Potencial terapéutico de un sinbiótico para mejorar la salud mental en sujetos con obesidad.

La obesidad es una de las enfermedades crónicas más extendidas a nivel mundial, como resultado de una interacción compleja entre los hábitos dietéticos y los factores ambientales y genéticos. Según las estadísticas de la Organización Mundial de la Salud, más de 1.900 millones de adultos tienen sobrepeso, y aproximadamente 650 millones de personas sufren de obesidad. Además, estos individuos tienen un mayor riesgo de desarrollar numerosos trastornos metabólicos, como diabetes tipo 2, aterosclerosis, enfermedades cardiovasculares, enfermedad del hígado graso no alcohólico, problemas reproductivos y algunas formas de cáncer. El estilo de vida y las intervenciones farmacológicas son dos de las estrategias más importantes para tratar la obesidad. Sin embargo, los cambios estrictos en el estilo de vida a menudo solo son aceptados por un número limitado de individuos, y los medicamentos contra la obesidad pueden tener algunos efectos adversos, mientras que su eficacia a menudo disminuye después del uso prolongado. Por lo tanto, una necesidad insatisfecha significativa es la falta de terapias complementarias convenientes y efectivas para tratar la obesidad.

Existe una asociación bidireccional entre la obesidad y los trastornos del estado de ánimo, como la depresión y la ansiedad. La obesidad también tiene un efecto negativo en la salud y la calidad de vida, así como en la autoestima. Específicamente, se estima que aproximadamente el 50% de las personas con obesidad desarrollan rasgos depresivos y ansiosos, que son más comunes en las mujeres y más frecuentes a medida que aumenta el grado de obesidad. Además, las personas con obesidad a menudo sufren una carga emocional considerable, aumentan el estrés, las preocupaciones diarias e incluso experimentan dificultades para realizar actividades de la vida diaria. Agregado al estigma de la enfermedad, que tiene un impacto negativo en la autoestima y la imagen corporal, esto empeora la calidad de vida y el estado emocional de estas personas. Por lo tanto, la salud mental está estrechamente interconectada con la obesidad, y abordar los aspectos físicos y emocionales es crucial para promover el bienestar general. Es importante adoptar un enfoque holístico que incluya intervenciones en la dieta, el ejercicio físico y el apoyo emocional y psicológico para aquellos que luchan por mantener un peso saludable y una salud mental adecuada.

El eje intestino es una red de comunicación bidireccional entre el intestino y el sistema nervioso central, que funciona a través de procesos neuroinmunes y neuroendocrinos. Su participación en el inicio de la depresión ha sido postulada y está mediada por moléculas como ácidos grasos de cadena corta, ácido gamma-aminobutírico (GABA) y metabolitos de triptófano que se originan en la microbiota intestinal. En situaciones de disbiosis o alteraciones en la homeostasis de la microbiota, las vías intestinales se pueden encontrar desreguladas y se asocian con neuroinflamación y permeabilidad alterada de barrera hematoencefálica. Además, las alteraciones en la microbiota intestinal pueden contribuir a un estado depresivo al afectar directamente la liberación de neurotransmisores como la serotonina y la dopamina, influyendo en la respuesta al estrés y el eje hipotalámico-hituitivo-adrenal (HPA), que afecta el factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF) y la liberación de la liberación de ciclokinas inflamatorias. Por ejemplo, la depresión se asocia con una mayor liberación de proteína C reactiva (CRP) y citocinas como IL-1, IL-2, IL-6, IFN-Y e IL-1ß.

La obesidad también causa inflamación a nivel intestinal, resistencia a la insulina y depósitos de grasa corporal. La investigación en este campo sugiere que existe una relación bidireccional entre la composición de la microbiota intestinal, la obesidad y la resistencia a la insulina. Se ha observado que las personas con obesidad tienen una composición microbiana diferente en comparación con aquellos con un peso saludable. Se cree que esta alteración en la microbiota intestinal podría contribuir aún más a la progresión de la obesidad al aumentar la capacidad de extraer energía de los alimentos, promover la inflamación de bajo grado, aumentar la lipogénesis, disminuir la oxidación de ácidos grasos y aumentar la acumulación de triglicéridos a nivel hepático, entre otros mecanismos.

