Terapeutisk potential för en synbiotikum för att förbättra mental hälsa hos personer med fetma.

Fetma är en av de mest utbredda kroniska sjukdomarna globalt, till följd av en komplex interaktion mellan dietvanor och miljö- och genetiska faktorer. Enligt statistiken från Världshälsoorganisationen är mer än 1,9 miljarder vuxna överviktiga och cirka 650 miljoner människor lider av fetma. Dessutom har dessa individer en högre risk att utveckla många metaboliska störningar, såsom typ 2-diabetes, åderförkalkning, hjärt-kärlsjukdomar, alkoholfria fettleversjukdom, reproduktiva problem och vissa former av cancer. Livsstil och farmakologiska ingrepp är två av de viktigaste strategierna för att behandla fetma. Men strikta livsstilsförändringar accepteras ofta bara av ett begränsat antal individer, och anti-fetma läkemedel kan ha vissa negativa effekter, medan deras effektivitet ofta minskas efter långvarig användning. Därför är ett betydande ouppfylldt behov bristen på praktiska och effektiva tilläggsterapier för behandling av fetma.

Det finns en dubbelriktad samband mellan fetma och humörstörningar som depression och ångest. Fetma har också en negativ effekt på hälsan och livskvaliteten samt på självkänsla. Specifikt uppskattas att cirka 50% av individer med fetma utvecklar depressiva och oroliga egenskaper, som är vanligare hos kvinnor och mer frekventa när graden av fetma ökar. Dessutom lider människor med fetma ofta en betydande känslomässig börda, ökande stress, dagliga bekymmer och till och med upplever svårigheter att utföra dagliga livsaktiviteter. Tillsatt till stigmatiseringen av sjukdomen, som har en negativ inverkan på självkänsla och kroppsbild, förvärrar detta livskvaliteten och känslomässiga tillstånd. Därför är mental hälsa nära sammankopplad med fetma, och att hantera både de fysiska och emotionella aspekterna är avgörande för att främja det totala välbefinnandet. Det är viktigt att anta en helhetssyn som inkluderar interventioner i kost, fysisk träning och emotionellt och psykologiskt stöd för dem som kämpar för att upprätthålla en sund vikt och adekvat mental hälsa.

Gut-hjärnaxeln är ett dubbelriktat kommunikationsnätverk mellan tarmen och det centrala nervsystemet som fungerar genom neuroimmuna och neuroendokrina processer. Dess engagemang i början av depression har postulerats och förmedlas av molekyler såsom kortkedjiga fettsyror, gamma-aminobutyric acid (GABA) och tryptofanmetaboliter som härstammar från tarmmikrobiota. I situationer av dysbios eller förändringar i mikrobiota-homeostas kan tarmhjärnvägarna hittas avreglerade och är associerade med neuroinflammation och förändrad blod-hjärnbarriärpermeabilitet. Dessutom kan förändringar i tarmmikrobiota bidra till ett depressivt tillstånd genom att direkt påverka frisättningen av neurotransmittorer såsom serotonin och dopamin, vilket påverkar stressresponsen och hypotalamisk-pituitary-adrenal (HPA) -axeln, som påverkar hjärn-härledd neurotrofisk faktor (BDNF) nivåer och utlösande av infligering av inflytor. Till exempel är depression associerad med en ökad frisättning av C-reaktivt protein (CRP) och cytokiner såsom IL-1, IL-2, IL-6, IFN-Y och IL-1ß.

Fetma orsakar också inflammation på tarmnivå, insulinresistens och kroppsfettavlagringar. Forskning inom detta område antyder att det finns ett dubbelriktat samband mellan sammansättningen av tarmmikrobiota, fetma och insulinresistens. Det har observerats att människor med fetma har en annan mikrobiell sammansättning jämfört med de med en sund vikt. Det tros att denna förändring i tarmmikrobiota ytterligare kan bidra till utvecklingen av fetma genom att öka förmågan att extrahera energi från mat, främja lågkvalitetsinflammation, öka lipogenesen, minska fettsyraoxidation och öka triglyceridansamlingen på hepatisk nivå, bland annat mekanismer.

