Potentiel thérapeutique d'une synbiotique pour améliorer la santé mentale chez les sujets atteints d'obésité.

L'obésité est l'une des maladies chroniques les plus répandues dans le monde, résultant d'une interaction complexe entre les habitudes alimentaires et les facteurs environnementaux et génétiques. Selon les statistiques de l'Organisation mondiale de la santé, plus de 1,9 milliard d'adultes sont en surpoids et environ 650 millions de personnes souffrent d'obésité. De plus, ces personnes sont plus à risque de développer de nombreux troubles métaboliques, tels que le diabète de type 2, l'athérosclérose, les maladies cardiovasculaires, les maladies hépatiques non alcooliques, les problèmes de reproduction et certaines formes de cancer. Les interventions de style de vie et pharmacologiques sont deux des stratégies les plus importantes pour traiter l'obésité. Cependant, les changements de style de vie stricts ne sont souvent acceptés que par un nombre limité d'individus, et les médicaments anti-obésité peuvent avoir des effets indésirables, tandis que leur efficacité est souvent diminuée après une utilisation prolongée. Par conséquent, un besoin significatif non satisfait est le manque de thérapies complémentaires pratiques et efficaces pour traiter l'obésité.

Il existe une association bidirectionnelle entre l'obésité et les troubles de l'humeur tels que la dépression et l'anxiété. L'obésité a également un effet négatif sur la santé et la qualité de vie, ainsi que sur l'estime de soi. Plus précisément, on estime qu'environ 50% des personnes atteintes d'obésité développent des traits dépressifs et anxieux, qui sont plus fréquents chez les femmes et plus fréquents à mesure que le degré d'obésité augmente. De plus, les personnes atteintes d'obésité subissent souvent un fardeau émotionnel considérable, augmentant le stress, les inquiétudes quotidiennes et même les difficultés à effectuer des activités de vie quotidiennes. Ajouté à la stigmatisation de la maladie, qui a un impact négatif sur l'estime de soi et l'image corporelle, cela aggrave la qualité de vie et l'état émotionnel de ces individus. Par conséquent, la santé mentale est étroitement interconnectée avec l'obésité, et aborder à la fois les aspects physiques et émotionnels est crucial pour promouvoir le bien-être général. Il est important d'adopter une approche holistique qui comprend des interventions dans l'alimentation, l'exercice physique et le soutien émotionnel et psychologique à ceux qui ont du mal à maintenir un poids santé et une santé mentale adéquate.

L'axe du cerveau intestinal est un réseau de communication bidirectionnel entre l'intestin et le système nerveux central, fonctionnant à travers des processus neuro-immunes et neuroendocriniens. Son implication dans le début de la dépression a été postulée et est médiée par des molécules telles que les acides gras à chaîne courte, l'acide gamma-aminobutyrique (GABA) et les métabolites du tryptophane provenant du microbiote intestinal. Dans les situations de la dysbiose ou des altérations de l'homéostasie du microbiote, les voies intestinales du cerveau peuvent être trouvées déréglementées et sont associées à la neuroinflammation et à la perméabilité de la barrière hémato-encéphalique altérée. De plus, des altérations du microbiote intestinal peuvent contribuer à un état dépressif en affectant directement la libération de neurotransmetteurs tels que la sérotonine et la dopamine, influençant la réponse au stress et les axes hypothalamo-hypophyso-surrénaux (HPA), affectant les niveaux de facteur neurotrophique dérivé du cerveau (BDNF) et déclenchant les niveaux de facteur inflammatoire inflammatoire du cerveau. Par exemple, la dépression est associée à une libération accrue de la protéine C-réactive (CRP) et des cytokines telles que IL-1, IL-2, IL-6, IFN-Y et IL-1ß.

