Potenziale terapeutico di un sinbiotico per migliorare la salute mentale nei soggetti con obesità.

L'obesità è una delle malattie croniche più diffuse a livello globale, derivanti da una complessa interazione tra abitudini alimentari e fattori ambientali e genetici. Secondo le statistiche dell'Organizzazione mondiale della sanità, oltre 1,9 miliardi di adulti sono in sovrappeso e circa 650 milioni di persone soffrono di obesità. Inoltre, questi individui hanno un rischio maggiore di sviluppare numerosi disturbi metabolici, come diabete di tipo 2, aterosclerosi, malattie cardiovascolari, malattie epatiche grasse non alcoliche, problemi riproduttivi e alcune forme di cancro. Lo stile di vita e gli interventi farmacologici sono due delle strategie più importanti per il trattamento dell'obesità. Tuttavia, i rigorosi cambiamenti nello stile di vita sono spesso accettati solo da un numero limitato di individui e i farmaci anti-obesità possono avere alcuni effetti avversi, mentre la loro efficacia viene spesso ridotta dopo un uso prolungato. Pertanto, un bisogno significativo insoddisfatto è la mancanza di terapie aggiuntive convenienti ed efficaci per il trattamento dell'obesità.

Esiste un'associazione bidirezionale tra obesità e disturbi dell'umore come depressione e ansia. L'obesità ha anche un effetto negativo sulla salute e sulla qualità della vita, nonché sull'autostima. In particolare, si stima che circa il 50% delle persone con obesità sviluppano tratti depressivi e ansiosi, che sono più comuni nelle femmine e più frequenti all'aumentare del grado di obesità. Inoltre, le persone con obesità spesso subiscono un notevole onere emotivo, aumentando lo stress, le preoccupazioni quotidiane e persino le difficoltà nell'esecuzione delle attività della vita quotidiana. Aggiunto allo stigma della malattia, che ha un impatto negativo sull'autostima e sull'immagine corporea, questo peggiora la qualità della vita e lo stato emotivo di questi individui. Pertanto, la salute mentale è strettamente interconnessa con l'obesità e affrontare gli aspetti sia fisici che emotivi è cruciale per promuovere il benessere generale. È importante adottare un approccio olistico che include interventi in dieta, esercizio fisico e supporto emotivo e psicologico per coloro che lottano per mantenere un peso sano e una salute mentale adeguata.

L'asse del cervello intestinale è una rete di comunicazione bidirezionale tra l'intestino e il sistema nervoso centrale, che funziona attraverso i processi neuroimmune e neuroendocrini. Il suo coinvolgimento nell'insorgenza della depressione è stato postulato ed è mediato da molecole come acidi grassi a catena corta, acido gamma-aminobutirrico (GABA) e metaboliti triptofani provenienti dal microbiota intestinale. In situazioni di disbiosi o alterazioni nell'omeostasi del microbiota, i percorsi del cervello intestinale possono essere trovati deregolati e sono associati a neuroinfiammazione e alterati permeabilità barriera emato-encefalica. Inoltre, le alterazioni del microbiota intestinale possono contribuire a uno stato depressivo influenzando direttamente il rilascio di neurotrasmettitori come la serotonina e la dopamina, influenzando la risposta allo stress e i livelli di rilascio di cytotrofili (BDNF) ipotalamici e innescando i livelli di cytotrofi. Ad esempio, la depressione è associata ad un aumento del rilascio della proteina C-reattiva (CRP) e delle citochine come IL-1, IL-2, IL-6, IFN-Y e IL-1ß.

