Therapeutisches Potenzial eines Synbiotikums zur Verbesserung der psychischen Gesundheit bei Probanden mit Fettleibigkeit.

Fettleibigkeit ist eine der weltweit am weitesten verbreiteten chronischen Krankheiten, die sich aus einer komplexen Wechselwirkung zwischen Ernährungsgewohnheiten und Umwelt- und genetischen Faktoren ergeben. Nach den Statistiken der Weltgesundheitsorganisation sind mehr als 1,9 Milliarden Erwachsene übergewichtig, und ungefähr 650 Millionen Menschen leiden unter Fettleibigkeit. Darüber hinaus besteht diese Personen ein höheres Risiko, zahlreiche Stoffwechselstörungen wie Typ-2-Diabetes, Atherosklerose, Herz-Kreislauf-Erkrankungen, nichtalkoholische Fettlebererkrankungen, Fortpflanzungsprobleme und einige Krebsformen zu entwickeln. Lebensstil und pharmakologische Interventionen sind zwei der wichtigsten Strategien zur Behandlung von Fettleibigkeit. Strikte Lebensstiländerungen werden jedoch häufig nur von einer begrenzten Anzahl von Personen akzeptiert, und Anti-Adipositas-Medikamente können einige nachteilige Auswirkungen haben, während ihre Wirksamkeit nach längerem Gebrauch häufig verringert wird. Ein erheblicher unbefriedigter Bedarf ist der Mangel an bequemen und wirksamen Zusatztherapien für die Behandlung von Fettleibigkeit.

Es gibt einen bidirektionalen Zusammenhang zwischen Fettleibigkeit und Stimmungsstörungen wie Depressionen und Angstzuständen. Adipositas wirkt sich auch negativ auf die Gesundheit und Lebensqualität sowie auf das Selbstwertgefühl aus. Insbesondere wird geschätzt, dass ungefähr 50% der Personen mit Fettleibigkeit depressive und ängstliche Merkmale entwickeln, die bei Frauen häufiger und häufiger mit zunehmender Fettleibigkeitsgrad häufiger sind. Darüber hinaus erleiden Menschen mit Fettleibigkeit häufig eine beträchtliche emotionale Belastung, erhöhen Stress, tägliche Sorgen und sogar Schwierigkeiten bei der Durchführung täglicher Lebensaktivitäten. Zu dem Stigma der Krankheit, das sich negativ auf das Selbstwertgefühl und das Körperbild auswirkt, verschlechtert dies die Lebensqualität und den emotionalen Zustand dieser Individuen. Daher ist die psychische Gesundheit eng mit Fettleibigkeit verbunden, und es ist entscheidend, sowohl die physischen als auch die emotionalen Aspekte anzugehen, um das allgemeine Wohlbefinden zu fördern. Es ist wichtig, einen ganzheitlichen Ansatz zu verfolgen, der Interventionen in der Ernährung, körperlicher Bewegung sowie emotionaler und psychischer Unterstützung für diejenigen umfasst, die kämpfen, ein gesundes Gewicht und eine angemessene psychische Gesundheit aufrechtzuerhalten.

Die Darmhirnachse ist ein bidirektionales Kommunikationsnetz zwischen dem Darm und dem Zentralnervensystem, das durch Neuroimmun- und neuroendokrine Prozesse funktioniert. Die Beteiligung am Einsetzen der Depression wurde postuliert und wird durch Moleküle wie kurzkettige Fettsäuren, Gamma-Aminobuttersäure (GABA) und Tryptophan-Metaboliten vermittelt, die aus dem Darmmikrobiota stammen. In Situationen der Dysbiose oder Veränderungen der Mikrobiota-Homöostase können die Darmhirnwege dereguliert befunden werden und sind mit Neuroinflammation und veränderter Permeabilität der Blut-Hirn-Barriere verbunden. Darüber hinaus können Veränderungen in der Darmmikrobiota zu einem depressiven Zustand beitragen, indem sie die Freisetzung von Neurotransmitter wie Serotonin und Dopamin direkt beeinflussen und die Stressreaktion beeinflussen, und die hypothalamisch-hypassend-adrenale (HPA) -Axis (HPA) und die Release der Release der freien neurotrophen Faktor (BDNF) sowie die Release der freie inflorotrophe Faktor (BDNF) und die Release der Release der freien inflorytatorischen Faktoren (BDNF) und die Release der Release der aufblätteren Zytokines. Zum Beispiel ist Depression mit einer erhöhten Freisetzung von C-reaktives Protein (CRP) und Zytokinen wie IL-1, IL-2, IL-6, IFN-Y und IL-1ß verbunden.

