Potencial terapêutico de um sinbiótico para melhorar a saúde mental em indivíduos com obesidade.

A obesidade é uma das doenças crônicas mais difundidas em todo o mundo, resultantes de uma interação complexa entre hábitos alimentares e fatores ambientais e genéticos. De acordo com as estatísticas da Organização Mundial da Saúde, mais de 1,9 bilhão de adultos estão acima do peso e aproximadamente 650 milhões de pessoas sofrem de obesidade. Além disso, esses indivíduos correm maior risco de desenvolver numerosos distúrbios metabólicos, como diabetes tipo 2, aterosclerose, doenças cardiovasculares, doença hepática gordurosa não alcoólica, questões reprodutivas e algumas formas de câncer. O estilo de vida e as intervenções farmacológicas são duas das estratégias mais importantes para o tratamento da obesidade. No entanto, mudanças estritas no estilo de vida geralmente são aceitas apenas por um número limitado de indivíduos, e os medicamentos anti-obesidade podem ter alguns efeitos adversos, enquanto sua eficácia geralmente diminui após o uso prolongado. Portanto, uma necessidade significativa não atendida é a falta de terapias adjuvantes convenientes e eficazes para o tratamento da obesidade.

Existe uma associação bidirecional entre obesidade e transtornos de humor, como depressão e ansiedade. A obesidade também tem um efeito negativo na saúde e na qualidade de vida, bem como na auto-estima. Especificamente, estima -se que aproximadamente 50% dos indivíduos com obesidade desenvolvam características depressivas e ansiosas, que são mais comuns em mulheres e mais frequentes à medida que o grau de obesidade aumenta. Além disso, as pessoas com obesidade geralmente sofrem um ônus emocional considerável, o aumento do estresse, as preocupações diárias e até mesmo enfrentando dificuldades em realizar atividades da vida diária. Adicionado ao estigma da doença, que tem um impacto negativo na auto-estima e na imagem corporal, isso piora a qualidade de vida e o estado emocional desses indivíduos. Portanto, a saúde mental está intimamente interconectada com a obesidade, e abordar os aspectos físicos e emocionais é crucial para promover o bem-estar geral. É importante adotar uma abordagem holística que inclua intervenções em dieta, exercício físico e apoio emocional e psicológico para aqueles que lutam para manter um peso saudável e a saúde mental adequada.

O eixo intestinal-cérebro é uma rede de comunicação bidirecional entre o intestino e o sistema nervoso central, funcionando através de processos neuroimunes e neuroendócrinos. Seu envolvimento no início da depressão foi postulado e é mediado por moléculas como ácidos graxos de cadeia curta, ácido gama-aminobutírico (GABA) e metabólitos de triptofano originários da microbiota intestinal. Em situações de disbiose ou alterações na homeostase da microbiota, as vias de cérebro intestinal podem ser desreguladas e estão associadas à neuroinflamação e à permeabilidade alterada da barreira do sangue. Moreover, alterations in the gut microbiota may contribute to a depressive state by directly affecting the release of neurotransmitters such as serotonin and dopamine, influencing the stress response and the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis, affecting brain-derived neurotrophic factor (BDNF) levels, and triggering the release of inflammatory cytokines. Por exemplo, a depressão está associada a uma liberação aumentada de proteína C reativa (PCR) e citocinas como IL-1, IL-2, IL-6, IFN-Y e IL-1ß.

A obesidade também causa inflamação no nível intestinal, resistência à insulina e depósitos de gordura corporal. A pesquisa nesse campo sugere que existe uma relação bidirecional entre a composição da microbiota intestinal, obesidade e resistência à insulina. Observou -se que as pessoas com obesidade têm uma composição microbiana diferente em comparação com aquelas com um peso saudável. Acredita-se que essa alteração na microbiota intestinal possa contribuir ainda mais para a progressão da obesidade, aumentando a capacidade de extrair energia dos alimentos, promovendo a inflamação de baixo grau, aumentando a lipogênese, diminuindo a oxidação dos ácidos graxos e aumentando o acúmulo de triglicerídeos no nível hepático, entre outros mecanismos.

