Terapeutický potenciál synbiotiky ke zlepšení duševního zdraví u subjektů s obezitou.

Obezita je jednou z nejrozšířenějších chronických onemocnění po celém světě, která je výsledkem komplexní interakce mezi stravovacími návyky a environmentálními a genetickými faktory. Podle statistik Světové zdravotnické organizace má více než 1,9 miliardy dospělých s nadváhou a přibližně 650 milionů lidí trpí obezitou. Kromě toho jsou tito jedinci vystaveni vyššímu riziku rozvoje četných metabolických poruch, jako je diabetes 2. typu, ateroskleróza, kardiovaskulární onemocnění, nealkoholická mastná onemocnění jater, reprodukční problémy a některé formy rakoviny. Životní styl a farmakologické intervence jsou dvě z nejdůležitějších strategií pro léčbu obezity. Přísné změny životního stylu jsou však často akceptovány pouze omezeným počtem jedinců a léky proti obizitě mohou mít určité nepříznivé účinky, zatímco jejich účinnost je po dlouhodobém použití často snížena. Proto je významnou neuspokojenou potřebou nedostatek pohodlných a účinných doplňkových terapií pro léčbu obezity.

Existuje obousměrová souvislost mezi obezitou a poruchami nálady, jako je deprese a úzkost. Obezita má také negativní dopad na zdraví a kvalitu života, jakož i na sebeúctu. Konkrétně se odhaduje, že přibližně 50% jedinců s obezitou se vyvíjí depresivní a úzkostné rysy, které jsou u žen častější a častěji se zvyšuje stupeň obezity. Kromě toho lidé s obezitou často trpí značným emocionálním zátěží, zvyšují stres, každodenní obavy a dokonce mají potíže s prováděním činností každodenního života. Přidáno ke stigmatu nemoci, která má negativní dopad na sebeúctu a obraz těla, to zhoršuje kvalitu života a emocionální stav těchto jednotlivců. Proto je duševní zdraví úzce propojeno s obezitou a řešení fyzických i emocionálních aspektů je zásadní pro podporu celkové pohody. Je důležité přijmout holistický přístup, který zahrnuje zásahy do stravy, fyzického cvičení a emoční a psychologické podpory pro ty, kteří se snaží udržet zdravou váhu a přiměřené duševní zdraví.

Osa střev-mozkové je obousměrová komunikační síť mezi střevem a centrálním nervovým systémem, která funguje prostřednictvím neuroimunitních a neuroendokrinních procesů. Jeho zapojení do nástupu deprese bylo postulováno a je zprostředkováno molekulami, jako jsou mastné kyseliny s krátkým řetězcem, kyselina gama-aminobutylová (GABA) a metabolity tryptofanu pocházející ze střevní mikrobioty. V situacích dysbiózy nebo změn v homeostáze mikrobioty lze cesty střevního mozku najít deregulované a jsou spojeny s neuroinflammací a změnou propustností krve-křemene. Kromě toho mohou změny ve střevní mikrobiotě přispívat do depresivního stavu přímým ovlivněním uvolňování neurotransmiterů, jako je serotonin a dopamin, ovlivňující stresovou reakci a hypothalamicko-hyposurita-adrenal (HPA), což je mozkové neurotrofické faktory (BDNF) a spouštěcí kytinou (HPA), a vyvolávají se a spuštěné kytiny. Například deprese je spojena se zvýšeným uvolňováním C v C-reaktivním proteinu (CRP) a cytokinech, jako jsou IL-1, IL-2, IL-6, IFN-Y a IL-1ß.

Obezita také způsobuje zánět na úrovni střeva, inzulínovou rezistenci a usazeniny tělesného tuku. Výzkum v této oblasti naznačuje, že existuje obousměrný vztah mezi složením střevní mikrobioty, obezity a rezistence na inzulín. Bylo pozorováno, že lidé s obezitou mají odlišné mikrobiální složení ve srovnání s lidmi se zdravou hmotností. Předpokládá se, že tato změna ve střevní mikrobiotě by mohla dále přispívat k progresi obezity zvýšením schopnosti extrahovat energii z potravy, podporovat zánět nízkého stupně, zvýšení lipogeneze, snižování oxidace mastných kyselin a zvýšením akumulace triglyceridů na jaterní úrovni, mezi jinými mechanismy.