Fettleibigkeit verursacht auch Entzündungen auf Darmebene, Insulinresistenz und Körperfettablagerungen. Untersuchungen in diesem Bereich legen nahe, dass es eine bidirektionale Beziehung zwischen der Zusammensetzung der Darmmikrobiota, der Fettleibigkeit und der Insulinresistenz besteht. Es wurde beobachtet, dass Menschen mit Fettleibigkeit eine andere mikrobielle Zusammensetzung im Vergleich zu Menschen mit einem gesunden Gewicht haben. Es wird angenommen, dass diese Veränderung in der Darmmikrobiota weiter zum Fortschreiten der Fettleibigkeit beitragen könnte, indem die Fähigkeit, Energie aus Nahrung zu extrahieren, eine geringere Entzündung zu fördern, die Lipogenese zu erhöhen, die Oxidation von Fettsäure zu verringern und die Ansammlung von Triglycerid-Ansammlungen auf dem hepatischen Niveau zu erhöhen.

In Anbetracht der Rolle der Darmmikrobiota bei der Regulierung des Immunsystems und der Entzündung stellen wir fest, dass chronische Entzündungen sowohl mit Fettleibigkeit als auch mit psychischen Störungen verbunden sind, einschließlich Depressionen und Angstzustände. Diese Veränderungen in der Darmmikrobiota können zu systemischer Entzündung und Immunfunktionsstörung beitragen, was wiederum sowohl Fettleibigkeit als auch psychische Erkrankungen beeinflussen kann. Einige Darmbakterien haben die Fähigkeit, Neurotransmitter zu produzieren, die auf Darmebene absorbierbar sind, wie Serotonin oder GABA, die für die Regulierung von Stimmung und Angst wichtig sind. Es wird angenommen, dass Veränderungen in der Zusammensetzung der Darmmikrobiota die Produktion dieser Neurotransmitter beeinflussen und daher die psychische Gesundheit beeinflussen könnten.

Obwohl Lebensstilveränderungen wie Kalorienbeschränkungen und körperliche Bewegung als die besten Therapien für den Gewichtsverlust angesehen werden, gibt es andere Zusatzoptionen wie die Modulation der Darmmikrobiota, die für Menschen mit Fettleibigkeit nützlich sein könnten. Studien, in denen Präbiotika, Probiotika und Synbiotika an Personen mit Fettleibigkeit verabreicht wurden, haben ihre vorteilhaften Auswirkungen auf die Gewichtsreduktion und andere Stoffwechselparameter durch die Modulation der Darmmikrobiota gezeigt. Aufgrund der entstehenden Beweise, die die Darm-Hirn-Achse in Fettleibigkeit und ihre Beziehung zu psychischen Störungen implizieren, wurde das Interesse an der Entwicklung dieser Behandlungen als Therapien zur Wiederherstellung der Darmmikrobiota erhöht.