Med tanke på tarmmikrobiota roll för att reglera immunsystemet och inflammation, observerar vi att kronisk inflammation är kopplad till både fetma och psykologiska störningar, inklusive depression och ångest. Dessa förändringar i tarmmikrobiota kan bidra till systemisk inflammation och immundysfunktion, vilket i sin tur kan påverka både fetma och psykologiska störningar. Vissa tarmbakterier har förmågan att producera neurotransmittorer som är absorberbara på tarmnivån, såsom serotonin eller GABA, som är viktiga för att reglera humör och ångest. Det antas att förändringar i sammansättningen av tarmmikrobiota kan påverka produktionen av dessa neurotransmittorer och därför påverkar mental hälsa.

Även om livsstilsmodifieringar, såsom kaloribegränsning och fysisk träning, anses vara de bästa terapierna för viktminskning, finns det andra tilläggsalternativ, såsom modulering av tarmmikrobiota, som kan vara användbara för människor med fetma. Studier där prebiotika, probiotika och synbiotika administrerades till individer med fetma har visat sina positiva effekter på viktminskning och andra metaboliska parametrar genom modulering av tarmmikrobiota. På grund av de nya bevisen som påverkar tarmhjärnan i fetma och dess relation till psykologiska störningar har det ökat intresset för utvecklingen av dessa behandlingar som terapier för att återställa tarmmikrobiota.

Prebiotics är funktionella livsmedel, med tanke på deras gynnsamma roll för att främja hälsa och förebygga sjukdomar. Ett exempel är tanniner, som betraktas som bioaktiva föreningar på grund av deras förmåga att modulera metaboliska processer och främja hälsa. Mycket av de intagna tanninerna når tjocktarmen, där tarmmikrobiota omvandlar dem till metaboliter, inklusive kortkedjiga fettsyror såsom acetat, propionat och butyrat. Dessa kortkedjiga fettsyror är viktiga metaboliter som kan ha olika positiva effekter på värdens tarm och allmänna hälsa. De utövar också en potentiell antidiabetisk effekt genom följande mekanismer: (i) Förbättring av insulin- och proinsulinnivåer i blodet: affiniteten hos tanniner för bindning till polysackarider orsakar en försening och en minskning av tillgängligheten av glukos i gastrointestinala kanalen. Dessutom har flera studier rapporterat potentialen för att hämma aktiviteterna för a-amylas och a-glukosidas genom hydrolyserbara tanniner respektive kondenserade tanniner. (ii) Insulinliknande effekt på insulinkänsliga vävnader: procyanidiner kan verka på specifika komponenter i den intracellulära insulinsignalvägen. (iii) Reglering av antioxidantmiljön hos bukspottkörtelceller: oxidativ stress tros spela en roll i insulinresistens eftersom den bestämmer bukspottkörtelcellapoptos. Dessutom är uttrycket av gener relaterade till antioxidantenzymer i bukspottkörteln lågt. Den höga antioxidantkapaciteten hos tanniner kan motverka patogenesen av insulinresistens, tillsammans med deras antiinflammatoriska egenskaper (de minskar TNFa, IL-1, IL-6-nivåer, etc.) och hjärtskyddande egenskaper (de ökar superoxiddismutas, minskar ROS, etc.).

Specifikt når tanniner med hög molekylvikt tarmmikrobiota i kolon som visar en prebiotisk effekt. I detta fall metaboliseras föreningarna av mikroorganismer, vilket producerar metaboliter med olika biotillgänglighet, aktivitet eller funktionell effekt jämfört med den ursprungliga molekylen. Slutligen kan tanniner modulera sammansättningen och funktionen hos tarmmikrobiota, selektivt hämma patogener och främja tillväxten av gynnsamma bakterier.

Probiotika är beredningar av mikroorganismer som, när de administreras under lämpliga förhållanden och mängder, förbättrar den mikrobiella balansen i tarmen. Dessa mikroorganismer har visat sig undertrycka inflammation och modulera immunsystemet genom att förhindra induktion av IL-8-cytokinet i det humana kolonepitelet, samt minska tarmpermeabiliteten, hämma endotoxemi. Probiotiska ingrepp kan bidra till behandling av fetma och tillhörande komplikationer genom att förbättra överflödet och funktionen hos tarmmikrobiota. Därför kan kombinationen av prebiotiska och probiotiska ingrepp (synbiotika) ge en synergistisk och effektiv terapi för metaboliska störningar. Dessutom har den positiva rollen för synbiotisk tillskott i psykiska sjukdomar såsom större depressiv störning dokumenterats. I detta fall kan synbiotika förbättra depressionsymtom genom att förbättra tryptofanmetabolismen och minska dopaminmetabolitkoncentrationerna i amygdaloidbarken.