S ohledem na roli střevní mikrobioty při regulaci imunitního systému a zánětu pozorujeme, že chronický zánět je spojen s obezitou a psychologickými poruchami, včetně deprese a úzkosti. Tyto změny ve střevní mikrobiotě mohou přispět k systémovému zánětu a imunitní dysfunkci, což by zase mohlo ovlivnit jak obezitu, tak psychologické poruchy. Některé střevní bakterie mají schopnost produkovat neurotransmitery, které jsou absorbovatelné na střevní úrovni, jako je serotonin nebo GABA, které jsou důležité pro regulaci nálady a úzkosti. Předpokládá se, že změny ve složení střevní mikrobioty by mohly ovlivnit produkci těchto neurotransmiterů, a proto ovlivnit duševní zdraví.

Přestože úpravy životního stylu, jako je kalorické omezení a fyzické cvičení, jsou považovány za nejlepší terapie pro hubnutí, existují i ​​jiné doplňkové možnosti, jako je modulace střevní mikrobioty, které by mohly být užitečné pro lidi s obezitou. Studie, ve kterých byla podávána prebiotika, probiotika a synbiotika jednotlivcům s obezitou, prokázaly své příznivé účinky na snižování hmotnosti a další metabolické parametry prostřednictvím modulace střevní mikrobioty. Vzhledem k nově vznikajícím důkazům implikujícím osu střevního mozku v obezitě a jejím vztahu k psychologickým poruchám se zvýšil zájem o rozvoj těchto léčby jako terapií pro obnovení střevní mikrobioty.

Prebiotika jsou funkční potraviny, vzhledem k jejich prospěšné roli při podpoře zdraví a prevenci onemocnění. Příkladem jsou taniny, které jsou považovány za bioaktivní sloučeniny kvůli jejich schopnosti modulovat metabolické procesy a podporovat zdraví. Většina požitých taninů dosáhne tlustého střeva, kde je střevní mikrobiota přeměňuje na metabolity, včetně mastných kyselin s krátkým řetězcem, jako je acetát, propionát a butyrát. Tyto mastné kyseliny s krátkým řetězcem jsou důležité metabolity, které mohou mít různé příznivé účinky na střevní a celkové zdraví hostitele. Vyvíjejí také potenciální antidiabetický účinek prostřednictvím následujících mechanismů: (i) zlepšení hladin inzulínu a proinzulinu v krvi: afinita taninů pro vazbu na polysacharidy způsobuje zpoždění a snížení dostupnosti glukózy v gastrointestinálním traktu. Několik studií navíc uvádělo potenciál inhibice aktivity a-amylázy a a-glukosidázy prostřednictvím hydrolyzovatelných taninů a kondenzovaných taninů. (ii) Inzulínový účinek na tkáně citlivé na inzulín: procyanidiny mohou působit na specifické složky intracelulární signální dráhy inzulínu. (iii) Regulace antioxidačního prostředí pankreatických buněk: Předpokládá se, že oxidační stres hraje roli v inzulínové rezistenci, protože určuje apoptózu pankreatických buněk. Exprese genů souvisejících s antioxidačními enzymy v pankreatu je navíc nízká. Vysoká antioxidační kapacita taninů může působit proti patogenezi rezistence na inzulín, spolu s jejich protizánětlivými vlastnostmi (snižují hladiny TNFa, IL-1, IL-6 atd.) A kardioprotektivní vlastnosti (zvyšují superoxid despitazu, atd.).

Konkrétně se taniny s vysokou molekulovou hmotností dosahují střevní mikrobioty v tlustém střevě vykazující prebiotický účinek. V tomto případě jsou sloučeniny metabolizovány mikroorganismy a vytvářejí metabolity s různou biologickou dostupností, aktivitou nebo funkčním účinku ve srovnání s původní molekulou. Nakonec mohou třísloviny modulovat složení a funkci střevní mikrobioty, selektivně inhibují patogeny a podporují růst prospěšných bakterií.