Präbiotika sind funktionelle Lebensmittel, angesichts ihrer vorteilhaften Rolle bei der Förderung der Gesundheit und der Vorbeugung von Krankheiten. Ein Beispiel sind Tannine, die als bioaktive Verbindungen betrachtet werden, da sie Stoffwechselprozesse modulieren und die Gesundheit fördern können. Ein Großteil der Tannine hat den Dickdarm aufgenommen, in dem die Darmmikrobiota sie in Metaboliten umwandelt, einschließlich kurzkettiger Fettsäuren wie Acetat, Propionat und Butyrat. Diese kurzkettigen Fettsäuren sind wichtige Metaboliten, die verschiedene vorteilhafte Auswirkungen auf die Darm- und Gesamtgesundheit des Wirts haben können. Sie üben auch eine mögliche antidiabetische Wirkung durch folgende Mechanismen aus: (i) Verbesserung der Insulin- und Proinsulinspiegel im Blut: Die Affinität von Tanninen zur Bindung an Polysaccharide führt zu einer Verzögerung und einer Abnahme der Verfügbarkeit von Glukose in der Magen -Darm -Tradition. Zusätzlich haben mehrere Studien das Potenzial zur Hemmung der Aktivitäten von α-Amylase und α-Glucosidase durch hydrolysierbare Tannine bzw. kondensierte Tannine berichtet. (ii) Insulinartige Wirkung auf insulinempfindliche Gewebe: Procyanidine können auf bestimmte Komponenten des intrazellulären Insulin-Signalwegs wirken. (iii) Regulation der antioxidativen Umgebung von Pankreaszellen: Es wird angenommen, dass oxidativer Stress eine Rolle bei der Insulinresistenz spielt, da sie die Apoptose der Pankreaszellen bestimmt. Zusätzlich ist die Expression von Genen, die mit antioxidativen Enzymen in der Bauchspeicheldrüse zusammenhängen, niedrig. Die hohe antioxidative Kapazität von Tanninen kann der Pathogenese der Insulinresistenz zusammen mit ihren entzündungshemmenden Eigenschaften (sie verringern TNFα, IL-1, IL-6-Spiegel usw.) und kardioprotektive Eigenschaften (sie erhöhen die Superoxiddismutase, die ROS usw., usw.).

Insbesondere erreichen Tannine mit hohem Molekulargewicht die Darmmikrobiota im Dickdarm, die einen präbiotischen Effekt zeigen. In diesem Fall werden die Verbindungen durch Mikroorganismen metabolisiert, wodurch Metaboliten mit unterschiedlicher Bioverfügbarkeit, Aktivität oder funktioneller Wirkung im Vergleich zum ursprünglichen Molekül erzeugt werden. Schließlich können Tannine die Zusammensetzung und Funktion der Darmmikrobiota modulieren, selektiv Krankheitserreger hemmen und das Wachstum von nützlichen Bakterien fördern.

Probiotika sind Vorbereitungen von Mikroorganismen, die, wenn sie unter geeigneten Bedingungen und Mengen verabreicht werden, das mikrobielle Gleichgewicht des Darms verbessern. Es wurde gezeigt, dass diese Mikroorganismen Entzündungen unterdrücken und das Immunsystem modulieren, indem die Induktion des IL-8-Zytokins im menschlichen Dickdarm-Epithel verhindern und die Darmpermeabilität reduziert und die Endotoxämie hemmt. Probiotische Interventionen können zur Behandlung von Fettleibigkeit und damit verbundenen Komplikationen beitragen, indem die Häufigkeit und Funktion der Darmmikrobiota verbessert wird. Daher kann die Kombination von präbiotischen und probiotischen Interventionen (Synbiotika) eine synergistische und wirksame Therapie für Stoffwechselstörungen liefern. Darüber hinaus wurde die positive Rolle der synbiotischen Supplementierung bei psychischen Erkrankungen wie einer schweren depressiven Störung dokumentiert. In diesem Fall könnten Synbiotika Depressionssymptome verbessern, indem sie den Tryptophan -Metabolismus verbessern und die Dopamin -Metabolitenkonzentrationen im Amygdaloid -Kortex verringern.