Det har föreslagits att synbiotika kan bidra till att förbättra typen och funktionaliteten för mikrobiota, minska tarminflammation och främja mättnad genom ökad produktion av hormoner som har denna effekt på kroppen. Därför kan detta vara fördelaktigt för att hantera fetma. Synbiotika kan spela en avgörande roll för att modulera metabolism för makronäringsämne genom att producera kortkedjiga fettsyror, som binder till G-protein-kopplade receptorer och ökar utsöndringen av glukagonliknande peptid 1 (GLP-1) och peptid YY (PY) från enteroendokrin L-celler. Dessa bindningar kan utlösa insulinproduktion genom pankreas-p-celler, hämma glukagonutsöndring, minska glukoneogenesen i lever och öka insulinkänsligheten. Synbiotika förbättrar också tarmfunktionen, höjer mucinproduktionen och minskar antalet patogena gramnegativa bakterier i kolon. Dessa förändringar minskar överföringen av lipopolysackarider (LPS) över slemhinneväggen och metabolisk endotoxemi, vilket i slutändan kan leda till förbättringar i insulinreceptorfunktion och lägre insulinnivåer. Tidigare studier har visat att deras administration är fördelaktigt för både fetma och typiska psykologiska symtom på depression eller ångest, bland andra. En 6-veckors intervention med synbiotika kan avsevärt minska depressionsymtomen jämfört med ett placebo. På detta område antydde en metaanalys 2017 att probiotika kan minska psykologiska symtom, inklusive ångest, depression och upplevd stress hos friska vuxna frivilliga. Gutmikrobiota kan direkt producera neurotransmittorer som serotonin och påverka dess produktion. Den har också immunmodulerande funktioner och kan aktivera hypotalamisk-hypofysen genom produktion av proinflammatoriska cytokiner IL-1 och IL-6.

I detta sammanhang kan en intervention med en synbiotisk sammansatt av tanniner och gynnsamma tarmstammar hos individer med fetma ha gynnsamma effekter på hälsa genom att öka antioxidantkapaciteten och korta kedjan fettsyraproduktion, modulera produktion av neurotransmittorer som är involverade i mättnad och humör och främja tarmmikrobiota balans, mukosalskydd och improviserad avsikt.

Därför kan kombination av synbiotiska ingrepp ge en synergistisk och effektiv terapi för både metaboliska och psykologiska störningar. Att ta itu med fetma omfattande, inklusive både medicinsk behandling, psykologiskt stöd för mental hälsa och synbiotisk behandling, kan förbättra känslomässigt tillstånd, fetma och psykologiska störningar. I slutändan kan det förbättra livskvaliteten för drabbade individer. Även om forskning på detta område fortfarande pågår och mer bevis behövs för att fullt ut förstå dessa interaktioner, finns det växande bevis som tyder på att tarmmikrobiota hälsa kan påverka både fysisk och mental hälsa på komplexa och betydande sätt. Att främja en frisk tarmmikrobiota genom en balanserad diet, intag av fiberrika livsmedel och probiotika, såväl som stressminskning, kan vara fördelaktigt för att hantera både fetma och psykologiska störningar, till och med synergistiskt med andra behandlingar.

Therefore, our goal is to determine whether the intake of a synbiotic composed of lactic acid bacteria, bifidobacteria, and tannin-based phytocomplexes is capable of improving anxious and depressive symptoms, glycemic profile, and insulin resistance in patients with obesity, depending on the presence or absence of psychological disorders, through the improvement of the inflammatory profile, appetite control, Neurotransmitterproduktion och den differentiella förändringen av tarmmikrobiota.

En klinisk basisk, prospektiv, randomiserad, dubbelblind, placebokontrollerad interventionsstudie föreslås för patienter med fetma som presenterar depressiva och/eller ångeststörningar.