Teniendo en cuenta el papel de la microbiota intestinal en la regulación del sistema inmune y la inflamación, observamos que la inflamación crónica está vinculada tanto a la obesidad como a los trastornos psicológicos, incluida la depresión y la ansiedad. Estos cambios en la microbiota intestinal pueden contribuir a la inflamación sistémica y la disfunción inmune, lo que a su vez podría afectar tanto la obesidad como los trastornos psicológicos. Algunas bacterias intestinales tienen la capacidad de producir neurotransmisores que sean absorbibles a nivel intestinal, como la serotonina o GABA, que son importantes para regular el estado de ánimo y la ansiedad. Se cree que los cambios en la composición de la microbiota intestinal podrían afectar la producción de estos neurotransmisores y, por lo tanto, influir en la salud mental.

Aunque las modificaciones del estilo de vida, como la restricción calórica y el ejercicio físico, se consideran las mejores terapias para la pérdida de peso, existen otras opciones complementarias, como la modulación de la microbiota intestinal, que podrían ser útiles para las personas con obesidad. Los estudios en los que los prebióticos, los probióticos y los sinbióticos se administraron a individuos con obesidad han demostrado sus efectos beneficiosos sobre la reducción de peso y otros parámetros metabólicos a través de la modulación de la microbiota intestinal. Debido a la evidencia emergente que implica el eje del cerebro intestinal en la obesidad y su relación con los trastornos psicológicos, ha habido un mayor interés en el desarrollo de estos tratamientos como terapias para restaurar la microbiota intestinal.

Los prebióticos son alimentos funcionales, dado su papel beneficioso en la promoción de la salud y la prevención de enfermedades. Un ejemplo son taninos, considerados compuestos bioactivos debido a su capacidad para modular procesos metabólicos y promover la salud. Gran parte de los taninos ingeridos alcanzan el intestino grueso, donde la microbiota intestinal los convierte en metabolitos, incluidos los ácidos grasos de cadena corta como el acetato, el propionato y el butirato. Estos ácidos grasos de cadena corta son metabolitos importantes que pueden tener varios efectos beneficiosos en la salud intestinal y general del huésped. También ejercen un posible efecto antidiabético a través de los siguientes mecanismos: (i) La mejora de los niveles de insulina y proinsulina en la sangre: la afinidad de los taninos para unirse a los polisacáridos provoca un retraso y una disminución en la disponibilidad de glucosa en el tracto gastrointestinal. Además, varios estudios han informado el potencial de inhibir las actividades de α-amilasa y α-glucosidasa a través de taninos hidrolizables y taninos condensados, respectivamente. (ii) Efecto similar a la insulina sobre los tejidos sensibles a la insulina: las procianidinas pueden actuar sobre componentes específicos de la vía de señalización de insulina intracelular. (iii) Regulación del entorno antioxidante de las células pancreáticas: se cree que el estrés oxidativo juega un papel en la resistencia a la insulina, ya que determina la apoptosis de las células pancreáticas. Además, la expresión de genes relacionados con enzimas antioxidantes en el páncreas es baja. La alta capacidad antioxidante de los taninos puede contrarrestar la patogénesis de la resistencia a la insulina, junto con sus propiedades antiinflamatorias (disminuyen los niveles de TNFα, IL-1, IL-6, etc.) y las propiedades cardioprotectivas (aumentan el superóxido dismutase, disminuyen ROS, etc.).

Específicamente, los taninos de alto peso molecular alcanzan la microbiota intestinal en el colon que muestra un efecto prebiótico. En este caso, los compuestos son metabolizados por microorganismos, produciendo metabolitos con diferente biodisponibilidad, actividad o efecto funcional en comparación con la molécula original. Finalmente, los taninos pueden modular la composición y la función de la microbiota intestinal, inhibir selectivamente los patógenos y promover el crecimiento de bacterias beneficiosas.

Los probióticos son preparaciones de microorganismos que, cuando se administran en condiciones y cantidades apropiadas, mejoran el equilibrio microbiano del intestino. Se ha demostrado que estos microorganismos suprimen la inflamación y modulan el sistema inmune al prevenir la inducción de la citocina IL-8 en el epitelio del colon humano, así como reduciendo la permeabilidad intestinal, inhibiendo la endotoxemia. Las intervenciones probióticas pueden contribuir al tratamiento de la obesidad y las complicaciones asociadas al mejorar la abundancia y la función de la microbiota intestinal. Por lo tanto, la combinación de intervenciones prebióticas y probióticas (sinbióticos) puede proporcionar una terapia sinérgica y efectiva para los trastornos metabólicos. Además, se ha documentado el papel positivo de la suplementación sinbiótica en enfermedades mentales como el trastorno depresivo mayor. En este caso, los sinbióticos podrían mejorar los síntomas de la depresión al mejorar el metabolismo del triptófano y disminuir las concentraciones de metabolitos de dopamina en la corteza amígdaloide.