L'obésité provoque également une inflammation au niveau intestinal, la résistance à l'insuline et les dépôts de graisse corporelle. La recherche dans ce domaine suggère qu'il existe une relation bidirectionnelle entre la composition du microbiote intestinal, de l'obésité et de la résistance à l'insuline. Il a été observé que les personnes atteintes d'obésité ont une composition microbienne différente de celles qui ont un poids santé. On pense que cette altération du microbiote intestinal pourrait contribuer davantage à la progression de l'obésité en augmentant la capacité d'extraire l'énergie des aliments, en favorisant une inflammation de bas grade, en augmentant la lipogenèse, en diminuant l'oxydation des acides gras et en augmentant l'accumulation de triglycérides au niveau hépatique, entre autres mécanismes.

Compte tenu du rôle du microbiote intestinal dans la régulation du système immunitaire et de l'inflammation, nous observons que l'inflammation chronique est liée à la fois à l'obésité et aux troubles psychologiques, y compris la dépression et l'anxiété. Ces changements dans le microbiote intestinal peuvent contribuer à l'inflammation systémique et à la dysfonction immunitaire, ce qui pourrait à son tour affecter à la fois l'obésité et les troubles psychologiques. Certaines bactéries intestinales ont la capacité de produire des neurotransmetteurs qui sont absorbables au niveau intestinal, tels que la sérotonine ou le GABA, qui sont importants pour réguler l'humeur et l'anxiété. On pense que les changements dans la composition du microbiote intestinal pourraient affecter la production de ces neurotransmetteurs et influencer donc la santé mentale.

Bien que les modifications de style de vie, telles que la restriction calorique et l'exercice physique, soient considérées comme les meilleures thérapies pour la perte de poids, il existe d'autres options d'appoint, telles que la modulation du microbiote intestinal, qui pourrait être utile pour les personnes atteintes d'obésité. Des études dans lesquelles les prébiotiques, les probiotiques et les synbiotiques ont été administrées aux personnes atteintes d'obésité ont montré leurs effets bénéfiques sur la réduction du poids et d'autres paramètres métaboliques par la modulation du microbiote intestinal. En raison des preuves émergentes impliquant l'axe du cerveau intestinal dans l'obésité et sa relation avec les troubles psychologiques, il y a eu un intérêt accru pour le développement de ces traitements en tant que thérapies pour restaurer le microbiote intestinal.

Les prébiotiques sont des aliments fonctionnels, étant donné leur rôle bénéfique dans la promotion de la santé et la prévention des maladies. Un exemple est les tanins, considérés comme des composés bioactifs en raison de leur capacité à moduler les processus métaboliques et à promouvoir la santé. Une grande partie des tanins ingérés atteignent le gros intestin, où le microbiote intestinal les convertit en métabolites, y compris les acides gras à chaîne courte tels que l'acétate, le propionate et le butyrate. Ces acides gras à chaîne courte sont des métabolites importants qui peuvent avoir divers effets bénéfiques sur la santé intestinale et globale de l'hôte. Ils exercent également un effet antidiabétique potentiel à travers les mécanismes suivants: (i) Amélioration des niveaux d'insuline et de proinsuline dans le sang: l'affinité des tanins pour se lier aux polysaccharides provoque un retard et une diminution de la disponibilité du glucose dans le tractus gastro-intestinal. De plus, plusieurs études ont rapporté le potentiel d'inhibition des activités de l'α-amylase et de l'α-glucosidase par des tanins hydrolysables et des tanins condensés, respectivement. (ii) Effet de type insuline sur les tissus sensibles à l'insuline: les procyanidines peuvent agir sur des composants spécifiques de la voie de signalisation intracellulaire de l'insuline. (iii) Régulation de l'environnement antioxydant des cellules pancréatiques: le stress oxydatif jouerait un rôle dans la résistance à l'insuline car il détermine l'apoptose des cellules pancréatiques. De plus, l'expression des gènes liés aux enzymes antioxydantes dans le pancréas est faible. La capacité antioxydante élevée des tanins peut contrer la pathogenèse de la résistance à l'insuline, ainsi que leurs propriétés anti-inflammatoires (elles diminuent les niveaux de TNFα, IL-1, IL-6, etc.) et des propriétés cardioprotectrices (elles augmentent la superoxyde dismutase, diminuent les ROS, etc.).