Probiotika jsou přípravy mikroorganismů, které při podávání za vhodných podmínek a množství zlepšují mikrobiální rovnováhu střeva. Bylo prokázáno, že tyto mikroorganismy potlačují zánět a modulují imunitní systém tím, že zabraňují indukci cytokinu IL-8 v lidském epitelu tlustého střeva a také snižují propustnost střeva, inhibující endotoxemii. Probiotické intervence mohou přispět k léčbě obezity a souvisejících komplikací zlepšením hojnosti a funkce střevní mikrobioty. Proto kombinace prebiotických a probiotických intervencí (synbiotika) může poskytnout synergickou a účinnou terapii pro metabolické poruchy. Kromě toho byla zdokumentována pozitivní role synbiotického suplementace u duševních chorob, jako je velká depresivní porucha. V tomto případě by synbiotika mohla zlepšit příznaky deprese zvýšením metabolismu tryptofanu a snížením koncentrací metabolitu dopaminu v amygdaloidní kůře.

Bylo navrženo, že synbiotika by mohla pomoci zlepšit typ a funkčnost mikrobioty, snížit zánět střeva a podporovat sytost zvýšenou produkcí hormonů, které mají tento účinek na tělo. Proto by to mohlo být prospěšné při řízení obezity. Synbiotika může hrát klíčovou roli při modulaci metabolismu makronutrientů produkcí mastných kyselin s krátkým řetězcem, které se vážou na receptory spojené s G-proteinem a zvyšují sekreci glukagonu podobného peptidu 1 (GLP-1) a peptidu YY (pyy) z enterendokrinních L buněk. Tato vazby mohou vyvolat produkci inzulínu pomocí pankreatických β-buněk, inhibovat sekreci glukagonu, snížit jaterní glukoneogenezi a zvýšit citlivost na inzulín. Synbiotika také zlepšují funkce střeva, zvyšují produkci mucinu a snižují počet patogenních gramnegativních bakterií v tlustém střevě. Tyto změny snižují přenos lipopolysacharidů (LPS) přes slizniční stěnu a metabolickou endotoxemii, což může nakonec vést ke zlepšení funkce inzulínu a nižší hladiny inzulínu. Předchozí studie ukázaly, že jejich podávání je mimo jiné prospěšná jak pro obezitu, tak pro typické psychologické příznaky deprese nebo úzkosti. 6týdenní zásah se synbiotikou může významně snížit příznaky deprese ve srovnání s placebem. V této oblasti metaanalýza z roku 2017 naznačila, že probiotika mohou snížit psychologické příznaky, včetně úzkosti, deprese a vnímaného stresu u zdravých dospělých dobrovolníků. Střevní mikrobiota může přímo produkovat neurotransmitery, jako je serotonin a ovlivnit jeho produkci. Má také imunomodulační funkce a je schopna aktivovat hypothalamicko-hypofýza produkcí prozánětlivých cytokinů IL-1 a IL-6.

V této souvislosti by zásah se synbiotikem složeným z taninů a prospěšných střevních kmenů u jedinců s obezitou mohl mít příznivé účinky na zdraví zvýšením antioxidační kapacity a produkcí mastných kyselin v krátkém řetězci, modulací produkce neurotransmiterů zapojených do symbolu a nálady a podporou vylepšené insterenátu.

Kombinace synbiotických intervencí by proto mohla poskytnout synergickou a účinnou terapii pro metabolické i psychologické poruchy. Assortující obezita, včetně lékařského ošetření, psychologické podpory duševního zdraví a synbiotického ošetření, by mohlo zlepšit emoční stav, obezitu a psychologické poruchy. Nakonec by to mohlo zvýšit kvalitu života postižených jednotlivců. Zatímco výzkum v této oblasti stále probíhá a je zapotřebí více důkazů k plnému porozumění těmto interakcím, roste důkazy, které naznačují, že zdraví střevních mikrobiot může ovlivnit fyzické i duševní zdraví složitým a významným způsobem. Propagace zdravé střevní mikrobioty prostřednictvím vyvážené stravy, příjem potravin bohatých na vlákna a probiotika, jakož i snižování stresu, může být prospěšná pro řešení obezity i psychologických poruch, dokonce i synergicky s jinými léčbami.

Therefore, our goal is to determine whether the intake of a synbiotic composed of lactic acid bacteria, bifidobacteria, and tannin-based phytocomplexes is capable of improving anxious and depressive symptoms, glycemic profile, and insulin resistance in patients with obesity, depending on the presence or absence of psychological disorders, through the improvement of the inflammatory profile, appetite control, Produkce neurotransmiteru a diferenciální změna střevní mikrobioty.

U pacientů s obezitou, kteří představují depresivní a/nebo úzkostné poruchy, je navržena klinická basická, prospektivní, randomizovaná, dvojitě slepá, placebem kontrolovaná intervenční studie.