Se ha sugerido que los sinbióticos podrían ayudar a mejorar el tipo y la funcionalidad de la microbiota, reducir la inflamación intestinal y promover la saciedad a través de una mayor producción de hormonas que tienen este efecto en el cuerpo. Por lo tanto, esto podría ser beneficioso en la gestión de la obesidad. Los sinbióticos pueden desempeñar un papel crucial en la modulación del metabolismo de los macronutrientes al producir ácidos grasos de cadena corta, que se unen a los receptores acoplados a proteínas G y aumentan la secreción de péptido 1 similar a glucagón (GLP-1) y péptido YY (PYY) de las células L enteroendocrinas. Estas unidas pueden desencadenar la producción de insulina mediante células β pancreáticas, inhibir la secreción de glucagón, disminuir la gluconeogénesis hepática y aumentar la sensibilidad a la insulina. Los sinbióticos también mejoran la función intestinal, elevan la producción de mucina y reducen el número de bacterias gramnegativas patógenas en el colon. Estos cambios reducen la transmisión de lipopolisacáridos (LPS) a través de la pared mucosa y la endotoxemia metabólica, lo que puede conducir a mejoras en la función del receptor de insulina y los niveles más bajos de insulina. Estudios anteriores han demostrado que su administración es beneficiosa tanto para la obesidad como para los síntomas psicológicos típicos de depresión o ansiedad, entre otros. Una intervención de 6 semanas con sinbióticos puede reducir significativamente los síntomas de depresión en comparación con un placebo. En este campo, un metaanálisis de 2017 sugirió que los probióticos pueden reducir los síntomas psicológicos, incluidos la ansiedad, la depresión y el estrés percibido en voluntarios adultos sanos. La microbiota intestinal puede producir directamente neurotransmisores como la serotonina e influir en su producción. También tiene funciones inmunomoduladoras y es capaz de activar el eje hipotalámico-pituitario a través de la producción de citocinas proinflamatorias IL-1 e IL-6.

En este contexto, una intervención con un sinbiótico compuesto por taninos y cepas intestinales beneficiosas en individuos con obesidad podría tener efectos beneficiosos en la salud al aumentar la capacidad antioxidante y la producción de ácidos grasos de cadena corta, modular la producción de neurotransmisores involucrados en la saciedad y el estado de ánimo, y promover el equilibrio de microbiota microbiota, la protección mucosa y la mejora de la permeabilidad intestinal.

Por lo tanto, combinar intervenciones sinbióticas podría proporcionar una terapia sinérgica y efectiva para los trastornos metabólicos y psicológicos. Abordar la obesidad exhaustivamente, incluido el tratamiento médico, el apoyo psicológico para la salud mental y el tratamiento sinbiótico, podría mejorar el estado emocional, la obesidad y los trastornos psicológicos. En última instancia, podría mejorar la calidad de vida de las personas afectadas. Si bien la investigación en esta área aún está en curso y se necesita más evidencia para comprender completamente estas interacciones, existe evidencia creciente que sugiere que la salud de la microbiota intestinal puede influir en la salud física y mental de maneras complejas y significativas. Promover una microbiota intestinal saludable a través de una dieta equilibrada, la ingesta de alimentos y probióticos ricos en fibra, así como la reducción del estrés, puede ser beneficioso para abordar tanto la obesidad como los trastornos psicológicos, incluso sinérgicamente con otros tratamientos.

Therefore, our goal is to determine whether the intake of a synbiotic composed of lactic acid bacteria, bifidobacteria, and tannin-based phytocomplexes is capable of improving anxious and depressive symptoms, glycemic profile, and insulin resistance in patients with obesity, depending on the presence or absence of psychological disorders, through the improvement of the inflammatory profile, appetite control, Producción de neurotransmisores y la alteración diferencial de la microbiota intestinal.

Se propone un estudio de intervención clínica básica, prospectiva, aleatoria, doble ciego, controlada con placebo para pacientes con obesidad que presentan trastornos depresivos y/o ansiedad.