Plus précisément, les tanins à haut poids moléculaire atteignent le microbiote intestinal dans le côlon montrant un effet prébiotique. Dans ce cas, les composés sont métabolisés par des micro-organismes, produisant des métabolites avec une biodisponibilité, une activité ou un effet fonctionnel différent par rapport à la molécule d'origine. Enfin, les tanins peuvent moduler la composition et la fonction du microbiote intestinal, inhibant sélectivement les agents pathogènes et favorisant la croissance des bactéries bénéfiques.

Les probiotiques sont des préparations de micro-organismes qui, lorsqu'ils sont administrés dans des conditions et des quantités appropriés, améliorent l'équilibre microbien de l'intestin. Il a été démontré que ces micro-organismes suppriment l'inflammation et modulent le système immunitaire en empêchant l'induction de la cytokine IL-8 dans l'épithélium du côlon humain, ainsi qu'en réduisant la perméabilité intestinale, inhibant l'endotoxémie. Les interventions probiotiques peuvent contribuer au traitement de l'obésité et des complications associées en améliorant l'abondance et la fonction du microbiote intestinal. Par conséquent, la combinaison d'interventions prébiotiques et probiotiques (synbiotiques) peut fournir une thérapie synergique et efficace pour les troubles métaboliques. De plus, le rôle positif de la supplémentation synbiotique dans les maladies mentales tels que le trouble dépressif majeur a été documenté. Dans ce cas, les synbiotiques pourraient améliorer les symptômes de la dépression en améliorant le métabolisme du tryptophane et en diminuant les concentrations de métabolite de la dopamine dans le cortex amygdaloïde.

Il a été suggéré que les synbiotiques pourraient aider à améliorer le type et la fonctionnalité du microbiote, réduire l'inflammation intestinale et favoriser la satiété par une production accrue d'hormones qui ont cet effet sur le corps. Par conséquent, cela pourrait être bénéfique dans la gestion de l'obésité. Les synbiotiques peuvent jouer un rôle crucial dans la modulation du métabolisme des macronutriments en produisant des acides gras à chaîne courte, qui se lient aux récepteurs couplés aux protéines G et augmentent la sécrétion de peptide 1 de type glucagon (GLP-1) et de peptide yy (pyy) à partir de cellules L entéroendocrines. Ces liaisons peuvent déclencher la production d'insuline par les cellules β pancréatiques, inhiber la sécrétion de glucagon, diminuer la gluconéogenèse hépatique et augmenter la sensibilité à l'insuline. Les synbiotiques améliorent également la fonction intestinale, augmentent la production de mucine et réduisent le nombre de bactéries gram-négatives pathogènes dans le côlon. Ces changements réduisent la transmission de lipopolysaccharides (LPS) à travers la paroi muqueuse et l'endotoxémie métabolique, ce qui peut finalement entraîner des améliorations de la fonction des récepteurs de l'insuline et des niveaux d'insuline inférieurs. Des études antérieures ont montré que leur administration est bénéfique à la fois pour l'obésité et les symptômes psychologiques typiques de la dépression ou de l'anxiété, entre autres. Une intervention de 6 semaines avec des synbiotiques peut réduire considérablement les symptômes de dépression par rapport à un placebo. Dans ce domaine, une méta-analyse de 2017 a suggéré que les probiotiques peuvent réduire les symptômes psychologiques, notamment l'anxiété, la dépression et le stress perçu chez les volontaires adultes en bonne santé. Le microbiote intestinal peut produire directement des neurotransmetteurs comme la sérotonine et influencer sa production. Il possède également des fonctions immunomodulatrices et est capable d'activer l'axe hypothalamique-hypophysaire par la production de cytokines pro-inflammatoires IL-1 et IL-6.