L'obesità provoca anche infiammazione a livello intestinale, resistenza all'insulino e depositi di grasso corporeo. La ricerca in questo campo suggerisce che esiste una relazione bidirezionale tra la composizione del microbiota intestinale, l'obesità e la resistenza all'insulina. È stato osservato che le persone con obesità hanno una composizione microbica diversa rispetto a quelle con un peso sano. Si ritiene che questa alterazione nel microbiota intestinale possa ulteriormente contribuire alla progressione dell'obesità aumentando la capacità di estrarre energia dal cibo, promuovendo l'infiammazione di basso grado, aumentando la lipogenesi, diminuendo l'ossidazione degli acidi grassi e aumentando l'accumulo di trigliceride a livello epatico, tra gli altri meccanismi.

Considerando il ruolo del microbiota intestinale nella regolazione del sistema immunitario e dell'infiammazione, osserviamo che l'infiammazione cronica è legata sia all'obesità che ai disturbi psicologici, tra cui depressione e ansia. Questi cambiamenti nel microbiota intestinale possono contribuire all'infiammazione sistemica e alla disfunzione immunitaria, che a loro volta potrebbero influenzare sia l'obesità che i disturbi psicologici. Alcuni batteri intestinali hanno la capacità di produrre neurotrasmettitori che sono assorbibili a livello intestinale, come la serotonina o il GABA, che sono importanti per regolare l'umore e l'ansia. Si ritiene che i cambiamenti nella composizione del microbiota intestinale possano influenzare la produzione di questi neurotrasmettitori e quindi influenzare la salute mentale.

Sebbene le modifiche allo stile di vita, come la restrizione calorica e l'esercizio fisico, siano considerate le migliori terapie per la perdita di peso, ci sono altre opzioni aggiuntive, come la modulazione del microbiota intestinale, che potrebbero essere utili per le persone con obesità. Gli studi in cui sono stati somministrati prebiotici, probiotici e sinbiotici a individui con obesità hanno mostrato i loro effetti benefici sulla riduzione del peso e altri parametri metabolici attraverso la modulazione del microbiota intestinale. A causa delle prove emergenti che implicano l'asse del cervello intestinale nell'obesità e nella sua relazione con i disturbi psicologici, c'è stato un maggiore interesse per lo sviluppo di questi trattamenti come terapie per il ripristino del microbiota intestinale.

I prebiotici sono alimenti funzionali, dato il loro ruolo benefico nel promuovere la salute e prevenire le malattie. Un esempio sono i tannini, considerati composti bioattivi a causa della loro capacità di modulare i processi metabolici e promuovere la salute. Gran parte dei tannini ingeriti raggiungono l'intestino crasso, in cui il microbiota intestinale li converte in metaboliti, compresi acidi grassi a catena corta come acetato, propionato e butirrato. Questi acidi grassi a catena corta sono importanti metaboliti che possono avere vari effetti benefici sulla salute intestinale e generale dell'ospite. Esercitano anche un potenziale effetto antidiabetico attraverso i seguenti meccanismi: (i) il miglioramento dei livelli di insulina e proinsulina nel sangue: l'affinità dei tannini per il legame con i polisaccaridi provoca un ritardo e una diminuzione della disponibilità di glucosio nel tratto gastronestinale. Inoltre, diversi studi hanno riportato il potenziale per inibire le attività di α-amilasi e α-glucosidasi attraverso tannini idrolizzabili e tannini condensati, rispettivamente. (ii) Effetto simile all'insulina sui tessuti sensibili all'insulina: le procianidine possono agire su componenti specifici della via di segnalazione intracellulare di insulina. (iii) Regolazione dell'ambiente antiossidante delle cellule pancreatiche: si ritiene che lo stress ossidativo svolga un ruolo nell'insulino -resistenza in quanto determina l'apoptosi delle cellule del pancreas. Inoltre, l'espressione di geni correlati agli enzimi antiossidanti nel pancreas è bassa. L'elevata capacità antiossidante delle tannine può contrastare la patogenesi della resistenza all'insulina, insieme alle loro proprietà anti-infiammatorie (diminuiscono i livelli di TNFα, IL-1, IL-6, ecc.) E proprietà cardioprotettive (aumentano il superossido dismutasi, riducono ROS, ecc.).