Para lograr los objetivos propuestos, se incluirán 120 pacientes con obesidad que presenten trastornos depresivos y/o de ansiedad (n = 60), y aquellos sin trastornos (n = 60) se incluirán. Los criterios de diagnóstico para la depresión y la ansiedad serán los establecidos en el DSM-5. Además, cada grupo se dividirá aleatoriamente en 2 subgrupos, uno de los cuales recibirá el sinbiótico y el otro recibirá el placebo correspondiente (n = 30 por grupo) durante 12 semanas. El proceso de aleatorización se llevará a cabo utilizando un programa de software para asignación aleatoria. Los pacientes se inscribirán secuencialmente en el estudio mientras asisten a la Unidad de Obesidad en las consultas de endocrinología y nutrición en el Hospital Dr. Peset y cumplen con los siguientes criterios:

• Criterios de inclusión: pacientes con un IMC de 30-40 kg/m², de entre 18 y 65 años, con una duración de enfermedad conocida de más de cinco años. Además, todos los pacientes mantendrán un peso estable (<5% de fluctuación) durante los 3 meses previos al estudio.
• Criterios de exclusión: pacientes que han tomado antibióticos 3 meses antes del inicio del estudio, así como el uso previo de suplementos que contienen probióticos y/o prebióticos. Además, los pacientes diagnosticados con enfermedades intestinales y aquellos que se han sometido a cirugía gastrointestinal previa. Causas secundarias de obesidad, diabetes tipo 1, embarazo o lactancia, enfermedad neoplásica activa, y aquellos con insuficiencia hepática o renal establecida se excluirán. Finalmente, los pacientes con otros trastornos psiquiátricos diagnosticados diferentes de la ansiedad y/o la depresión, y aquellos que están en tratamiento con antidepresivos antes del inicio del estudio también serán excluidos.

Antes de comenzar el estudio, los pacientes, o su representante legal, firmarán un formulario de consentimiento informado después de ser explicado el objetivo del estudio y resolver cualquier posible duda. Este estudio se adhiere a las pautas éticas establecidas para la experimentación humana en Helsinki y sus actualizaciones posteriores; También tendrá la aprobación del comité de ética del hospital. La información médica y todos los datos recopilados durante el estudio se mantendrán confidenciales de acuerdo con la ley orgánica 15/1999 sobre la protección de datos personales y el decreto real correspondiente 1720/07.

Al comienzo del estudio, el nutricionista dietista llevará a cabo una evaluación nutricional individualizada para calcular el gasto de energía en reposo, y se crearán dietas hipocalóricas personalizadas, reduciendo 500 kcal a partir de los gastos de energía diarios totales de cada individuo, al tiempo que mantienen la ingesta recomendada de cada macronto (50-55% de carbohidratos, 30-35% de grasas, y 15% de protegers. El monitoreo dietético ayudará a evitar el sesgo y reforzará la adherencia a la dieta, junto con el monitoreo de los efectos secundarios. El grupo de tratamiento recibirá una cápsula con una formulación sinbiótica, y el grupo de control recibirá una cápsula placebo (maltodextrina), y ambos grupos recibirán instrucciones de tomarlo diariamente durante 12 semanas. El sinbiótico consistirá en una parte probiótica compuesta de Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei y Bifidobacterium lactis (2 × 10⁹ CFU/g cada uno) y una parte prebiótica compuesta de fitocomplexes basados ​​en taninos (350 mg) extraídos de diversas fuentes. El placebo se verá idéntico a la cápsula sinbiótica. Para mantener el cegamiento para el personal que participa en el juicio, la preparación de los productos de estudio y el llenado de los contenedores serán realizados por las compañías Silvateam y Sacco, que operarán en condiciones no cicolectivas.

Al comienzo de la intervención, se realizará una entrevista psicológica estructurada para recopilar información sobre la condición actual del paciente; Historia y evolución de la enfermedad (obesidad y trastorno psicológico), patrones de alimentación, calidad del sueño, comorbilidades psicológicas asociadas, áreas familiares y sociales, motivación para el cambio y expectativas. Se evaluará el impacto de la obesidad en la calidad de vida del paciente (emocional, social y personal). El seguimiento psicológico tendrá lugar a las 4, 6 y 12 semanas del estudio. Durante las intervenciones, se evaluará el estado de la motivación, los hábitos alimenticios, el estilo de vida, el autocontrol, el cambio cognitivo-conductual y la prevención de recaídas.