Considerando o papel da microbiota intestinal na regulação do sistema imunológico e da inflamação, observamos que a inflamação crônica está ligada à obesidade e aos distúrbios psicológicos, incluindo depressão e ansiedade. Essas mudanças na microbiota intestinal podem contribuir para a inflamação sistêmica e a disfunção imunológica, o que por sua vez pode afetar tanto a obesidade quanto os distúrbios psicológicos. Algumas bactérias intestinais têm a capacidade de produzir neurotransmissores que são absorvíveis no nível intestinal, como serotonina ou GABA, que são importantes para regular o humor e a ansiedade. Acredita -se que as mudanças na composição da microbiota intestinal possam afetar a produção desses neurotransmissores e, portanto, influenciar a saúde mental.

Embora as modificações no estilo de vida, como restrição calórica e exercício físico, sejam considerados as melhores terapias para perda de peso, existem outras opções adjuvantes, como a modulação da microbiota intestinal, isso pode ser útil para pessoas com obesidade. Estudos em que prebióticos, probióticos e sinbióticos foram administrados a indivíduos com obesidade mostraram seus efeitos benéficos na redução de peso e outros parâmetros metabólicos através da modulação da microbiota intestinal. Devido à evidência emergente que implica o eixo intestinal-cérebro na obesidade e sua relação com os distúrbios psicológicos, houve um interesse aumentado no desenvolvimento desses tratamentos como terapias para restaurar a microbiota intestinal.

Os prebióticos são alimentos funcionais, dado seu papel benéfico na promoção da saúde e na prevenção de doenças. Um exemplo são taninos, considerados compostos bioativos devido à sua capacidade de modular processos metabólicos e promover a saúde. Grande parte dos taninos ingeridos atinge o intestino grosso, onde a microbiota intestinal os converte em metabólitos, incluindo ácidos graxos de cadeia curta, como acetato, propionato e butirato. Esses ácidos graxos de cadeia curta são metabólitos importantes que podem ter vários efeitos benéficos na saúde intestinal e geral do hospedeiro. Eles também exercem um potencial efeito antidiabético através dos seguintes mecanismos: (i) Melhoria dos níveis de insulina e pró -insulina no sangue: a afinidade dos taninos pela ligação aos polissacarídeos causa um atraso e uma diminuição na disponibilidade de glicose no trato gastrointestinal. Além disso, vários estudos relataram o potencial de inibir as atividades da α-amilase e da α-glucosidase através de taninos hidrolisíveis e taninos condensados, respectivamente. (ii) Efeito do tipo insulina nos tecidos sensíveis à insulina: as procianidinas podem atuar em componentes específicos da via de sinalização intracelular da insulina. (iii) Regulação do ambiente antioxidante das células pancreáticas: acredita -se que o estresse oxidativo desempenhe um papel na resistência à insulina, pois determina a apoptose das células pancreáticas. Além disso, a expressão de genes relacionados a enzimas antioxidantes no pâncreas é baixa. A alta capacidade antioxidante de taninos pode neutralizar a patogênese da resistência à insulina, juntamente com suas propriedades anti-inflamatórias (elas diminuem as propriedades TNFα, IL-1, IL-6, etc.) e propriedades cardioprotetivas (aumentam a superóxido dismutase, diminuição de EROs, etc.).

Especificamente, os taninos de alto peso molecular atingem a microbiota intestinal no cólon, mostrando um efeito prebiótico. Nesse caso, os compostos são metabolizados por microorganismos, produzindo metabólitos com diferentes biodisponibilidade, atividade ou efeito funcional em comparação com a molécula original. Finalmente, os taninos podem modular a composição e a função da microbiota intestinal, inibindo seletivamente patógenos e promovendo o crescimento de bactérias benéficas.

Os probióticos são preparativos de microorganismos que, quando administrados em condições e quantidades apropriados, melhoram o equilíbrio microbiano do intestino. Demonstrou-se que esses microorganismos suprimem a inflamação e modulam o sistema imunológico, impedindo a indução da citocina IL-8 no epitélio do cólon humano, além de reduzir a permeabilidade intestinal, inibindo a endotoxemia. Intervenções probióticas podem contribuir para o tratamento da obesidade e complicações associadas, melhorando a abundância e a função da microbiota intestinal. Portanto, a combinação de intervenções prebióticas e probióticas (sinbióticas) pode fornecer uma terapia sinérgica e eficaz para distúrbios metabólicos. Além disso, o papel positivo da suplementação sinbiótica em doenças mentais, como transtorno depressivo maior, foi documentado. Nesse caso, os sinbióticos podem melhorar os sintomas de depressão, aumentando o metabolismo do triptofano e diminuindo as concentrações de metabolitos de dopamina no córtex amigdalóide.