In particolare, i tannini ad alto peso molecolare raggiungono il microbiota intestinale nel colon che mostra un effetto prebiotico. In questo caso, i composti sono metabolizzati da microrganismi, producendo metaboliti con diversa biodisponibilità, attività o effetto funzionale rispetto alla molecola originale. Infine, i tannini possono modulare la composizione e la funzione del microbiota intestinale, inibendo selettivamente i patogeni e promuovendo la crescita di batteri benefici.

I probiotici sono preparativi di microrganismi che, se somministrati in condizioni e quantità appropriate, migliorano l'equilibrio microbico dell'intestino. Questi microrganismi hanno dimostrato di sopprimere l'infiammazione e modulare il sistema immunitario prevenendo l'induzione della citochina IL-8 nell'epitelio del colon umano, oltre a ridurre la permeabilità intestinale, inibendo l'endotossiemia. Gli interventi probiotici possono contribuire al trattamento dell'obesità e alle complicanze associate migliorando l'abbondanza e la funzione del microbiota intestinale. Pertanto, la combinazione di interventi prebiotici e probiotici (sinbiotici) può fornire una terapia sinergica ed efficace per i disturbi metabolici. Inoltre, è stato documentato il ruolo positivo della supplementazione sinbiotica nelle malattie mentali come il disturbo depressivo maggiore. In questo caso, i sinbiotici potrebbero migliorare i sintomi della depressione migliorando il metabolismo del triptofano e diminuendo le concentrazioni di metabolita della dopamina nella corteccia di amigdaloide.

È stato suggerito che i sinbiotici potrebbero aiutare a migliorare il tipo e la funzionalità del microbiota, ridurre l'infiammazione intestinale e promuovere la sazietà attraverso un aumento della produzione di ormoni che hanno questo effetto sul corpo. Pertanto, ciò potrebbe essere utile nella gestione dell'obesità. I sinbiotici possono svolgere un ruolo cruciale nel modulare il metabolismo dei macronutrienti producendo acidi grassi a catena corta, che si legano ai recettori accoppiati a g-proteina e aumentano la secrezione del peptide 1 simile al glucagone (GLP-1) e peptide YY (Pyy). Questi legami possono innescare la produzione di insulina mediante cellule β pancreatiche, inibire la secrezione del glucagone, ridurre la gluconeogenesi epatica e aumentare la sensibilità all'insulina. I sinbiotici migliorano anche la funzione intestinale, eleva la produzione di mucina e riducono il numero di batteri patogeni negativi nel colon. Questi cambiamenti riducono la trasmissione dei lipopolisaccaridi (LPS) attraverso la parete della mucosa e l'endotossiemia metabolica, che alla fine possono portare a miglioramenti nella funzione del recettore dell'insulina e livelli più bassi di insulina. Precedenti studi hanno dimostrato che la loro somministrazione è benefica sia per l'obesità che per i sintomi psicologici tipici di depressione o ansia, tra gli altri. Un intervento di 6 settimane con synbiotics può ridurre significativamente i sintomi della depressione rispetto a un placebo. In questo campo, una meta-analisi del 2017 ha suggerito che i probiotici possono ridurre i sintomi psicologici, tra cui ansia, depressione e stress percepito nei volontari di adulti sani. Il microbiota intestinale può produrre direttamente neurotrasmettitori come la serotonina e influenzarne la produzione. Ha anche funzioni immunomodulanti ed è in grado di attivare l'asse ipotalamo-ipofisi attraverso la produzione di citochine proinfiammatorie IL-1 e IL-6.