Al comienzo del estudio y después de la intervención dietética, se recolectarán muestras de sangre en ayunas (12 horas), saliva, orina (24 horas) y muestras de heces. Se determinarán los siguientes parámetros:

1. Se medirán los parámetros antropométricos y el peso y la altura de la composición corporal, y se calculará el IMC (peso / (altura) ²). También se determinará la circunferencia de la cintura y la cadera, así como la presión arterial. Además, se realizará un análisis vectorial que use impedancia bioeléctrica (Seca MBCA 550®) tanto al comienzo como al final de la intervención.

   Los pacientes completarán un registro dietético de 3 días (incluido el 1 día de fin de semana) al principio, 6 semanas y 12 semanas, junto con el cuestionario IPAQ para monitorear la actividad física. También completarán un cuestionario sobre la adherencia y el cumplimiento del producto, y si han experimentado algún efecto adverso después de tomar el producto.

2. Evaluación psicológica Primero, aplicaremos el cuestionario de ansiedad y estrés de la depresión 21 (DASS-21). Según los resultados iniciales, el estrés, la ansiedad y la depresión se evaluarán utilizando tres escalas validadas: el inventario de depresión de Beck (BDI-2), la escala de estrés percibida (PSS), el inventario de ansiedad del rasgo de estado (STAI) y la autoestima utilizando el cuestionario de Rosenberg. Esta evaluación permitirá la clasificación del sujeto en ambos grupos (obesidad con y sin ansiedad y/o depresión), y verificará si hay una mejora significativa después del grupo de admisión sinbiótica.
3. Parámetros bioquímicos Se evaluará un perfil lipídico completo, determinando el colesterol total (TC) y los triglicéridos (TG) utilizando métodos enzimáticos, HDL-C (método de precipitación directa), LDL-C (calculado usando la fórmula de Friedewald) y VLDL-C (TG/5). Las apolipoproteínas B y A-I estarán determinadas por nefelometría. Se calculará el colesterol no HDL (TC-HDL) y el índice de plasma aterogénico (API = log (TG/HDL)). La glucosa en sangre en ayunas y la insulina se medirán utilizando el método enzimático de la hexoquinasa y la quimioluminiscencia, respectivamente, y el índice HOMA se calculará para evaluar la resistencia a la insulina. La función hepática y renal, el recuento sanguíneo completo, la coagulación y el perfil hormonal se evaluarán utilizando los siguientes marcadores: AST, ALT, GGT, LDH, fosfatasa alcalina, creatinina, tasa de filtración glomerular, A1C y función tiroidea (TSH, T4 libre). Todos estos parámetros se determinarán en el servicio de análisis clínico del Hospital Universitario Dr. Peset.
4. Determinación del biomarcador D.1) Parámetros inflamatorios y capacidad antioxidante El estado inflamatorio se evaluará determinando las concentraciones de proteína C reactiva ultrasensible, IL6, TNF, IL1B, Adiponectina, PAI-1 e IL10, utilizando tecnología Luminex XMAP-Multiplex. El procesamiento de muestras y el análisis de datos se realizarán siguiendo las instrucciones del fabricante. Los niveles séricos de LPS serán determinados por ELISA. La capacidad antioxidante total en suero se determinará utilizando el sistema E-BQC (Bioquochem).

D.2) La determinación de los péptidos y la función intestinal Los niveles séricos de las hormonas intestinales (GIP, GLP1, Pyy, Ghrelin, Leptin, CCK) se determinarán utilizando la tecnología Luminex X-MAP. Para evaluar la permeabilidad intestinal y la translocación microbiana, los niveles plasmáticos de zonulina, occludina, LBP, FABP2/I-FABP y REG3A se medirán utilizando kits ELISA. La detección de β-glucano en plasma se realizará utilizando el ensayo de lisado de amebocitos Limulus (LAL).

D.3) Análisis de péptidos de neurotransmisores cortisol, dopamina, serotonina y oxitocina en plasma, orina las 24 horas o saliva se determinarán utilizando kits ELISA o tecnología Luminex X-MAP.