Foi sugerido que os sinbióticos poderiam ajudar a melhorar o tipo e a funcionalidade da microbiota, reduzir a inflamação intestinal e promover a saciedade através do aumento da produção de hormônios que têm esse efeito no corpo. Portanto, isso pode ser benéfico para gerenciar a obesidade. Os sinbióticos podem desempenhar um papel crucial na modulação do metabolismo do macronutriente, produzindo ácidos graxos de cadeia curta, que se ligam aos receptores acoplados à proteína G e aumentam a secreção de peptídeo 1 do tipo glucagon (GLP-1) e peptídeo YY (PYY) das células L interoendocrinas. Essas ligações podem desencadear a produção de insulina pelas células β pancreáticas, inibir a secreção de glucagon, diminuir a gluconeogênese hepática e aumentar a sensibilidade à insulina. Os sinbióticos também melhoram a função intestinal, elevam a produção de mucina e reduzem o número de bactérias Gram-negativas patogênicas no cólon. Essas mudanças reduzem a transmissão de lipopolissacarídeos (LPS) através da parede da mucosa e da endotoxemia metabólica, o que pode levar a melhorias na função do receptor de insulina e mais baixos níveis de insulina. Estudos anteriores mostraram que sua administração é benéfica para a obesidade e os sintomas psicológicos típicos de depressão ou ansiedade, entre outros. Uma intervenção de 6 semanas com sinbióticos pode reduzir significativamente os sintomas de depressão em comparação com um placebo. Nesse campo, uma metanálise de 2017 sugeriu que os probióticos podem reduzir os sintomas psicológicos, incluindo ansiedade, depressão e estresse percebido em voluntários adultos saudáveis. A microbiota intestinal pode produzir diretamente neurotransmissores como serotonina e influenciar sua produção. Ele também possui funções imunomoduladoras e é capaz de ativar o eixo hipotalâmico-hipófise através da produção de citocinas pró-inflamatórias IL-1 e IL-6.

Nesse contexto, uma intervenção com um sinbiótico composto por taninos e cepas intestinais benéficas em indivíduos com obesidade pode ter efeitos benéficos na saúde, aumentando a capacidade antioxidante e a produção de ácidos graxos de cadeia curta, a modulação da produção de neurotransmissores e a improviso de permear e a promoção da permeável.

Portanto, a combinação de intervenções sinbióticas pode fornecer uma terapia sinérgica e eficaz para distúrbios metabólicos e psicológicos. Lidar com a obesidade de maneira abrangente, incluindo tratamento médico, apoio psicológico à saúde mental e tratamento sinbiótico, poderia melhorar o estado emocional, a obesidade e os distúrbios psicológicos. Por fim, poderia aumentar a qualidade de vida dos indivíduos afetados. Embora a pesquisa nessa área ainda esteja em andamento e seja necessária mais evidências para entender completamente essas interações, há evidências crescentes sugerindo que a saúde da microbiota intestinal pode influenciar a saúde física e mental de maneiras complexas e significativas. A promoção de uma microbiota intestinal saudável através de uma dieta equilibrada, a ingestão de alimentos e probióticos ricos em fibras, bem como a redução do estresse, pode ser benéfica para abordar a obesidade e os distúrbios psicológicos, mesmo sinergicamente com outros tratamentos.

Therefore, our goal is to determine whether the intake of a synbiotic composed of lactic acid bacteria, bifidobacteria, and tannin-based phytocomplexes is capable of improving anxious and depressive symptoms, glycemic profile, and insulin resistance in patients with obesity, depending on the presence or absence of psychological disorders, through the improvement of the inflammatory profile, appetite control, Produção de neurotransmissores e a alteração diferencial da microbiota intestinal.

É proposto um estudo de intervenção clínico-básico, prospectivo, randomizado, duplo-cego e controlado por placebo para pacientes com obesidade que apresentam transtornos depressivos e/ou de ansiedade.