Dans ce contexte, une intervention avec une synbiotique composée de tanins et de souches intestinales bénéfiques chez les personnes atteintes d'obésité pourrait avoir des effets bénéfiques sur la santé en augmentant la capacité antioxydante et la production d'acides gras à courte chaîne, en modulant la production de neurotransmetteurs impliqués dans la satiété et l'humeur, et la promotion de l'équilibre des microbiodes, des muciètes et une permure intestinale améliorée.

Par conséquent, la combinaison d'interventions synbiotiques pourrait fournir une thérapie synergique et efficace pour les troubles métaboliques et psychologiques. La lutte contre l'obésité de manière approfondie, y compris le traitement médical, le soutien psychologique à la santé mentale et le traitement synbiotique, pourrait améliorer l'état émotionnel, l'obésité et les troubles psychologiques. En fin de compte, il pourrait améliorer la qualité de vie des personnes touchées. Bien que la recherche dans ce domaine soit toujours en cours et que davantage de preuves soient nécessaires pour bien comprendre ces interactions, il existe des preuves de plus en plus suggérant que la santé du microbiote intestinal peut influencer la santé physique et mentale de manière complexe et significative. La promotion d'un microbiote intestinal sain à travers une alimentation équilibrée, l'apport d'aliments et de probiotiques riches en fibres, ainsi que la réduction du stress, peuvent être bénéfiques pour aborder à la fois l'obésité et les troubles psychologiques, même en synergie avec d'autres traitements.

Therefore, our goal is to determine whether the intake of a synbiotic composed of lactic acid bacteria, bifidobacteria, and tannin-based phytocomplexes is capable of improving anxious and depressive symptoms, glycemic profile, and insulin resistance in patients with obesity, depending on the presence or absence of psychological disorders, through the improvement of the inflammatory profile, appetite control, Production de neurotransmetteurs et altération différentielle du microbiote intestinal.

Une étude d'intervention clinique basique, prospective, randomisée, en double aveugle, contrôlée par placebo est proposée pour les patients atteints d'obésité qui présentent des troubles dépressifs et / ou anxieux.

Pour atteindre les objectifs proposés, 120 patients atteints d'obésité qui présentent des troubles dépressifs et / ou anxieux (n = 60), et ceux sans troubles (n = 60) seront inclus. Les critères de diagnostic de dépression et d'anxiété seront ceux établis dans le DSM-5. De plus, chaque groupe sera divisé au hasard en 2 sous-groupes, dont l'un recevra la synbiotique et l'autre recevra le placebo correspondant (n = 30 par groupe) pendant 12 semaines. Le processus de randomisation sera réalisé à l'aide d'un logiciel pour une affectation aléatoire. Les patients seront inscrits séquentiellement dans l'étude lorsqu'ils assistent à l'unité d'obésité dans les consultations d'endocrinologie et de nutrition à l'hôpital Dr. Peset et répondent aux critères suivants:

• Critères d'inclusion: les patients avec un IMC de 30 à 40 kg / m², âgé de 18 à 65 ans, avec une durée de maladie connue de plus de cinq ans. De plus, tous les patients maintiendront un poids stable (<5% de fluctuation) au cours des 3 mois précédant l'étude.
• Critères d'exclusion: les patients qui ont pris des antibiotiques 3 mois avant le début de l'étude, ainsi que l'utilisation préalable de suppléments contenant des probiotiques et / ou des prébiotiques. En outre, les patients ont diagnostiqué des maladies intestinales et ceux qui ont subi une chirurgie gastro-intestinale antérieure. Les causes secondaires de l'obésité, du diabète de type 1, de la grossesse ou de la lactation, des maladies néoplasiques actives et celles avec une insuffisance hépatique ou rénale seront exclues. Enfin, les patients atteints d'autres troubles psychiatriques diagnostiqués différents de l'anxiété et / ou de la dépression, et ceux qui subissent un traitement avec des antidépresseurs avant le début de l'étude seront également exclus.