K dosažení navrhovaných cílů bude zahrnuto 120 pacientů s obezitou, kteří představují depresivní a/nebo úzkostné poruchy (n = 60) a pacientů bez poruch (n = 60). Diagnostická kritéria pro depresi a úzkost bude kritéma zavedená v DSM-5. Kromě toho bude každá skupina náhodně rozdělena do 2 podskupin, z nichž jedna obdrží synbiotikum a druhá obdrží odpovídající placebo (n = 30 na skupinu) po dobu 12 týdnů. Proces randomizace bude prováděn pomocí softwarového programu pro náhodné přiřazení. Pacienti budou do studie přihlášeni postupně, když se účastní jednotky obezity v konzultacích s endokrinologií a výživou v nemocnici Dr. Peset a splní následující kritéria:

• Kritéria pro zařazení: Pacienti s BMI 30-40 kg/m², ve věku 18 až 65 let, se známou dobou trvání onemocnění více než pět let. Kromě toho si všichni pacienti během 3 měsíců před studií udržují stabilní hmotnost (<5% fluktuace).
• Kritéria pro vyloučení: Pacienti, kteří užívali antibiotika 3 měsíce před zahájením studie, a také předchozí použití doplňků obsahujících probiotika a/nebo prebiotika. Rovněž pacienti s diagnózou střevních onemocnění a ti, kteří podstoupili předchozí gastrointestinální chirurgii. Vyloučeny budou sekundární příčiny obezity, diabetes typu 1, těhotenství nebo laktace, aktivní neoplastické onemocnění a osoby se zavedeným selháním jater nebo ledvin. Konečně, pacienti s jinými diagnostikovanými psychiatrickými poruchami odlišnými od úzkosti a/nebo deprese a ti, kteří podstoupí léčbu antidepresivami před začátkem studie, budou také vyloučeni.

Před zahájením studie budou pacienti nebo jejich právní zástupce podepsat formulář informovaného souhlasu poté, co bude vysvětlen cíl studie a vyřeší možné pochybnosti. Tato studie dodržuje etické pokyny stanovené pro experimenty s lidmi v Helsinkách a její následné aktualizace; Bude mít také souhlas z etické komise nemocnice. Lékařské informace a všechny údaje shromážděné během studie budou důvěrné v souladu s organickým zákonem 15/1999 o ochraně osobních údajů a odpovídající Royal Dekret 1720/07.

Na začátku studie provede dietolog-výživu individualizované nutriční hodnocení, aby se vypočítal výdaje na klidovou energii, a vytvoří se personalizovaná hypocalorická strava, čímž se sníží 500 kcal z celkového denního denního energetického výdají Monitorování stravy pomůže zabránit zkreslení a posílit dodržování stravy spolu s monitorováním vedlejších účinků. Skupina léčby obdrží kapsli se synbiotickou formulací a kontrolní skupina obdrží placebo kapsle (maltodextrin) a obě skupiny budou instruovány, aby ji trvala denně po dobu 12 týdnů. Synbiotika bude sestávat z probiotické části složené z Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei a Bifidobacterium lactis (každý 2 × 10⁹ CFU/g) a prebiotické části složené z fytokomplexů založených na třídanech (350 mg) extrahovaných z různých zdrojů. Placebo bude vypadat stejně jako synbiotická kapsle. K udržení oslepení pro zaměstnance, kteří se účastní soudního řízení, budou přípravou studijních produktů a plnění kontejnerů prováděny společnostmi Silvateam a Sacco, které budou fungovat za neosvětaných podmínek.

Na začátku intervence bude proveden strukturovaný psychologický rozhovor, který shromáždí informace o současném stavu pacienta; Historie a vývoj nemoci (obezita a psychologická porucha), vzorce stravování, kvalita spánku, související psychologické komorbidity, rodinné a sociální oblasti, motivace ke změně a očekávání. Hodnotí se dopad obezity na kvalitu života pacienta (emocionální, sociální a osobní). Psychologické sledování se bude konat ve 4, 6 a 12 týdnech studie. Během intervencí budou hodnoceny motivační stav, stravovací návyky, životní styl, sebekontrola, kognitivně-behaviorální změna a prevence relapsu.