Para atingir os objetivos propostos, 120 pacientes com obesidade que apresentam transtornos depressivos e/ou de ansiedade (n = 60), e aqueles sem distúrbios (n = 60) serão incluídos. Os critérios de diagnóstico para depressão e ansiedade serão os estabelecidos no DSM-5. Além disso, cada grupo será dividido aleatoriamente em 2 subgrupos, um dos quais receberá o sinbiótico e o outro receberá o placebo correspondente (n = 30 por grupo) por 12 semanas. O processo de randomização será realizado usando um programa de software para atribuição aleatória. Os pacientes serão incluídos sequencialmente no estudo, enquanto participam da unidade de obesidade nas consultas de endocrinologia e nutrição do Dr. Peset Hospital e atenderem aos seguintes critérios:

• Critérios de inclusão: pacientes com IMC de 30-40 kg/m², com idades entre 18 e 65 anos, com uma duração conhecida de mais de cinco anos. Além disso, todos os pacientes manterão um peso estável (<5% de flutuação) durante os três meses anteriores ao estudo.
• Critérios de exclusão: pacientes que tomaram antibióticos 3 meses antes do início do estudo, bem como o uso prévio de suplementos contendo probióticos e/ou prebióticos. Além disso, os pacientes diagnosticados com doenças intestinais e aqueles que foram submetidos a cirurgia gastrointestinal anterior. As causas secundárias de obesidade, diabetes tipo 1, gravidez ou lactação, doença neoplásica ativa e aquelas com fígado estabelecidas ou insuficiência renal serão excluídas. Finalmente, pacientes com outros distúrbios psiquiátricos diagnosticados diferentes da ansiedade e/ou depressão, e aqueles que estão em tratamento com antidepressivos antes do início do estudo também serão excluídos.

Antes de iniciar o estudo, os pacientes, ou seu representante legal, assinarão um formulário de consentimento informado após serem explicados o objetivo do estudo e resolver qualquer dúvida possível. Este estudo segue as diretrizes éticas estabelecidas para a experimentação humana em Helsinque e suas atualizações subsequentes; Também terá aprovação do Comitê de Ética do Hospital. As informações médicas e todos os dados coletados durante o estudo serão mantidos confidenciais de acordo com a Lei Orgânica 15/1999 sobre proteção de dados pessoais e o decreto real correspondente de 1720/07.

No início do estudo, o nutricionista nutricionista realizará uma avaliação nutricional individualizada para calcular o gasto de energia em repouso, e dietas hipocalóricas personalizadas serão criadas, reduzindo 500 kcal a partir de cada um dos gastos com energia diária, mantendo a ingestão recomendada de cada um do macronutriente (50 -5% de 50%. O monitoramento da dieta ajudará a evitar o viés e a reforçar a adesão à dieta, juntamente com o monitoramento dos efeitos colaterais. O grupo de tratamento receberá uma cápsula com uma formulação sinbiótica, e o grupo controle receberá uma cápsula de placebo (maltodextrina), e ambos os grupos serão instruídos a tomá -lo diariamente por 12 semanas. O sinbiótico consistirá em uma parte probiótica composta por lactobacillus acidophilus, lactobacillus casei e bifidobacterium lactis (2 × 10⁹ UFC/g cada) e uma parte prebiótica composta de vários fontes baseadas em taninos (350 MG). O placebo ficará idêntico à cápsula sinbiótica. Para manter o cegamento para os funcionários que participam do julgamento, a preparação dos produtos do estudo e o preenchimento dos contêineres serão feitos pelas empresas Silvateam e Sacco, que funcionarão sob condições não versas.

No início da intervenção, uma entrevista psicológica estruturada será realizada para coletar informações sobre a condição atual do paciente; História e evolução da doença (obesidade e distúrbio psicológico), padrões alimentares, qualidade do sono, comorbidades psicológicas associadas, áreas familiares e sociais, motivação para mudanças e expectativas. O impacto da obesidade na qualidade de vida do paciente (emocional, social e pessoal) será avaliado. O acompanhamento psicológico ocorrerá às 4, 6 e 12 semanas do estudo. Durante as intervenções, status de motivação, hábitos alimentares, estilo de vida, autocontrole, mudanças cognitivo-comportamentais e prevenção de recaídas serão avaliadas.