Avant de commencer l'étude, les patients ou leur représentant légal, signeront un formulaire de consentement éclairé après avoir été expliqué l'objectif de l'étude et résoudre les doutes possibles. Cette étude adhère aux directives éthiques établies pour l'expérimentation humaine à Helsinki et ses mises à jour ultérieures; Il aura également l'approbation du comité d'éthique de l'hôpital. Les informations médicales et toutes les données recueillies au cours de l'étude seront maintenues confidentielles conformément à la loi organique 15/1999 sur la protection des données personnelles et le décret royal correspondant 1720/07.

Au début de l'étude, le diététiste-nutritionniste effectuera une évaluation nutritionnelle individualisée pour calculer la dépense énergétique au repos, et les régimes hypocaloriques personnalisés seront créés, réduisant 500 kcal à partir de la dépense énergétique quotidienne totale de chaque individu, tout en conservant l'apport recommandé de chaque macronutrient (50 à 55% de carbohydrates, 30 à 35% de gros% et 15%. La surveillance alimentaire aidera à éviter les biais et à renforcer l'adhésion au régime alimentaire, ainsi que la surveillance des effets secondaires. Le groupe de traitement recevra une capsule avec une formulation synbiotique, et le groupe témoin recevra une capsule placebo (maltodextrine), et les deux groupes seront invités à le prendre quotidiennement pendant 12 semaines. La synbiotique consistera en une partie probiotique composée de Lactobacillus acidophilus, de Lactobacillus casei et de Bifidobacterium lactis (2 × 10⁹ CFU / g chacun), et une partie prébiotique composée de phytocomplexes basée sur des tanins (350 mg) extraits de diverses sources. Le placebo sera identique à la capsule synbiotique. Pour maintenir l'aveuglement pour le personnel participant à l'essai, la préparation des produits d'étude et le remplissage des conteneurs seront effectués par les sociétés Silvateam et Sacco, qui fonctionneront dans des conditions non aveugles.

Au début de l'intervention, un entretien psychologique structuré sera mené pour recueillir des informations sur l'état actuel du patient; L'histoire et l'évolution de la maladie (obésité et troubles psychologiques), habitudes alimentaires, qualité du sommeil, comorbidités psychologiques associées, domaines familiaux et sociaux, motivation pour le changement et attentes. L'impact de l'obésité sur la qualité de vie du patient (émotionnel, social et personnel) sera évalué. Le suivi psychologique aura lieu à 4, 6 et 12 semaines de l'étude. Au cours des interventions, le statut de motivation, les habitudes alimentaires, le mode de vie, la maîtrise de soi, le changement cognitivo-comportemental et la prévention des rechutes seront évalués.

Au début de l'étude et après l'intervention alimentaire, des échantillons de sang à jeun (12 heures), de la salive, de l'urine (24 heures) et des échantillons de selles seront prélevés. Les paramètres suivants seront déterminés:

1. Les paramètres anthropométriques et le poids et la hauteur de la composition corporelle seront mesurés, et l'IMC sera calculé (poids / (hauteur) ²). La taille et la circonférence de la hanche, ainsi que la pression artérielle, seront également déterminées. De plus, une analyse vectorielle utilisant l'impédance bioélectrique (SECA MBCA 550®) sera effectuée à la fois au début et à la fin de l'intervention.

   Les patients rempliront un journal alimentaire de 3 jours (y compris 1 jour de week-end) au début, 6 semaines et 12 semaines, ainsi que le questionnaire IPAQ pour surveiller l'activité physique. Ils rempliront également un questionnaire sur l'adhésion et la conformité des produits, et s'ils ont connu des effets négatifs après avoir pris le produit.