Es wurde vermutet, dass Synbiotika dazu beitragen könnten, die Art und Funktionalität der Mikrobiota zu verbessern, die Darmentzündung zu verringern und Sättigungen durch eine erhöhte Produktion von Hormonen zu fördern, die diese Wirkung auf den Körper haben. Daher könnte dies bei der Behandlung von Fettleibigkeit von Vorteil sein. Synbiotika können eine entscheidende Rolle bei der Modulation des Makronährstoffstoffwechsels spielen, indem er kurzkettige Fettsäuren produziert, die an G-Protein-gekoppelte Rezeptoren binden und die Sekretion von Glucagon-ähnlichen Peptid 1 (GLP-1) und Peptid YY (PYY) aus Enteroendokrin-L-Zellen erhöhen. Diese Bindungen können die Insulinproduktion durch Pankreas-β-Zellen auslösen, die Glucagon-Sekretion hemmen, die Lebergluconeogenese verringern und die Insulinsensitivität erhöhen. Synbiotika verbessern auch die Darmfunktion, erhöhen die Mucinproduktion und verringern die Anzahl der pathogenen gramnegativen Bakterien im Dickdarm. Diese Veränderungen verringern die Übertragung von Lipopolysacchariden (LPS) über die Schleimhautwand und die metabolische Endotoxämie, was letztendlich zu Verbesserungen der Insulinrezeptorfunktion und zu niedrigeren Insulinspiegeln führen kann. Frühere Studien haben gezeigt, dass ihre Verabreichung unter anderem sowohl für Fettleibigkeit als auch für typische psychische Symptome von Depressionen oder Angstzuständen von Vorteil ist. Eine 6-wöchige Intervention mit Synbiotika kann die Depressionssymptome im Vergleich zu einem Placebo signifikant reduzieren. In diesem Bereich legte eine Metaanalyse aus dem Jahr 2017 darauf hin, dass Probiotika psychische Symptome, einschließlich Angstzustände, Depressionen und wahrgenommener Stress bei gesunden erwachsenen Freiwilligen, verringern können. Die Darmmikrobiota kann direkt Neurotransmitter wie Serotonin produzieren und ihre Produktion beeinflussen. Es hat auch immunmodulatorische Funktionen und kann die Hypothalamus-Hypophysen-Achse durch die Produktion von proinflammatorischen Zytokinen IL-1 und IL-6 aktivieren.

In diesem Zusammenhang könnte eine Intervention mit einem Synbiotikum, das aus Tanninen und vorteilhaften Darmstämmen bei Personen mit Fettleibigkeit besteht, vorteilhafte Auswirkungen auf die Gesundheit haben, indem sie die Antioxidationskapazität und die kurzkettige Fettsäureproduktion, die Produktion von Neurotransmitter und die Stimmung modulieren, und die Förderung der Sättigung und der Förderung von GUT-Microbiota-Gleichgewicht, dem Schutz von Neurotransmitter und verbessertem Intestinus modulieren.

Die Kombination synbiotischer Interventionen könnte daher eine synergistische und wirksame Therapie sowohl für metabolische als auch für psychische Störungen liefern. Die umfassende Behandlung von Adipositas, einschließlich medizinischer Behandlung, psychologischer Unterstützung für psychische Gesundheit und synbiotische Behandlung, könnte den emotionalen Zustand, die Fettleibigkeit und die psychischen Störungen verbessern. Letztendlich könnte es die Lebensqualität der betroffenen Menschen verbessern. Während die Forschung in diesem Bereich noch andauern und weitere Beweise erforderlich sind, um diese Wechselwirkungen vollständig zu verstehen, gibt es zunehmend Hinweise darauf, dass die Gesundheit der Darmmikrobiota sowohl die körperliche als auch die psychische Gesundheit auf komplexe und signifikante Weise beeinflussen kann. Die Förderung einer gesunden Darmmikrobiota durch eine ausgewogene Ernährung, die Aufnahme von faserreichen Lebensmitteln und Probiotika sowie die Stressreduzierung kann sowohl für die Bekämpfung von Fettleibigkeit als auch für psychische Erkrankungen von Vorteil sein, sogar synergistisch mit anderen Behandlungen.

Therefore, our goal is to determine whether the intake of a synbiotic composed of lactic acid bacteria, bifidobacteria, and tannin-based phytocomplexes is capable of improving anxious and depressive symptoms, glycemic profile, and insulin resistance in patients with obesity, depending on the presence or absence of psychological disorders, through the improvement of the inflammatory profile, appetite control, Neurotransmitterproduktion und die unterschiedliche Veränderung der Darmmikrobiota.