No início do estudo e após a intervenção alimentar, serão coletadas amostras de sangue em jejum (12 horas), saliva, urina (24 horas) e amostras de fezes. Os seguintes parâmetros serão determinados:

1. Os parâmetros antropométricos e o peso e a altura da composição corporal serão medidos, e o IMC será calculado (peso / (altura) ²). A cintura e a circunferência do quadril, bem como a pressão arterial, também serão determinadas. Além disso, uma análise vetorial usando impedância bioelétrica (SECA MBCA 550®) será realizada no início e no final da intervenção.

   Os pacientes concluirão um registro alimentar de três dias (incluindo 1 dia de fim de semana) no início, 6 semanas e 12 semanas, juntamente com o questionário do IPAQ para monitorar a atividade física. Eles também concluirão um questionário sobre adesão e conformidade do produto e, se tiveram algum efeito adverso após a tomada do produto.

2. Avaliação psicológica Primeiro, aplicaremos o questionário de ansiedade e estresse de depressão 21 (DASS-21). Com base nos resultados iniciais, o estresse, a ansiedade e a depressão serão avaliados usando três escalas validadas: o Inventário de Depressão de Beck (BDI-2), a Escala de Estresse Percebida (PSS), o Inventário de Ansiedade do Estado (STAI) e a auto-estima usando o questionário de Rosenberg. Essa avaliação permitirá a classificação do sujeito nos dois grupos (obesidade com e sem ansiedade e/ou depressão) e verifique se há uma melhora significativa após o grupo de ingestão sinbiótica.
3. Parâmetros bioquímicos Um perfil lipídico completo será avaliado, determinando o colesterol total (TC) e os triglicerídeos (TG) usando métodos enzimáticos, HDL-C (método de precipitação direta), LDL-C (calculado usando a fórmula de FriedeWald) e VLDL-C (TG/5). As apolipoproteínas B e A-I serão determinadas por nefelometria. O colesterol não-HDL (TC-HDL) e o índice plasmático aterogênico (API = log (TG/HDL)) serão calculados. A glicose no sangue em jejum e a insulina serão medidas usando o método enzimático e quimioluminescência da hexoquinase, respectivamente, e o índice HOMA será calculado para avaliar a resistência à insulina. A função hepática e renal, contagem sanguínea completa, coagulação e perfil hormonal serão avaliados usando os seguintes marcadores: AST, ALT, GGT, LDH, fosfatase alcalina, creatinina, taxa de filtração glomerular, A1C e função da tireóide (TSH, T4 livre). Todos esses parâmetros serão determinados no Serviço de Análise Clínica do Hospital Universitário Dr. Peset.
4. Determinação do biomarcador D.1) Parâmetros inflamatórios e capacidade antioxidante O estado inflamatório será avaliado pela determinação das concentrações de proteína C-reativa ultrassensível, IL6, TNF, IL1B, adiponectina, PAI-1 e IL10, usando a tecnologia Luminex XMAP-MAPLIPLEX. O processamento de amostras e a análise de dados serão realizados seguindo as instruções do fabricante. Os níveis séricos de LPS serão determinados por ELISA. A capacidade antioxidante total no soro será determinada usando o sistema E-BQC (bioquochem).

D.2) A determinação de peptídeos e níveis séricos de função intestinal de hormônios intestinais (GIP, GLP1, PYY, grelina, leptina, CCK) serão determinados usando a tecnologia Luminex X-Map. Avaliar a permeabilidade intestinal e a translocação microbiana, os níveis plasmáticos de zonulina, ocludina, LBP, FABP2/i-FABP e REG3A serão medidos usando kits ELISA. A detecção de β-glucano no plasma será realizada usando o ensaio de lisado de amebócitos Limulus (LAL).

d.3) Análise de peptídeos de neurotransmissor Cortisol, dopamina, serotonina e níveis de oxitocina na plasma, urina 24 horas ou saliva serão determinados usando kits ELISA ou tecnologia Luminex X-Map.

D.4) A análise metabolômica RMN (ressonância magnética nuclear) será aplicada para obter extensos perfis metabólicos de grandes coortes de pacientes bem fenotipados. Inicialmente, todas as amostras serão analisadas por RMN, obtendo um perfil metabólico global de até 40 metabólitos, incluindo aminoácidos, açúcares, fosfolipídios, marcadores de inflamação, glicoproteínas, lipopartículas e alguns co-metabolitos microbianos.