D.4) El análisis metabolómico de la RMN (resonancia magnética nuclear) se aplicará para obtener perfiles metabólicos extensos de grandes cohortes de pacientes bien fenotipados. Inicialmente, todas las muestras serán analizadas mediante RMN, obteniendo un perfil metabólico global de hasta 40 metabolitos, incluidos aminoácidos, azúcares, fosfolípidos, marcadores de inflamación, glucoproteínas, lipopartículas y algunos co-metabolitos microbianos.

La significación estadística de los diferentes metabolitos se analizará utilizando pruebas de covarianza corregidas para una tasa de descubrimiento falso potencial (FDR) utilizando el software SPSS y MATLAB. El análisis quimiométrico para construir modelos de diagnóstico, clasificación y predictivos se realizará utilizando scripts de MATLAB personalizados y caja de herramientas PLS para PCA, proyección a la estructura latente-análisis discriminante (PLS-DA), análisis jerárquico de conglomerados (HCA) y enfoques similares en datos espectrales para clasificar grupos basados ​​en parámetros clínicos e intervención. Las redes metabólicas se construirán utilizando Cytoscape y la Enciclopedia de Genes y Genomas (KEGG) de Kioto para la genómica, integrando resultados metabolómicos y otros resultados moleculares del proyecto. Finalmente, todos los resultados se evaluarán mediante validación cruzada, y el poder discriminatorio/predictivo de los diferentes metabolitos y puntajes se analizará utilizando curvas de características operativas (ROC) del receptor.

D.5) Estudio de la purificación de ácido nucleico de microbiota, amplificación del gen 16S rRNA y secuenciación primero, las muestras de heces se triturarán, homogeneizarán y se lisarán usando un sistema FastPrep (MP Biomedicals). El ADN total se extraerá después del protocolo automatizado de Magna Pure LC (Roche, Manheim, Alemania) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las bibliotecas metagenómicas se obtendrán utilizando el kit NEXTera XT después del protocolo de Illumina. Las regiones V3-V4 del 16S rRNA se amplificarán, y las bibliotecas se purificarán después del protocolo de Illumina.

La secuenciación de Miseq se realizará utilizando el kit V3 (2x300 ciclos), generando lecturas de 300 pb por cada 65 horas, comenzando desde cada extremo del amplicón. La secuenciación ultra profunda se realizará utilizando un secuenciador Illumina en el Centro Fisabio-Salud Pública.

El análisis filogenético de 16S rRNA se llevará a cabo utilizando el software QIIME. La asignación funcional de lecturas metagenómicas se realizará utilizando tuberías bioinformáticas dedicadas desarrolladas en FISABIO (integrando metodologías de vanguardia en el campo con scripts personalizables).

Los análisis de la comunidad microbiana (biodiversidad, agrupación, mapas de calor) y análisis estadístico se realizarán utilizando el software R. Para el análisis de descubrimiento de biomarcadores, se utilizará la plataforma LEFSE.

D.6) Análisis de expresión génica Evaluaremos los cambios en los niveles de expresión génica utilizando la tecnología NanoString® para NCounter®, lo que nos permitirá identificar moléculas mensajeras que se alteran entre pacientes obesos con/sin trastornos psicológicos. Este sistema permite la hibridación de cada molécula objetivo con una sonda fluorescente para la identificación individual sin retrotranscripción o amplificación, utilizando cantidades de muestra mínima. El ARN total se extraerá de PBMC utilizando el kit total de ribospintm de GeneAll®, y de solo 100-200 ng de ARN total, el panel de metabolismo multiplex evaluará 768 genes, centrándose en vías inflamatorias y metabólicas. Los resultados se analizarán utilizando la herramienta NSolver. Estos experimentos serán subcontratados a Diagnostica Longwood, S.L.

D.7) Estudio in vitro del mecanismo de acción del digestado de colon en modelos celulares complejos que simulan el eje del cerebro intestinal se propone el uso y el diseño de un modelo de órgano en chip (OOC), con células intestinales en contacto con el digestato de fermentación (de las heces) y las células neurobles en contacto con el material absorbido, específicamente diseñado para estudiar el mecanismo de acción de la sínkica del paciente). Para el análisis de biomarcadores, se observarán cambios a nivel intestinal en citocinas inflamatorias y cambios en el receptor de células neuronales, lo que luego puede estar relacionado con los resultados in vivo. El diseño incluirá la obtención de suficientes réplicas de muestra de control, con digestato de colon después de la estabilización, y con digestato de colon después del tratamiento con placebo o sinbiótico.