Na začátku studie a po dietním zásahu budou shromažďovány vzorky krve nalačno (12 hodin), sliny, moč (24 hodin) a vzorky stolice. Budou stanoveny následující parametry:

1. Budou měřeny antropometrické parametry a hmotnost a výška složení těla a BMI se vypočítá (hmotnost / (výška) ²). Rovněž se stanoví obvod pasu a kyčle, stejně jako krevní tlak. Kromě toho bude provedena vektorová analýza využívající bioelektrickou impedanci (Seca MBCA 550®) na začátku i na konci intervence.

   Pacienti dokončí třídenní dietní protokol (včetně 1 víkendového dne) na začátku, 6 týdnů a 12 týdnů, spolu s dotazníkem IPAQ pro sledování fyzické aktivity. Vyplní také dotazník na dodržování a dodržování produktu a pokud po převzetí produktu zažili nějaké nepříznivé účinky.

2. Psychologické hodnocení Nejprve použijeme dotazník depresivní úzkosti a stresové stupnice 21 (DASS-21). Na základě počátečních výsledků bude hodnoceno stres, úzkost a deprese pomocí tří ověřených měřítek: Inventory Beck Depression (BDI-2), vnímané stupnice stresu (PSS), inventáře úzkosti ve stavovém charakteru (STAI) a sebeúctu pomocí dotazníku Rosenberg. Toto vyhodnocení umožní klasifikaci subjektu do obou skupin (obezita s úzkostí a/nebo depresí a/nebo bez deprese) a zkontroluje, zda došlo k významnému zlepšení po skupině synbiotických příjmů.
3. Biochemické parametry budou hodnoceny úplný profil lipidů, určující celkový cholesterol (TC) a triglyceridy (TG) pomocí enzymatických metod, HDL-C (metoda přímého srážení), LDL-C (vypočtená pomocí Friedowaldova vzorce) a VLDL-C (TG/5). Apolipoproteiny B a A-I budou určeny nefelometrií. Vypočítá se ne-HDL cholesterol (TC-HDL) a aterogenní plazmatický index (API = log (TG/HDL)). Glukóza a inzulín nalačno bude měřena pomocí enzymatické metody hexokinázy a chemiluminiscence, respektive chemiluminiscence a index HOMA se vypočítá, aby se vyhodnotila inzulínová rezistence. Funkce jater a ledvin, úplný krevní obraz, koagulace a hormonální profil budou vyhodnoceny pomocí následujících markerů: AST, Alt, GGT, LDH, alkalinová fosfatáza, kreatinin, glomerulární filtrační rychlost, A1C a štítek (TSH, Free T4). Všechny tyto parametry budou stanoveny ve službě klinické analýzy univerzitní nemocnice Dr. Peset.
4. Stanovení biomarkeru d.1) Zánětlivé parametry a antioxidační kapacita Zánětlivý stav bude hodnocen stanovením koncentrací ultrasenzitivního proteinu C-reaktivního C, IL6, TNF, IL1B, adiponektinu, PAI-1 a IL10, pomocí luminex xmap-multiplinární technologie. Podle pokynů výrobce se provede zpracování vzorků a analýza dat. Hladiny LPS v séru budou určeny ELISA. Celková antioxidační kapacita v séru bude stanovena pomocí systému E-BQC (Bioquochem).

D.2) Stanovení hladin peptidů a střevních funkcí střevních hormonů (GIP, GLP1, PYY, Ghrelin, Leptin, CCK) bude stanoveno pomocí technologie Luminex X-Map. Pro vyhodnocení propustnosti střeva a mikrobiální translokaci budou měřeny hladiny znulinu, okrudinu, LBP, LBP, FABP2/I-FABP a Reg3a pomocí souprav ELISA. Detekce β-glukanu v plazmě bude provedena pomocí testu limulus amebocytů (LAL).

D.3) Hladiny neurotransmiterové peptidové analýzy kortizolu, dopaminu, serotoninu a oxytocinu v plazmě, 24hodinové moči nebo slinách budou stanoveny pomocí souprav ELISA nebo technologie Luminex X-Map.

D.4) Metabolomická analýza NMR (jaderná magnetická rezonance) bude použita k získání rozsáhlých metabolických profilů z velkých, dobře fenotypovaných kohort pacienta. Zpočátku budou všechny vzorky analyzovány NMR, získáme globální metabolický profil až 40 metabolitů včetně aminokyselin, cukrů, fosfolipidů, zánětlivých markerů, glykoproteinů, lipočástic a některých mikrobiálních ko-metabolitů.