För att uppnå de föreslagna målen kommer 120 patienter med fetma som presenterar depressiva och/eller ångeststörningar (n = 60), och de utan störningar (n = 60) att inkluderas. De diagnostiska kriterierna för depression och ångest kommer att vara de som är etablerade i DSM-5. Vidare kommer varje grupp att slumpmässigt delas upp i två undergrupper, varav en kommer att få synbiotiken och den andra kommer att få motsvarande placebo (n = 30 per grupp) i 12 veckor. Randomiseringsprocessen kommer att genomföras med hjälp av ett program för slumpmässig tilldelning. Patienter kommer att registreras i följd i studien när de deltar i fetmaenheten i endokrinologin och näringskonsultationer på Dr. Peset Hospital och uppfyller följande kriterier:

• Inkluderingskriterier: Patienter med en BMI på 30-40 kg/m², mellan 18 och 65 år, med en känd sjukdomens varaktighet på mer än fem år. Dessutom kommer alla patienter att upprätthålla en stabil vikt (<5% fluktuation) under de tre månaderna före studien.
• Uteslutningskriterier: Patienter som har tagit antibiotika 3 månader före studiens inledande, liksom tidigare användning av kosttillskott som innehåller probiotika och/eller prebiotika. Patienter som diagnostiserats med tarmsjukdomar och de som har genomgått tidigare gastrointestinal kirurgi. Sekundära orsaker till fetma, typ 1 -diabetes, graviditet eller amning, aktiv neoplastisk sjukdom och de med etablerad lever eller njursvikt kommer att uteslutas. Slutligen kommer patienter med andra diagnostiserade psykiatriska störningar som skiljer sig från ångest och/eller depression, och de som genomgår behandling med antidepressiva medel före studiens början utesluts också.

Innan studien startade kommer patienterna eller deras juridiska representant att underteckna ett informerat samtyckesformulär efter att ha förklarats studiens mål och lösa eventuella tvivel. Denna studie följer de etiska riktlinjer som fastställts för mänsklig experiment i Helsingfors och dess efterföljande uppdateringar; Det kommer också att ha godkännande från sjukhusets etiska kommitté. Den medicinska informationen och alla uppgifter som samlats in under studien kommer att hållas konfidentiell i enlighet med den organiska lagen 15/1999 om personuppgiftsskydd och motsvarande kungliga dekret 1720/07.

I början av studien kommer dietistnutionisten att genomföra en individualiserad näringsutvärdering för att beräkna de vilande energiförbrukningen, och personliga hypokaloriska dieter kommer att skapas, vilket minskar 500 kcal från varje individs totala dagliga energiutgifter, samtidigt som det rekommenderade det rekommenderade intaget av varje macronutrient (50-55% carbohydrater, 30-3%, och 15%. Kostövervakning hjälper till att undvika förspänning och förstärka efterlevnaden av kosten, tillsammans med övervakning av biverkningar. Behandlingsgruppen kommer att få en kapsel med en synbiotisk formulering, och kontrollgruppen kommer att få en placebokapsel (maltodextrin), och båda grupperna kommer att instrueras att ta den dagligen i 12 veckor. Synbiotiken kommer att bestå av en probiotisk del som består av Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei och Bifidobacterium lactis (2 × 10⁹ CFU/g vardera) och en prebiotisk del sammansatt av fytocomplex baserade på tanniner (350 mg) extraktade från olika källor. Placebo kommer att se identisk ut med den synbiotiska kapseln. För att upprätthålla förblindande för den personal som deltar i rättegången kommer utarbetandet av studieprodukterna och fyllningen av containrarna att göras av företagen Silvateam och Sacco, som kommer att fungera under oblindade förhållanden.

I början av interventionen kommer en strukturerad psykologisk intervju att genomföras för att samla information om patientens nuvarande tillstånd; Historia och utveckling av sjukdomen (fetma och psykologisk störning), ätmönster, sömnkvalitet, tillhörande psykologiska komorbiditeter, familj och sociala områden, motivation för förändring och förväntningar. Effekterna av fetma på patientens livskvalitet (emotionell, social och personlig) kommer att utvärderas. Psykologisk uppföljning kommer att äga rum vid 4, 6 och 12 veckor av studien. Under interventionerna kommer motivationsstatus, matvanor, livsstil, självkontroll, kognitiv beteendeförändring och förebyggande av återfall att bedömas.