In questo contesto, un intervento con un sinbiotico composto da tannini e ceppi intestinali benefici in soggetti con obesità potrebbe avere effetti benefici sulla salute aumentando la capacità antiossidante e la produzione di acidi grassi a catena corta, modulando la produzione di neurotrasmettitori coinvolti in sazietà e promuovendo l'umore del microbita GUT, la protezione mocica e

Pertanto, la combinazione di interventi sinbiotici potrebbe fornire una terapia sinergica ed efficace per i disturbi sia metabolici che psicologici. Affrontare l'obesità in modo completo, inclusi cure mediche, supporto psicologico per la salute mentale e cure sinbiotiche, potrebbe migliorare lo stato emotivo, l'obesità e i disturbi psicologici. In definitiva, potrebbe migliorare la qualità della vita per le persone colpite. Mentre la ricerca in questo settore è ancora in corso e sono necessarie ulteriori prove per comprendere appieno queste interazioni, ci sono prove crescenti che suggeriscono che la salute del microbiota intestinale può influenzare la salute fisica e mentale in modi complessi e significativi. Promuovere un microbiota intestinale sano attraverso una dieta equilibrata, l'assunzione di cibi e probiotici ricchi di fibre, nonché una riduzione dello stress, può essere utile per affrontare sia l'obesità che i disturbi psicologici, persino sinergicamente con altri trattamenti.

Pertanto, il nostro obiettivo è determinare se l'assunzione di un sinbiotico composto da batteri dell'acido lattico, bifidobatteri e fitocomplessi a base di tannino sia in grado di migliorare i sintomi ansiosi e depressivi, il profilo glicemico, il profilo dell'influenza di pacco, il profilo dell'influenza di pacco, il profilo dell'influenza, il profilo dell'influenza di pacco, il profilo dell'influenza, il profilo dell'influenza di pacco Produzione di neurotrasmettitori e alterazione differenziale del microbiota intestinale.

Viene proposto uno studio di intervento clinico-basico, prospettico, randomizzato, in doppio cieco, controllato con placebo per i pazienti con obesità che presentano disturbi depressivi e/o ansia.

Per raggiungere gli obiettivi proposti, saranno inclusi 120 pazienti con obesità che presentano disturbi depressivi e/o ansia (n = 60) e quelli senza disturbi (n = 60). I criteri diagnostici per la depressione e l'ansia saranno quelli stabiliti nel DSM-5. Inoltre, ogni gruppo sarà diviso casualmente in 2 sottogruppi, uno dei quali riceverà il sinbiotico e l'altro riceverà il corrispondente placebo (n = 30 per gruppo) per 12 settimane. Il processo di randomizzazione verrà eseguito utilizzando un programma software per l'assegnazione casuale. I pazienti saranno arruolati in sequenza nello studio mentre frequentano l'unità di obesità nelle consultazioni di endocrinologia e nutrizione presso il Dr. Peset Hospital e soddisfano i seguenti criteri:

• Criteri di inclusione: pazienti con un BMI di 30-40 kg/m², di età compresa tra 18 e 65 anni, con una durata della malattia nota di oltre cinque anni. Inoltre, tutti i pazienti manterranno un peso stabile (<5% di fluttuazione) durante i 3 mesi precedenti lo studio.
• Criteri di esclusione: pazienti che hanno assunto antibiotici 3 mesi prima dell'inizio dello studio, nonché un uso precedente di integratori contenenti probiotici e/o prebiotici. Inoltre, i pazienti con diagnosi di malattie intestinali e coloro che hanno subito una precedente chirurgia gastrointestinale. Saranno esclusi le cause secondarie di obesità, diabete di tipo 1, gravidanza o lattazione, malattia neoplastica attiva e quelle con insufficienza epatica o renale stabilita. Infine, saranno esclusi i pazienti con altri disturbi psichiatrici diagnosticati diversi dall'ansia e/o dalla depressione e saranno esclusi anche coloro che sono sottoposti a trattamento con antidepressivi prima dell'inizio dello studio.