Statistická významnost různých metabolitů bude analyzována pomocí kovariančních testů korigovaných na potenciální rychlost falešného objevu (FDR) pomocí softwaru SPSS a MATLAB. Chemometrická analýza pro konstrukci diagnostických, klasifikačních a prediktivních modelů bude prováděna pomocí vlastních skriptů MATLAB a nástrojů PLS pro PCA, projekci do latentní struktury-discriminační analýzy (PLS-DA), hierarchické shlukové analýzy (HCA) a podobných přístupů na spektrální údaje pro klasifikační skupiny založené na klinických a intervenčních parametrech. Metabolické sítě budou vytvořeny pomocí cytoscape a Kjótské encyklopedie genů a genomů (KEGG) pro genomiku, integrace metabolomických výsledků a dalších molekulárních výsledků projektu. Nakonec budou všechny výsledky vyhodnoceny křížovou validací a diskriminační/prediktivní síla různých metabolitů a skóre bude analyzována pomocí křivek provozních charakteristik přijímače (ROC).

D.5) Studie čištění mikrobioty nukleové kyseliny, amplifikace genu 16S rRNA a nejprve sekvenování vzorků stolice bude triturováno, homogenizováno a lyžováno pomocí systému FastPrep (MP Biomedicals). Celková DNA bude extrahována podle automatizovaného protokolu Magna Pure LC (Roche, Manheim, Německo) podle pokynů výrobce. Metagenomické knihovny budou získány pomocí soupravy Nextera XT po protokolu Illumina. Oblasti V3-V4 z 16S rRNA budou zesíleny a knihovny budou čištěny po protokolu Illumina.

Sekvenování MISEQ bude provedeno pomocí soupravy V3 (2x300 cyklů), které generuje čtení 300 bp za každých 65 hodin, počínaje každým koncem amplikonu. Ultra hluboké sekvenování bude provedeno pomocí sekvenceru Illumina v centru Fisabio-Salud Pública.

Fylogenetická analýza 16S rRNA bude prováděna pomocí softwaru Qiime. Funkční přiřazení metagenomických čtení bude provedeno pomocí vyhrazených bioinformatických potrubí vyvinutých ve Fisabio (integrace metodik špičkové úrovně do pole s přizpůsobitelnými skripty).

Mikrobiální komunitní analýzy (biologická rozmanitost, shlukování, tepelné mapy) a statistická analýza budou provedeny pomocí softwaru R. Pro analýzu objevování biomarkerů bude použita platforma LEFSE.

D.6) Analýza genové exprese Vyhodnocujeme změny v úrovních genové exprese pomocí technologie NaNoString® pro NCounter®, což nám umožní identifikovat molekuly posel, které se mění mezi obézními pacienty s/bez psychologických poruch. Tento systém umožňuje hybridizaci každé cílové molekuly fluorescenční sondou pro individuální identifikaci bez retrotranscription nebo amplifikace pomocí minimálních množství vzorku. Celková RNA bude extrahována z PBMC s použitím celkové soupravy Geneall® Ribospintm a z pouhých 100-200 ng celkové RNA bude panel multiplexního metabolismu posoudit 768 genů se zaměřením na zánětlivé a metabolické dráhy. Výsledky budou analyzovány pomocí nástroje Nsolver. Tyto experimenty budou subdodatelní na diagnostiku longwood, s.l.

D.7) In vitro studium mechanismu účinku digestinátu tlustého střeva na komplexních buněčných modelech simulující osu střevního mozku Použití a návrh modelu Organizace na čipu (OOC) je navržen, se střevním buňkou v kontaktu s fermentačním digestováním (z pacientových výkalů) a neuroblastomovým materiálem v kontaktu s absorbovaným materiálem, specificky prostudovány synbioty) buněk v kontaktu s buňkami s fermentací. Pro analýzu biomarkerů budou pozorovány změny na úrovni střeva v zánětlivých cytokinech a změnách receptoru neuronálních buněk, což může později souviset s výsledky in vivo. Konstrukce bude zahrnovat získání dostatečných replikátů kontrolních vzorků, s trávením tlustého střeva po stabilizaci a s trávením tlustého střeva po ošetření placebem nebo synbiotikou.