I början av studien och efter dietinterventionen kommer fasta blodprover (12 timmar), saliv, urin (24 timmar) och avföringsprover att samlas in. Följande parametrar kommer att bestämmas:

1. Antropometriska parametrar och kroppssammansättning Vikt och höjd mäts och BMI beräknas (vikt / (höjd) ²). Midja och höftomkrets, såväl som blodtrycket, kommer också att bestämmas. Dessutom kommer en vektoranalys med bioelektrisk impedans (Seca MBCA 550®) att utföras både i början och i slutet av interventionen.

   Patienterna kommer att fylla i en 3-dagars dietlogg (inklusive 1 helgdag) i början, 6 veckor och 12 veckor, tillsammans med IPAQ-frågeformuläret för att övervaka fysisk aktivitet. De kommer också att fylla i ett frågeformulär om produktanslutning och efterlevnad, och om de har upplevt några negativa effekter efter att ha tagit produkten.

2. Psykologisk utvärdering Först kommer vi att tillämpa depression ångest och stressskala 21 (DASS-21) frågeformulär. Baserat på de initiala resultaten kommer stress, ångest och depression att utvärderas med hjälp av tre validerade skalor: Beck Depression Inventory (BDI-2), den upplevda stressskalan (PSS), State-Trait Axiety Inventory (STAI) och självkänsla med Rosenberg-frågeformuläret. Denna utvärdering gör det möjligt för ämnets klassificering i båda grupperna (fetma med och utan ångest och/eller depression) och kontrollera om det finns en betydande förbättring efter synbiotiska intaggruppen.
3. Biokemiska parametrar En komplett lipidprofil kommer att bedömas, vilket bestämmer totalt kolesterol (TC) och triglycerider (TG) med användning av enzymatiska metoder, HDL-C (direkt nederbördsmetod), LDL-C (beräknad med Friedewald's-formel) och VLDL-C (TG/5). Apolipoproteiner B och A-I kommer att bestämmas med nephelometri. Icke-HDL-kolesterol (TC-HDL) och det aterogena plasmaindexet (API = log (TG/HDL)) kommer att beräknas. Fastande blodsocker och insulin kommer att mätas med användning av den hexokinas enzymatiska metoden respektive kemiluminescens, och HOMA -indexet kommer att beräknas för att bedöma insulinresistens. Lever- och njurfunktion, komplett blodantal, koagulation och hormonprofil kommer att utvärderas med hjälp av följande markörer: AST, ALT, GGT, LDH, alkaliskt fosfatas, kreatinin, glomerulär filtreringshastighet, A1C och sköldkörtelfunktion (TSH, fritt T4). Alla dessa parametrar kommer att bestämmas i den kliniska analystjänsten vid Dr. Peset University Hospital.
4. Biomarkörsbestämning D.1) Inflammatoriska parametrar och antioxidantkapacitet Det inflammatoriska tillståndet kommer att bedömas genom att bestämma koncentrationerna av ultraljudskänsligt C-reaktivt protein, IL6, TNF, IL1B, adiponectin, PAI-1 och IL10, med användning av Luminex XmaP-Multiplex-teknik. Provbehandling och dataanalys kommer att utföras efter tillverkarens instruktioner. Serumnivåer av LPS kommer att bestämmas av ELISA. Total antioxidantkapacitet i serum kommer att bestämmas med hjälp av E-BQC-systemet (Bioquochem).

D.2) Bestämning av peptider och tarmfunktionsserumnivåer av tarmhormoner (GIP, GLP1, PYY, Ghrelin, Leptin, CCK) kommer att bestämmas med användning av Luminex X-MAP-teknik. För att utvärdera tarmpermeabilitet och mikrobiell translokation kommer plasmanivåer av zonulin, occludin, LBP, FABP2/I-FABP och REG3A att mätas med hjälp av ELISA-satser. Detektering av p-glukan i plasma kommer att utföras med användning av limulus amebocytlysat (LAL) -analys.

D.3) Neurotransmitter peptidanalys kortisol, dopamin, serotonin och oxytocinnivåer i plasma, 24-timmars urin eller saliv kommer att bestämmas med hjälp av ELISA-satser eller Luminex X-MAP-teknik.

D.4) Metabolomisk analys NMR (kärnmagnetisk resonans) kommer att tillämpas för att erhålla omfattande metaboliska profiler från stora, välfenotypade patientkohorter. Ursprungligen kommer alla prover att analyseras genom NMR, vilket erhåller en global metabolisk profil på upp till 40 metaboliter inklusive aminosyror, sockerarter, fosfolipider, inflammationsmarkörer, glykoproteiner, lipopartiklar och vissa mikrobiella sammetaboliter.