Prima di iniziare lo studio, i pazienti, o il loro rappresentante legale, firmeranno un modulo di consenso informato dopo essere stato spiegato l'obiettivo dello studio e risolvere eventuali dubbi possibili. Questo studio aderisce alle linee guida etiche stabilite per la sperimentazione umana in Helsinki e i suoi successivi aggiornamenti; Avrà anche l'approvazione del comitato etico dell'ospedale. Le informazioni mediche e tutti i dati raccolti durante lo studio saranno mantenuti riservati in conformità con la legge organica 15/1999 sulla protezione dei dati personali e sul corrispondente decreto reale 1720/07.

All'inizio dello studio, il dietista-nutrizionista effettuerà una valutazione nutrizionale individualizzata per calcolare il dispendio energetico a riposo e verranno create diete ipocaloriche personalizzate, riducendo i 500 kcal da ogni individuo e il 15% dei grassi e il 15% di grassi e il 15% di grassi e il 15% di grassi e il 15% di grassi, il 15% di grassi e il 15% dei grassi). Il monitoraggio dietetico contribuirà a evitare la distorsione e rafforzerà l'adesione alla dieta, oltre ai monitoraggio degli effetti collaterali. Il gruppo di trattamento riceverà una capsula con una formulazione sinbiotica e il gruppo di controllo riceverà una capsula placebo (maltodestrina) ed entrambi i gruppi saranno istruiti a prenderla ogni giorno per 12 settimane. Il sinbiotico consisterà in una parte probiotica composta da Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei e Bifidobacterium lactis (2 × 10⁹ CFU/G ciascuno) e una parte prebiotica composta da fitocomple a base di tannine (350 mg) estratta da varie fonti. Il placebo sembrerà identico alla capsula sinbiotica. Per mantenere l'accecamento per il personale che partecipa alla sperimentazione, la preparazione dei prodotti di studio e il riempimento dei contenitori saranno effettuati dalle società Silvateam e Sacco, che opereranno in condizioni non climatene.

All'inizio dell'intervento, verrà condotta un'intervista psicologica strutturata per raccogliere informazioni sulle condizioni attuali del paziente; Storia ed evoluzione della malattia (obesità e disturbo psicologico), schemi alimentari, qualità del sonno, comorbilità psicologiche associate, aree familiari e sociali, motivazione per il cambiamento e aspettative. Verrà valutato l'impatto dell'obesità sulla qualità della vita del paziente (emotiva, sociale e personale). Il follow-up psicologico avrà luogo a 4, 6 e 12 settimane di studio. Durante gli interventi, lo stato di motivazione, le abitudini alimentari, lo stile di vita, l'autocontrollo, il cambiamento cognitivo-comportamentale e la prevenzione delle ricadute saranno valutati.

All'inizio dello studio e dopo l'intervento dietetico, verranno raccolti campioni di sangue a digiuno (12 ore), saliva, urina (24 ore) e sgabelli. Verranno determinati i seguenti parametri:

1. Verranno misurati i parametri antropometrici e il peso e l'altezza della composizione corporea e l'IMC verrà calcolato (peso / (altezza) ²). Verrà anche determinato la circonferenza della vita e dell'anca, così come la pressione sanguigna. Inoltre, un'analisi vettoriale che utilizza l'impedenza bioelettrica (SECA MBCA 550®) verrà eseguita sia all'inizio che alla fine dell'intervento.

   I pazienti completeranno un registro dietetico di 3 giorni (incluso 1 giorno del fine settimana) all'inizio, 6 settimane e 12 settimane, insieme al questionario IPAQ per monitorare l'attività fisica. Completeranno anche un questionario sull'adesione e la conformità del prodotto e se hanno avuto effetti negativi dopo aver assunto il prodotto.