2. Évaluation psychologique D'abord, nous appliquerons le questionnaire sur l'anxiété de dépression et l'échelle de stress 21 (DASS-21). Sur la base des résultats initiaux, le stress, l'anxiété et la dépression seront évalués à l'aide de trois échelles validées: l'inventaire de la dépression Beck (BDI-2), l'échelle de stress perçue (PSS), l'inventaire d'anxiété des traits d'État (STAI) et l'estime de soi à l'aide du questionnaire de Rosenberg. Cette évaluation permettra la classification du sujet dans les deux groupes (obésité avec et sans anxiété et / ou dépression) et vérifiez s'il y a une amélioration significative après le groupe d'admission synbiotique.
3. Paramètres biochimiques Un profil lipidique complet sera évalué, déterminant le cholestérol total (TC) et les triglycérides (TG) en utilisant des méthodes enzymatiques, HDL-C (méthode directe des précipitations), LDL-C (calculé à l'aide de la formule de Friedewald) et VLDL-C (TG / 5). Les apolipoprotéines B et A-I seront déterminées par néphélométrie. Le cholestérol non-HDL (TC-HDL) et l'indice de plasma athérogène (API = log (Tg / HDL)) seront calculés. La glycémie à jeun et l'insuline seront mesurées à l'aide de la méthode enzymatique et de la chimioluminescence de l'hexokinase, respectivement, et l'indice HOMA sera calculé pour évaluer la résistance à l'insuline. La fonction hépatique et rénale, la numération sanguine complète, la coagulation et le profil hormonal seront évalués en utilisant les marqueurs suivants: AST, ALT, GGT, LDH, phosphatase alcaline, créatinine, taux de filtration glomérulaire, A1C et fonction thyroïdienne (TSH, T4 gratuit). Tous ces paramètres seront déterminés dans le service d'analyse clinique de l'hôpital universitaire du Dr Peset.
4. Détermination des biomarqueurs D.1) Paramètres inflammatoires et capacité antioxydante L'état inflammatoire sera évalué en déterminant les concentrations de protéine C-réactive ultrasensible, IL6, TNF, IL1B, Adiponectine, PAI-1 et IL10, en utilisant la technologie Lumiminex XMAP-multiplex. Le traitement des échantillons et l'analyse des données seront effectués selon les instructions du fabricant. Les taux sériques de LPS seront déterminés par ELISA. La capacité antioxydante totale dans le sérum sera déterminée à l'aide du système E-BQC (Bioquochem).

D.2) La détermination des peptides et des taux sériques de la fonction intestinale des hormones intestinales (GIP, GLP1, PYY, Ghrelin, Leptine, CCK) sera déterminée en utilisant la technologie Luminex X-MAP. Pour évaluer la perméabilité intestinale et la translocation microbienne, les taux plasmatiques de zonuline, d'occludine, de LBP, de FabP2 / I-FABP et de Reg3A seront mesurés à l'aide de kits ELISA. La détection du β-glucane dans le plasma sera réalisée en utilisant le test de lysat d'amébocytes limulus (LAL).

D.3) Analyse du peptide de neurotransmetteur Cortisol, dopamine, sérotonine et taux d'ocytocine dans le plasma, l'urine de 24 heures ou la salive sera déterminée à l'aide de kits ELISA ou de technologie Luminex X-MAP.

D.4) Analyse métabolomique RMN (résonance magnétique nucléaire) sera appliquée pour obtenir des profils métaboliques étendus à partir de grandes cohortes de patients bien phénotypées. Initialement, tous les échantillons seront analysés par RMN, obtenant un profil métabolique mondial de jusqu'à 40 métabolites, y compris les acides aminés, les sucres, les phospholipides, les marqueurs d'inflammation, les glycoprotéines, les lipoparticules et certains co-métabolites microbiens.