Eine klinisch-basische, prospektive, randomisierte, doppelblinde, placebokontrollierte Interventionsstudie wird für Patienten mit Fettleibigkeit vorgeschlagen, die depressive und/oder Angststörungen aufweisen.

Um die vorgeschlagenen Ziele zu erreichen, werden 120 Patienten mit Fettleibigkeit, die depressive und/oder Angststörungen (n = 60) und diejenigen ohne Störungen (n = 60) auftreten, einbezogen. Die diagnostischen Kriterien für Depressionen und Angstzustände werden im DSM-5 festgelegt. Darüber hinaus wird jede Gruppe zufällig in 2 Untergruppen unterteilt, von denen eines das Synbiotikum erhält und der andere das entsprechende Placebo (n = 30 pro Gruppe) für 12 Wochen erhält. Der Randomisierungsprozess wird unter Verwendung eines Softwareprogramms zur Zufallszuweisung durchgeführt. Die Patienten werden nacheinander in die Studie eingeschlossen, während sie die Adipositas -Einheit in den Beratungs- und Ernährungskonsultationen des Dr. Peset Hospital besuchen und die folgenden Kriterien erfüllen:

• Einschlusskriterien: Patienten mit einem BMI von 30 bis 40 kg/m² im Alter zwischen 18 und 65 Jahren mit einer bekannten Krankheitsdauer von mehr als fünf Jahren. Darüber hinaus werden alle Patienten während der 3 Monate vor der Studie ein stabiles Gewicht (<5% Schwankung) beibehalten.
• Ausschlusskriterien: Patienten, die 3 Monate vor Beginn der Studie Antibiotika genommen haben, sowie vorherige Verwendung von Nahrungsergänzungsmitteln, die Probiotika und/oder Präbiotika enthalten. Auch Patienten, bei denen Darmkrankheiten diagnostiziert wurden, und Patienten, die sich einer früheren Magen -Darm -Operation unterzogen haben. Sekundäre Ursachen für Fettleibigkeit, Diabetes vom Typ 1, Schwangerschaft oder Laktation, aktive neoplastische Erkrankung und solche mit etablierter Leber oder Nierenversagen werden ausgeschlossen. Schließlich werden Patienten mit anderen diagnostizierten psychiatrischen Störungen, die sich von Angstzuständen und/oder Depressionen unterscheiden, und diejenigen, die vor Beginn der Studie mit Antidepressiva behandelt werden, werden ebenfalls ausgeschlossen.

Vor Beginn der Studie unterzeichnen die Patienten oder ihr gesetzlicher Vertreter ein Einverständniserklärung, nachdem das Ziel der Studie erklärt und mögliche Zweifel gelöst wurden. Diese Studie hält die ethischen Richtlinien für das menschliche Experimentieren in Helsinki und ihre nachfolgenden Aktualisierungen fest. Es wird auch vom Ethikausschuss des Krankenhauses genehmigt. Die medizinischen Informationen und alle während der Studie gesammelten Daten werden gemäß dem organischen Gesetz 15/1999 über den Schutz des personenbezogenen Daten und des entsprechenden königlichen Dekrets 1720/07 vertraulich gehalten.

Zu Beginn der Studie wird der Ernährungsberechtigteist eine individuelle Ernährungsbewertung durchführen, um den Ruhenergieverbrauch zu berechnen, und personalisierte hypokalorische Diäten werden entstanden, wodurch 500 kcal von den gesamten täglichen Energieverbrauch jedes Individuums reduziert werden, wobei die empfohlenen in den Makonähren (50-55%) und 30-35% und 30-35% und 30-35 ige und 30-35% und 30-35 ige und 30-35% und 30-35% und 30-35% und 30-35% und 30-35% und 30-35% und 30-35% und 30-35% und 30-35% und 30-35 ige und). Die Ernährungsüberwachung wird dazu beitragen, eine Verzerrung zu vermeiden und die Einhaltung der Ernährung sowie die Überwachung von Nebenwirkungen zu verstärken. Die Behandlungsgruppe erhält eine Kapsel mit einer synbiotischen Formulierung, und die Kontrollgruppe erhält eine Placebo -Kapsel (Maltodextrin), und beide Gruppen werden angewiesen, sie 12 Wochen lang täglich zu nehmen. Das Synbiotikum besteht aus einem probiotischen Teil aus Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei und Bifidobacterium lactis (2 × 10 ⁹ CFU/G) und einem auf Tanninen basierenden präbiotischen Teil aus Phytokomplexen (350 mg) (350 mg) (350 mg), extrahiert aus verschiedenen Quellen. Das Placebo sieht mit der synbiotischen Kapsel identisch aus. Um die Angestellten für die an der Prüfung teilnehmenden Mitarbeiter zu erhalten, werden die Unternehmensprodukte und die Füllung der Behälter von den Unternehmen Silvateam und Sacco durchgeführt, die unter nicht entlarvten Bedingungen operieren werden.