2. Valutazione psicologica In primo luogo, applicheremo il questionario sull'ansia della depressione e lo stress Scala 21 (DAS-21). Sulla base dei risultati iniziali, lo stress, l'ansia e la depressione saranno valutati utilizzando tre scale validate: l'inventario della depressione Beck (BDI-2), la scala dello stress percepita (PSS), l'inventario dell'ansia del tratto statale (STAI) e l'autostima usando il questionario di Rosenberg. Questa valutazione consentirà la classificazione del soggetto in entrambi i gruppi (obesità con e senza ansia e/o depressione) e verificherà se c'è un miglioramento significativo dopo il gruppo di assunzione sinbiotica.
3. Parametri biochimici verrà valutato un profilo lipidico completo, determinando il colesterolo totale (TC) e i trigliceridi (TG) usando metodi enzimatici, HDL-C (metodo di precipitazione diretta), LDL-C (calcolato usando la formula di Friedewald) e VLDL-C (TG/5). Le apolipoproteine ​​B e A-I saranno determinate dalla nefelometria. Verranno calcolati il ​​colesterolo non HDL (TC-HDL) e l'indice del plasma aterogeno (API = log (TG/HDL)). Il glicemia e l'insulina a digiuno verranno misurati utilizzando il metodo enzimatico dell'esocinasi e la chemiluminescenza, rispettivamente, e l'indice HOMA sarà calcolato per valutare la resistenza all'insulina. Funzione epatica e renale, emocromo completo, coagulazione e profilo ormonale saranno valutati usando i seguenti marcatori: AST, ALT, GGT, LDH, fosfatasi alcalina, creatinina, velocità di filtrazione glomerulare, A1C e funzione tiroide (TSH, TSH, T4 libero). Tutti questi parametri saranno determinati nel servizio di analisi clinica del Dr. Peset University Hospital.
4. Determinazione dei biomarcatori d.1) Parametri infiammatori e capacità antiossidante Lo stato infiammatorio sarà valutato determinando le concentrazioni della proteina c-reattiva C ultrasensibile, IL6, TNF, IL1B, adiponectina, PAI-1 e IL10, usando la tecnologia Luminex Xmap-Multiplex. L'elaborazione del campione e l'analisi dei dati verranno eseguite seguendo le istruzioni del produttore. I livelli sierici di LPS saranno determinati da ELISA. La capacità antiossidante totale nel siero verrà determinato utilizzando il sistema E-BQC (Bioquochem).

D.2) Determinazione dei peptidi e dei livelli sierici della funzione intestinale degli ormoni intestinali (GIP, GLP1, PYY, Ghrelina, leptina, CCK) saranno determinati utilizzando la tecnologia X-Map Luminex. Per valutare la permeabilità intestinale e la traslocazione microbica, i livelli plasmatici di zonulina, occludina, LBP, FABP2/I-FABP e Reg3A saranno misurati usando i kit ELISA. Il rilevamento di β-glucano nel plasma verrà eseguito utilizzando il test lisato di amebociti limulus (LAL).

D.3) Analisi del peptide di neurotrasmettitore cortisolo, dopamina, serotonina e livelli di ossitocina in plasma, urina 24 ore su 24 o saliva saranno determinati usando kit ELISA o tecnologia X-Map Luminex.

D.4) L'analisi metabolomica NMR (risonanza magnetica nucleare) verrà applicata per ottenere ampi profili metabolici da grandi coorti di pazienti ben fenotipi. Inizialmente, tutti i campioni saranno analizzati mediante NMR, ottenendo un profilo metabolico globale fino a 40 metaboliti tra cui aminoacidi, zuccheri, fosfolipidi, marcatori di infiammazione, glicoproteine, lipoparticelle e alcuni co-metaboliti microbici.