La signification statistique des différents métabolites sera analysée à l'aide de tests de covariance corrigée pour le taux potentiel de fausses découvertes (FDR) à l'aide du logiciel SPSS et MATLAB. Une analyse chimiométrique pour construire des modèles de diagnostic, de classification et de prédictive sera réalisée à l'aide de Scripts Matlab et de la boîte à outils PLS PLS pour la projection à une analyse de structure-discriminante latente (PLS-DA), une analyse des grappes hiérarchiques (HCA) et des approches similaires sur les données spectrales pour classifier les groupes basés sur les paramètres cliniques et d'intervention. Les réseaux métaboliques seront construits à l'aide de Cytoscape et de l'encyclopédie Kyoto des gènes et des génomes (KEGG) pour la génomique, intégrant les résultats métabolomiques et autres résultats moléculaires du projet. Enfin, tous les résultats seront évalués par validation croisée, et le pouvoir discriminatoire / prédictif des différents métabolites et scores sera analysé à l'aide des courbes de caractéristiques de fonctionnement du récepteur (ROC).

D.5) Étude de la purification de l'acide nucléique du microbiote, de l'amplification du gène de l'ARNr 16S, et du séquençage d'abord, les échantillons de selles seront triturés, homogénéisés et lysés en utilisant un système FastPrep (MP BiomEdicals). L'ADN total sera extrait après le protocole automatisé Magna Pure LC (Roche, Manheim, Allemagne) selon les instructions du fabricant. Les bibliothèques métagénomiques seront obtenues à l'aide du kit Nextera XT en suivant le protocole d'Illumina. Les régions V3-V4 de l'ARNr 16S seront amplifiées, et les bibliothèques seront purifiées selon le protocole d'Ilumina.

Le séquençage de MISEQ sera effectué à l'aide du kit V3 (cycles 2x300), générant des lectures de 300 pb pour chaque 65 heures, à partir de chaque extrémité de l'amplicon. Un séquençage ultra-profond sera effectué à l'aide d'un séquenceur Illumina au centre Fisabio-Salud Pública.

L'analyse phylogénétique de l'ARNr 16S sera réalisée à l'aide d'un logiciel Qiime. L'attribution fonctionnelle des lectures métagénomiques sera effectuée à l'aide de pipelines bioinformatiques dédiées développées à Fisabio (intégrant des méthodologies de pointe dans le domaine avec des scripts personnalisables).

Les analyses communautaires microbiennes (biodiversité, clustering, cartes de chaleur) et l'analyse statistique seront effectuées à l'aide du logiciel R. Pour l'analyse de la découverte de biomarqueurs, la plate-forme LEFSE sera utilisée.

D.6) Analyse de l'expression des gènes Nous évaluerons les changements dans les niveaux d'expression génique en utilisant la technologie Nanostring® pour NCounter®, ce qui nous permettra d'identifier les molécules de messager qui sont modifiées entre les patients obèses avec / sans troubles psychologiques. Ce système permet l'hybridation de chaque molécule cible avec une sonde fluorescente pour l'identification individuelle sans rétrotranscription ni amplification, en utilisant des quantités d'échantillon minimales. L'ARN total sera extrait des PBMC en utilisant le kit total Geneall® Ribospintm, et à partir de seulement 100 à 200 ng d'ARN total, le panneau de métabolisme multiplex évaluera 768 gènes, en se concentrant sur les voies inflammatoires et métaboliques. Les résultats seront analysés à l'aide de l'outil NSOLVER. Ces expériences seront sous-traitées à Diagnostica Longwood, S.L.

D.7) Étude in vitro du mécanisme d'action du digestat colique sur des modèles cellulaires complexes simulant l'axe intestinal-cerveau. Pour l'analyse des biomarqueurs, les changements au niveau intestinal dans les cytokines inflammatoires et les changements de récepteurs des cellules neuronaux seront observés, qui pourront plus tard être liés aux résultats in vivo. La conception comprendra l'obtention de répliques d'échantillons de contrôle suffisantes, avec un digestat colique après stabilisation et avec un digestat colique après traitement avec placebo ou synbiotique.