Zu Beginn der Intervention wird ein strukturiertes psychologisches Interview geführt, um Informationen über den aktuellen Zustand des Patienten zu sammeln. Geschichte und Entwicklung der Krankheit (Fettleibigkeit und psychische Störung), Essmuster, Schlafqualität, assoziierte psychologische Komorbiditäten, Familien- und soziale Bereiche, Motivation für Veränderungen und Erwartungen. Die Auswirkungen von Fettleibigkeit auf die Lebensqualität des Patienten (emotional, sozial und persönlich) werden bewertet. Die psychologische Follow-up erfolgt um 4, 6 und 12 Wochen der Studie. Während der Interventionen werden Motivationsstatus, Essgewohnheiten, Lebensstil, Selbstkontrolle, kognitive Verhaltensänderungen und Rückfallprävention bewertet.

Zu Beginn der Studie und nach der Ernährung werden die Blutproben (12 Stunden), Speichel, Urin (24 Stunden) und Stuhlproben gesammelt. Die folgenden Parameter werden bestimmt:

1. Anthropometrische Parameter und Körperzusammensetzung und Größe werden gemessen und BMI wird berechnet (Gewicht / (Größe) ²). Taille und Hüftumfang sowie Blutdruck werden ebenfalls bestimmt. Zusätzlich wird eine Vektoranalyse unter Verwendung bioelektrischer Impedanz (SecA MBCA 550®) sowohl am Anfang als auch am Ende der Intervention durchgeführt.

   Die Patienten werden zu Beginn, 6 Wochen und 12 Wochen sowie den IPAQ-Fragebogen ein 3-tägiges Ernährungsprotokoll (einschließlich 1 Wochenendtag) absolvieren, um körperliche Aktivität zu überwachen. Sie werden auch einen Fragebogen zur Produkteinhaltung und -konformität ausfüllen. Wenn sie nach der Einnahme des Produkts nachteilige Auswirkungen haben.