Statistisk betydelse av de olika metaboliterna kommer att analyseras med hjälp av kovariansprov korrigerade för potentiell falsk upptäcktsfrekvens (FDR) med användning av SPSS och MATLAB -programvara. Kemometrisk analys för att konstruera diagnostiska, klassificerings- och prediktiva modeller kommer att utföras med hjälp av anpassade MATLAB-skript och PLS-verktygslåda för PCA, projektion till latent strukturdiskriminerande analys (PLS-DA), hierarkisk klusteranalys (HCA) och liknande metoder för spektrala data till klassificeringsgrupper baserade på kliniska och interventionsparameter. Metaboliska nätverk kommer att byggas med Cytoscape och Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) för genomik, integrera metabolomiska resultat och andra molekylära resultat av projektet. Slutligen kommer alla resultat att utvärderas genom korsvalidering, och den diskriminerande/prediktiva kraften hos de olika metaboliterna och poängen kommer att analyseras med hjälp av mottagarens operativa karakteristik (ROC).

D.5) Studie av mikrobiota -nukleinsyranrening, 16S rRNA -genamplifiering och sekvensering först, avföringsproverna kommer att tritureras, homogeniseras och lyseras med hjälp av ett FastPrep -system (MP Biomedicals). Totalt DNA kommer att extraheras efter det automatiserade Magna Pure LC -protokollet (Roche, Manheim, Tyskland) enligt tillverkarens instruktioner. Metagenomiska bibliotek kommer att erhållas med NextEra XT -kit efter Illuminas protokoll. V3-V4-regionerna i 16S rRNA kommer att förstärkas och biblioteken kommer att renas efter Illuminas protokoll.

Miseq-sekvensering kommer att utföras med V3-kit (2x300 cykler), vilket genererar 300-bp-läsningar för varje 65 timmar, med början från varje ände av amplikonet. Ultra-djup sekvensering kommer att utföras med en Illumina-sekvenser vid Fisabio-Salud Pública Center.

Filogenetisk analys av 16S rRNA kommer att utföras med hjälp av QIIME -programvara. Funktionell tilldelning av metagenomiska läsningar kommer att utföras med hjälp av dedikerade bioinformatikrör som utvecklats vid Fisabio (integrering av banbrytande metoder i fältet med anpassningsbara skript).

Mikrobiella samhällsanalyser (biologisk mångfald, kluster, värmekartor) och statistisk analys kommer att utföras med R -programvara. För Biomarker Discovery -analys kommer LEFSE -plattformen att användas.

D.6) Genuttrycksanalys Vi kommer att utvärdera förändringar i genuttrycksnivåer med NanoString® -teknik för NCOUNTER®, vilket gör att vi kan identifiera messenger -molekyler som förändras mellan feta patienter med/utan psykologiska störningar. Detta system möjliggör hybridisering av varje målmolekyl med en fluorescerande sond för individuell identifiering utan retrotranscription eller amplifiering, med hjälp av minimala provmängder. Totalt RNA kommer att extraheras från PBMC med användning av Geneall® Ribospintm Total Kit, och från bara 100-200 ng totalt RNA kommer multiplexmetabolismpanelen att utvärdera 768 gener med fokus på inflammatoriska och metaboliska vägar. Resultaten kommer att analyseras med NSolver -verktyget. Dessa experiment kommer att underleveranteras till Diagnostica Longwood, S.L.

D.7) In vitro-studie av verkningsmekanismen för kolonisk digestat på komplexa cellulära modeller som simulerar tarm-hjärnan Axis Användningen och designen av en organ-på-chip (OOC) -modell föreslås, med tarmceller i kontakt med den fermentationsmatsmältningen (från patientens avföring) och neuroblastomceller i kontakt med det absorberade materialet, specifikt utformat för att studera mekanismen från patienten. För biomarköranalys kommer förändringar på tarmnivån i inflammatoriska cytokiner och neuronala cellreceptorförändringar att observeras, vilket senare kan relateras till in vivo -resultaten. Konstruktionen kommer att inkludera att erhålla tillräckliga kontrollprov -replikat, med kolonsmältning efter stabilisering och med kolonmältning efter behandling med placebo eller synbiotikum.