기 위해 구조화 된 심리적 인터뷰가 수행 될 것입니다. 질병의 역사와 진화 (비만 및 심리적 장애), 식사 패턴, 수면 질, 관련 심리적 동반 질환, 가족 및 사회적 영역, 변화에 대한 동기 및 기대치. 비만이 환자의 삶의 질 (정서적, 사회적 및 개인)에 미치는 영향을 평가할 것입니다. 심리적 후속 조치는 연구의 4, 6 및 12 주에 발생합니다. 개입, 동기 부여 상태, 식습관, 라이프 스타일, 자제력,인지 행동 변화 및 재발 예방이 평가됩니다.

연구가 시작될 때 및식이 중재 후, 금식 혈액 샘플 (12 시간), 타액, 소변 (24 시간) 및 대변 샘플이 수집됩니다. 다음 매개 변수가 결정됩니다.

1. 인체 측정 파라미터와 체성분 중량 및 높이가 측정되고 BMI가 계산됩니다 (중량 / (높이) ²). 허리와 고관절 둘레뿐만 아니라 혈압도 결정됩니다. 또한, 생체 전기 임피던스 (SECA MBCA 550®)를 사용한 벡터 분석은 중재의 시작과 끝에서 수행 될 것이다.

   환자는 신체 활동을 모니터링하기 위해 IPAQ 설문지와 함께 시작, 6 주 및 12 주에 3 일간의식이 로그 (주말 1 일 포함)를 완료합니다. 또한 제품 준수 및 규정 준수에 대한 설문지를 작성하고 제품을 복용 한 후 부작용을 경험 한 경우도 완료 할 것입니다.

2. 심리 평가 먼저, 우울증 불안과 스트레스 척도 21 (DASS-21) 설문지를 적용 할 것입니다. 초기 결과, 스트레스, 불안 및 우울증에 따라 Beck Depression Inventory (BDI-2), 인식 된 스트레스 척도 (PSS), State-Trait Joasiety Inventory (STAI) 및 Rosenberg 설문지를 사용한 자존심의 세 가지 검증 된 척도를 사용하여 평가됩니다. 이 평가는 피험자의 분류를 두 그룹 (불안 및/또는 우울증이 있거나없는 비만)으로 분류 할 수있게 해주 며, 종합 섭취 그룹 이후 크게 개선되었는지 확인합니다.
3. 생화학 적 파라미터는 완전한 지질 프로파일을 평가하여 효소 방법, HDL-C (직접 강수량 방법), LDL-C (Friedewald의 공식을 사용하여 계산) 및 VLDL-C (TG/5)를 사용하여 총 콜레스테롤 (TC) 및 트리글리세리드 (TG)를 측정 할 것이다. 아포지 단백질 B 및 A-I는 신생물 측정에 의해 결정될 것이다. 비 HDL 콜레스테롤 (TC-HDL) 및 죽상 혈장 지수 (API = log (TG/HDL))가 계산됩니다. 공복 혈당 및 인슐린은 각각 헥소 키나제 효소 방법 및 화학 발광을 사용하여 측정 될 것이며, HOMA 지수는 인슐린 저항성을 평가하기 위해 계산 될 것이다. 간 및 신장 기능, 완전한 혈액 수, 응고 및 호르몬 프로파일은 AST, ALT, GGT, LDH, 알칼리성 포스파타제, 크레아티닌, 사구체 여과율, A1C 및 갑상선 기능 (TSH, 유리 T4)을 사용하여 평가됩니다. 이 모든 매개 변수는 Dr. Peset University Hospital의 임상 분석 서비스에서 결정됩니다.
4. 바이오 마커 측정 D.1) 염증성 파라미터 및 항산화 용량은 Luminex XMAP- 모르 디 플렉스 기술을 사용하여 초음파 C- 반응성 단백질, IL6, TNF, IL1B, Adiponectin, PAI-1 및 IL10의 농도를 결정함으로써 염증 상태를 평가할 것이다. 샘플 처리 및 데이터 분석은 제조업체의 지침에 따라 수행됩니다. LPS의 혈청 수준은 ELISA에 의해 결정됩니다. 혈청의 총 항산화 용량은 E-BQC 시스템 (Bioquochem)을 사용하여 결정됩니다.

D.2) 장 호르몬의 펩티드 및 장 장 투과성 및 미생물 전위를 평가하기 위해, Zonulin, Occludin, LBP, FabP2/I-FABP 및 REG3A의 혈장 수준은 ELISA 키트를 사용하여 측정 될 것이다. 혈장에서 β- 글루칸의 검출은 Limulus amebocyte lysate (LAL) 분석법을 사용하여 수행 될 것이다.

D.3) 혈장, 24 시간 소변 또는 타액에서 신경 전달 물질 펩티드 분석 코티솔, 도파민, 세로토닌 및 옥시토신 수준은 ELISA 키트 또는 루민 X X-MAP 기술을 사용하여 결정될 것이다.