2. Psychologische Bewertung Zunächst werden wir den Fragebogen der Depressionsangst und der Stressskala 21 (DASS-21) anwenden. Basierend auf den anfänglichen Ergebnissen werden Stress, Angstzustände und Depressionen mit drei validierten Skalen bewertet: dem Beck Depression Inventory (BDI-2), der wahrgenommenen Stressskala (PSS), dem State-Trait-Angstinventar (STAI) und dem Selbstwertgefühl unter Verwendung des Rosenberg-Fragebogens. Diese Bewertung ermöglicht die Klassifizierung des Subjekts in beide Gruppen (Fettleibigkeit mit und ohne Angst und/oder Depression) und prüft, ob nach der synbiotischen Aufnahmegruppe eine signifikante Verbesserung vorliegt.
3. Biochemische Parameter Ein vollständiges Lipidprofil wird bewertet, wobei die gesamte Cholesterin (TC) und Triglyceride (TG) unter Verwendung enzymatischer Methoden, HDL-C (Direktfällungsmethode), LDL-C (berechnet unter Verwendung von Friedewalds Formel) und VLDL-C (TG/5) bestimmt wird. Apolipoproteine ​​B und A-I werden durch Nephelometrie bestimmt. Nicht-HDL-Cholesterin (TC-HDL) und der atherogene Plasmaindex (API = log (TG/HDL)) werden berechnet. Das Nüchternblutglukose und Insulin werden unter Verwendung der Hexokinase Enzymatic -Methode bzw. Chemilumineszenz gemessen, und der HOMA -Index wird berechnet, um die Insulinresistenz zu bewerten. Leber- und Nierenfunktion, vollständige Blutzahl, Gerinnung und hormonelles Profil werden unter Verwendung der folgenden Marker bewertet: AST, ALT, GGT, LDH, Alkalin -Phosphatase, Kreatinin, glomeruläre Filtrationsrate, A1C und Schilddrüsenfunktion (TSH, Free T4). Alle diese Parameter werden im klinischen Analysedienst des Dr. Peset University Hospital festgelegt.
4. Biomarker-Bestimmung D.1) Entzündungsparameter und antioxidative Kapazität Der entzündliche Zustand wird bewertet, indem die Konzentrationen von ultrasiblen C-reaktiven Proteins, IL6, TNF, IL1B, Adiponectin, PAI-1 und IL10 unter Verwendung der Luminex-Xmap-Multiplex-Technologie bestimmt werden. Die Probenverarbeitung und Datenanalyse werden gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt. Die Serumspiegel von LPS werden durch ELISA bestimmt. Die Gesamt-Antioxidationskapazität im Serum wird unter Verwendung des E-BQC-Systems (Bioquocheme) bestimmt.

D.2) Die Bestimmung der Serumspiegel von Peptiden und Darmfunktionen von Darmhormonen (GIP, GLP1, PYY, Ghrelin, Leptin, CCK) wird unter Verwendung der Luminex-X-Map-Technologie bestimmt. Um die Darmpermeabilität und mikrobielle Translokation zu bewerten, werden die Plasmaspiegel von Zonulin, Occludin, LBP, FABP2/I-FABP und Reg3a mithilfe von ELISA-Kits gemessen. Der Nachweis von β-Glucan im Plasma wird unter Verwendung des Limulus Amebozyten-Lysat-Assays (LAL) durchgeführt.

D.3) Neurotransmitter-Peptidanalyse Cortisol-, Dopamin-, Serotonin- und Oxytocin-Spiegel in Plasma, 24-Stunden-Urin oder Speichel werden unter Verwendung von ELISA-Kits oder Luminex-X-MAP-Technologie bestimmt.

D.4) Die metabolomische Analyse NMR (Kernmagnetresonanz) wird angewendet, um umfangreiche Stoffwechselprofile aus großen, gutphänotypischen Patientenkohorten zu erhalten. Zunächst werden alle Proben durch NMR analysiert, wobei ein globales Stoffwechselprofil von bis zu 40 Metaboliten, einschließlich Aminosäuren, Zucker, Phospholipiden, Entzündungsmarkern, Glykoproteinen, Lipopartikeln und einigen mikrobiellen Co-Metaboliten erhalten wird.

Die statistische Signifikanz der verschiedenen Metaboliten wird unter Verwendung von Kovarianztests analysiert, die für die potenzielle falsche Entdeckungsrate (FDR) unter Verwendung von SPSS- und MATLAB -Software korrigiert wurden. Die chemometrische Analyse zur Konstruktion von Diagnose-, Klassifizierungs- und Vorhersagemodellen wird mit benutzerdefinierten MATLAB-Skripten und PLS-Toolbox für PCA, Projektion auf eine latente Strukturdiskriminant-Analyse (PLS-DA), hierarchische Clusteranalyse (HCA) und ähnliche Ansätze zu Spezialdaten durchgeführt, um Gruppen basierend auf klinischen und Interventionsparametern zu klassifizieren. Metabolische Netzwerke werden mit Cytoscape und der Kyoto -Enzyklopädie von Genen und Genomen (KEGG) für die Genomik gebaut, wobei die metabolomischen Ergebnisse und andere molekulare Ergebnisse des Projekts integriert werden. Schließlich werden alle Ergebnisse durch Kreuzvalidierung bewertet, und die diskriminierende/prädiktive Leistung der verschiedenen Metaboliten und Scores wird unter Verwendung von ROC-Kurven (Receiver Operating Charichone) analysiert.