A significância estatística dos diferentes metabólitos será analisada usando testes de covariância corrigidos para potencial taxa de descoberta falsa (FDR) usando o software SPSS e MATLAB. Análise quimiométrica para construir modelos diagnósticos, de classificação e preditiva será realizada usando scripts MATLAB personalizados e caixa de ferramentas PLS para PCA, projeção para análise latente da estrutura-discriminante (PLS-DA), análise hierárquica de cluster (HCA) e abordagens semelhantes em dados espectrais para classificar baseados em base em clínicos e intervenções clínicas (intervenção (HCA) e abordagens semelhantes em dados espectrais para classificar com base em clínicas e intervenções clínicas (intervenção (HCA) e dados semelhantes em dados espectrais para classificar com base em clínicas e intervenções clínicas (intervenção (HCA) e dados semelhantes em dados espectrais para classificar com base em clínicas e intervenções clínicas. As redes metabólicas serão construídas usando citoscape e a enciclopédia de Kyoto de genes e genomas (KEGG) para genômica, integrando resultados metabolômicos e outros resultados moleculares do projeto. Finalmente, todos os resultados serão avaliados através da validação cruzada, e o poder discriminatório/preditivo dos diferentes metabólitos e pontuações será analisado usando curvas de característica operacional (ROC) do receptor.

D.5) Estudo da purificação do ácido nucleico da microbiota, a amplificação do gene 16S rRNA e o sequenciamento primeiro, as amostras de fezes serão trituradas, homogeneizadas e lisadas usando um sistema FastPrep (MP Biomedicals). O DNA total será extraído seguindo o protocolo Magna Pure LC automatizado (Roche, Manheim, Alemanha) de acordo com as instruções do fabricante. As bibliotecas metagenômicas serão obtidas usando o kit NexTera XT após o protocolo da Illumina. As regiões V3-V4 do rRNA 16S serão amplificadas e as bibliotecas serão purificadas após o protocolo da Illumina.

O sequenciamento MiSEQ será realizado usando o kit V3 (2x300 ciclos), gerando leituras de 300 pb por cada 65 horas, começando de cada extremidade do amplicon. O seqüenciamento ultra-profundo será realizado usando um seqüenciador Illumina no Fisabio-Salud Pubblica Center.

A análise filogenética do rRNA 16S será realizada usando o software Qiime. A atribuição funcional de leituras metagenômicas será realizada usando pipelines de bioinformática dedicada desenvolvidos no Fisabio (integrando metodologias de ponta no campo com scripts personalizáveis).

Análises da comunidade microbiana (biodiversidade, clustering, mapas de calor) e análise estatística serão realizadas usando o software R. Para análise de descoberta de biomarcadores, a plataforma Lefse será usada.

D.6) Análise de expressão gênica Avaliaremos alterações nos níveis de expressão gênica usando a tecnologia NanoString® para NCounter®, que nos permitirá identificar moléculas mensageiras que são alteradas entre pacientes obesos com/sem distúrbios psicológicos. Este sistema permite a hibridação de cada molécula alvo com uma sonda fluorescente para identificação individual sem retrotranscrição ou amplificação, usando quantidades mínimas de amostra. O RNA total será extraído dos PBMCs usando o kit total do geneall® ribospintm e apenas de 100-200 ng de RNA total, o painel de metabolismo multiplex avaliará 768 genes, focados nas vias inflamatórias e metabólicas. Os resultados serão analisados ​​usando a ferramenta nsolver. Essas experiências serão subcontratadas para o diagnóstico Longwood, S.L.

d.7) Estudo in vitro do mecanismo de ação do digestado colônico em modelos celulares complexos, simulando o eixo do cérebro intestinal, o uso e o design de um modelo de órgão em chip (OOC) é proposto, com células intestinais em contato com o sinicioteio, especificada (a partir de fecas do paciente) e as células neuroblastoma do sinicioteio, especificamente projetadas (especificamente projetadas (a partir do paciente), e o neuroblastoma em contato com o material de absorção, especificamente projetado (a partir do paciente) e o neuroblastoma do material de absorção, o material de absorção. Para análise de biomarcadores, serão observadas alterações no nível intestinal em citocinas inflamatórias e alterações no receptor de células neuronais, o que mais tarde pode estar relacionado aos resultados in vivo. O projeto incluirá a obtenção de réplicas de amostra de controle suficientes, com digestado colônico após a estabilização e com digestão colônico após o tratamento com placebo ou sinbiótico.