D.4) 대사 분석 NMR (핵 자기 공명)은 크고 유전자형 환자 코호트로부터 광범위한 대사 프로파일을 얻기 위해 적용될 것이다. 초기에, 모든 샘플은 NMR에 의해 분석되어 아미노산, 당, 인지질, 염증 마커, 당 단백질, 지방-입자 및 일부 미생물 코 대사 산물을 포함한 최대 40 개의 대사 산물의 글로벌 대사 프로파일을 얻을 것이다.

상이한 대사 산물의 통계적 유의성은 SPSS 및 MATLAB 소프트웨어를 사용하여 잠재적 오 탐 발견 속도 (FDR)에 대해 수정 된 공분산 테스트를 사용하여 분석 될 것이다. 진단, 분류 및 예측 모델을 구성하기위한 화학 분석은 PCA 용 사용자 정의 MATLAB 스크립트 및 PLS 도구 상자, PLS-DA (Processing Structure-Discriminant Analysis), 계층 적 클러스터 분석 (HCA) 및 임상 및 중재 파라미터를 기반으로 분류 그룹에 대한 스펙트럼 데이터에 대한 유사한 접근법을 사용하여 수행 될 것입니다. 대사 네트워크는 유전체학을위한 Cytoscape 및 유전자 및 게놈 (KEGG)의 교토 백과 사전 (KEGG), 대사 결과 및 프로젝트의 다른 분자 결과를 통합하여 구축 될 것입니다. 마지막으로, 모든 결과는 교차 검증을 통해 평가 될 것이며, 다른 대사 산물의 차별적/예측력은 수신기 작동 특성 (ROC) 곡선을 사용하여 분석됩니다.

D.5) 미생물 총 핵산 정제, 16S rRNA 유전자 증폭 및 시퀀싱의 연구에 대한 연구는 먼저, 대변 샘플은 고속도로 시스템 (MP Biomedicals)을 사용하여 비조, 균질화 및 용해 될 것이다. 제조업체의 지침에 따라 자동화 된 Magna Pure LC 프로토콜 (Roche, Manheim, Germany)에 따라 총 DNA가 추출됩니다. Metagenomic 라이브러리는 Illumina의 프로토콜에 따른 Nextera XT 키트를 사용하여 얻을 것입니다. 16S rRNA의 V3-V4 영역이 증폭되고, Illumina의 프로토콜에 따라 라이브러리가 정제됩니다.

MISEQ 시퀀싱은 V3 키트 (2x300 사이클)를 사용하여 수행되며, 앰플 리콘의 각 끝에서 시작하여 65 시간마다 300-bp 판독 값을 생성합니다. 매우 깊은 시퀀싱은 Fisabio-Salud Pública Center에서 Illumina 시퀀서를 사용하여 수행 될 것입니다.

16S rRNA의 계통 발생 학적 분석은 Qiime 소프트웨어를 사용하여 수행됩니다. 메타 게놈 판독의 기능적 할당은 피사이오에서 개발 된 전용 생물 정보학 파이프 라인을 사용하여 수행됩니다 (현장에서 최첨단 방법론을 사용자 정의 가능한 스크립트와 통합).

미생물 커뮤니티 분석 (생물 다양성, 클러스터링, 히트 맵) 및 통계 분석은 R 소프트웨어를 사용하여 수행됩니다. 바이오 마커 발견 분석의 경우 LEFSE 플랫폼이 사용됩니다.

D.6) 유전자 발현 분석 우리는 NCOUNTER®에 대한 NANOSTRING® 기술을 사용하여 유전자 발현 수준의 변화를 평가할 것입니다. 이 시스템은 최소한의 샘플 금액을 사용하여 리트로 스크립 션 또는 증폭없이 개별 식별을위한 형광 프로브를 갖는 각 표적 분자의 혼성화를 가능하게한다. 총 RNA는 geneall® ribospintm 총 키트를 사용하여 PBMC에서 추출 될 것이며, 총 RNA의 100-200 ng에서 멀티 플렉스 대사 패널은 염증성 및 대사 경로에 중점을 둔 768 개의 유전자를 평가할 것입니다. 결과는 NSolver 도구를 사용하여 분석됩니다. 이 실험은 Diagnostica Longwood, S.L에 하청 계약을 맺을 것입니다.

d.7) 복잡한 세포 모델에 대한 결장 소화 메커니즘에 대한 시험 관내 연구는 장기-칩 (OOC) 모델의 사용 및 설계를 시뮬레이션하는 복잡한 세포 모델에서 장기-칩 (OOC) 모델의 사용 및 설계가 제안되며, 장기 세포 (환자 대변으로부터의 발효) 및 신경 모세포종 세포와 접촉하여 흡수 된 물질과 접촉하여 흡수 된 물질과 접촉한다. 바이오 마커 분석의 경우, 염증성 사이토 카인 및 뉴런 세포 수용체 변화의 장 수준에서의 변화가 관찰 될 것이며, 이는 나중에 생체 내 결과와 관련 될 수있다. 설계에는 충분한 대조군 샘플 복제, 안정화 후 결장 소화 및 위약 또는 시비 생물 치료 후 결장 소화액이 포함됩니다.