D.5) Untersuchung der Microbiota -Nukleinsäureinreinigung, der 16S -rRNA -Genamplifikation und der Sequenzierung zuerst werden die Stuhlproben unter Verwendung eines FastPrep -Systems (MP Biomedicals) trituriert, homogenisiert und lysiert. Die Gesamt -DNA wird nach dem automatisierten Magna Pure LC -Protokoll (Roche, Manheim, Deutschland) gemäß den Anweisungen des Herstellers extrahiert. Metagenomische Bibliotheken werden unter Verwendung des Nextera XT -Kits nach Illuminas Protokoll erhalten. Die V3-V4-Regionen der 16S-rRNA werden verstärkt und die Bibliotheken werden nach dem Protokoll von Illumina gereinigt.

Die MiSeq-Sequenzierung wird unter Verwendung des V3-Kits (2x300 Zyklen) durchgeführt, wobei für jede 65 Stunden von jedem Ende des Amplikons 300-bp-Lesevorgänge erzeugt werden. Die ultra-tiefe Sequenzierung wird mit einem Illumina-Sequenzer im Fisabio-Salud Pública Center durchgeführt.

Die phylogenetische Analyse von 16S -rRNA wird unter Verwendung von Qiime -Software durchgeführt. Die funktionale Zuordnung von metagenomischen Lesevorgängen wird unter Verwendung dedizierter Bioinformatik-Pipelines durchgeführt, die bei Fisabio entwickelt wurden (integrieren hochmoderne Methoden in dem Feld mit anpassbaren Skripten).

Mikrobielle Community -Analysen (Biodiversität, Clustering, Wärmekarten) und statistische Analysen werden mit R -Software durchgeführt. Für die Analyse von Biomarker Discovery wird die Lefse -Plattform verwendet.

D.6) Genexpressionsanalyse Wir werden Veränderungen der Genexpressionsniveaus mithilfe der NanoString® -Technologie für NCounter® bewerten, mit der wir Messenger -Moleküle identifizieren können, die zwischen fettleibigen Patienten mit/ohne psychische Störungen verändert werden. Dieses System ermöglicht die Hybridisierung jedes Zielmoleküls mit einer fluoreszierenden Sonde für die individuelle Identifizierung ohne Retrotranskription oder Amplifikation unter Verwendung minimaler Probenmengen. Die Gesamt-RNA wird aus PBMCs unter Verwendung des GeneAll®-Risikospintm-Gesamtkits extrahiert. Aus nur 100 bis 200 ng Gesamt-RNA wird das Multiplex-Metabolismus-Panel 768 Gene bewertet, wobei sich auf entzündliche und metabolische Wege konzentriert. Die Ergebnisse werden mit dem NSOLVER -Tool analysiert. Diese Experimente werden an Diagnostica Longwood, S.L.

D.7) In-vitro-Untersuchung des Wirkungsmechanismus des Dolonverdauers auf komplexen zellulären Modellen, die die Darm-Hirn-Achse simulieren, wird die Verwendung und das Design eines Organ-On-Chip-Modells (OOC) vorgeschlagen, wobei Darmzellen in Kontakt mit dem Fermentationsverdauung (aus Patientenkot) und der Synbiotik-Zellen, die mit der Synbiotik-Zellen kontaktiert wurden, in Kontakt mit dem Fermentationsmaterial, der speziell entwickelt wurde, um den Mechanismus der Action der Synbiotik zu verdauen. Für die Biomarker -Analyse werden Veränderungen auf Darmebene in entzündlichen Zytokinen und neuronalen Zellrezeptorveränderungen beobachtet, die später mit den In -vivo -Ergebnissen zusammenhängen können. Das Design umfasst das Erhalten einer ausreichenden Kontrollprobe -Replikate, mit Dolonverdauung nach der Stabilisierung und mit Dolonverdauung nach der Behandlung mit Placebo oder Synbiotikum.