Il significato statistico dei diversi metaboliti verrà analizzato utilizzando test di covarianza corretti per il potenziale tasso di scoperta falsa (FDR) utilizzando il software SPSS e MATLAB. L'analisi chemometrica per costruire modelli diagnostici, di classificazione e predittiva verrà eseguita utilizzando gli script MATLAB personalizzati e la cassetta degli attrezzi PLS per PCA, la proiezione a analisi latenti della struttura-discriminante (PLS-DA), l'analisi dei cluster gerarchici (HCA) e gli approcci simili sui dati spettrali per classificare i gruppi basati su parametri clinici e di intervento. Le reti metaboliche saranno costruite utilizzando Cytoscape e l'enciclopedia Kyoto di geni e genomi (KEGG) per la genomica, integrando i risultati metabolomici e altri risultati molecolari del progetto. Infine, tutti i risultati saranno valutati attraverso la convalida incrociata e il potere discriminatorio/predittivo dei diversi metaboliti e punteggi verrà analizzato utilizzando le curve caratteristiche operative del ricevitore (ROC).

D.5) Studio della purificazione dell'acido nucleico del microbiota, dell'amplificazione del gene rRNA 16S e del sequenziamento in primo luogo, i campioni di feci saranno triturati, omogeneizzati e lisati usando un sistema FastPrep (MP Biomedicals). Il DNA totale verrà estratto seguendo il protocollo automatico Magna LC Pure LC (Roche, Manheim, Germania) secondo le istruzioni del produttore. Le librerie metagenomiche saranno ottenute utilizzando il kit Nextera XT seguendo il protocollo di Illumina. Le regioni V3-V4 dell'RRNA 16S saranno amplificate e le librerie saranno purificate seguendo il protocollo di Illumina.

Il sequenziamento MISEQ verrà eseguito utilizzando il kit V3 (cicli 2x300), generando letture da 300 bp per ogni 65 ore, a partire da ciascuna estremità dell'amplicone. Il sequenziamento ultra-profondo verrà eseguito utilizzando un sequencer Illumina presso il Fisabio-Salud Pública Center.

L'analisi filogenetica dell'RRNA 16S verrà effettuata utilizzando il software Qiime. L'assegnazione funzionale delle letture metagenomiche verrà eseguita utilizzando pipeline bioinformatiche dedicate sviluppate a Fisabio (integrazione di metodologie all'avanguardia nel campo con script personalizzabili).

Le analisi della comunità microbica (biodiversità, clustering, mappe di calore) e analisi statistiche verranno eseguite utilizzando il software R. Per l'analisi della scoperta di Biomarker, verrà utilizzata la piattaforma LEFSE.

D.6) Analisi dell'espressione genica Valuteremo i cambiamenti nei livelli di espressione genica usando la tecnologia Nanostring® per NCounter®, che ci consentirà di identificare molecole di messaggistica che vengono alterate tra pazienti obesi con/senza disturbi psicologici. Questo sistema consente l'ibridazione di ciascuna molecola target con una sonda fluorescente per l'identificazione individuale senza retrotrasscrizione o amplificazione, utilizzando importi del campione minimi. L'RNA totale verrà estratto da PBMC utilizzando il kit totale RIBOSPINTM GeneAL® e da soli 100-200 ng di RNA totale, il pannello del metabolismo multiplex valuterà 768 geni, concentrandosi su percorsi infiammatori e metabolici. I risultati verranno analizzati utilizzando lo strumento NSOLVER. Questi esperimenti saranno subappaltati a Diagnostica Longwood, S.L.

D.7) Studio in vitro del meccanismo d'azione del colon digestato su modelli cellulari complessi che simulano l'asse del cervello intestinale viene proposto l'uso e la progettazione di un modello Organ-on-Chip (OOC), con le cellule intestinali a contatto con la digestione di fermentazione (da feci del paziente) e le cellule di neuroblastoma a contatto con il materiale assorbito, specificamente progettato a studiare il meccanismo di azione di synBiotic. Per l'analisi dei biomarcatori, saranno osservati cambiamenti a livello intestinale nelle citochine infiammatorie e cambiamenti del recettore delle cellule neuronali, che possono successivamente essere correlate ai risultati in vivo. Il design includerà l'ottenimento di replicati di campione di controllo sufficienti, con digeste di colon dopo la stabilizzazione e con digeste di colon dopo il trattamento con placebo o sinbiotico.