폐 이식 수혜자의 만성 폐 이식 기능 장애(CLAD)에서 ECP에 대한 반응의 혈장 및 방사선학적 바이오마커

I. ECP 치료 ECP 처방 결정은 연구와 독립적으로 이루어지며 대상자의 주치의에 의해 결정됩니다. ECP 치료는 표준 참여 센터 ECP 치료 계획에 따라 대상자의 각 폐 이식 센터에서 수행되며 이 연구 목적을 위해 변경되지 않습니다. 일반적으로, 6개월 동안 총 24회의 시술을 포함하는 치료 일정을 사용하여 시술이 수행됩니다. 7주 동안(1개월 및 2개월) 주 2회 시술이 수행된 후, 3개월 동안 격주로 짝을 이루는 시술이 수행되고, 이후 4, 5, 6개월 동안 월 1회 시술이 수행됩니다.

II. 혈액 샘플 채취 연구 방문 및 측정 매개변수 대상자가 각 폐 이식 센터에서 첫 ECP 치료를 받을 때, 연구 참여를 위한 완성된 동의서가 확인될 것입니다. 혈액 샘플은 대상자의 ECP 치료를 수행하는 센터에서 ECP 치료 주기의 6개월 과정 동안 세 시점에서 채취됩니다: 1) 첫 ECP 치료 직전, 2) 3개월 시작 시 15번째 ECP 치료 직전, 3) 완전한 ECP 치료 주기의 최종 ECP 치료 직전.

a. 시절 i. 혈액 샘플 채취: 혈액 샘플(최대 25ml의 정맥혈, dd-cfDNA 분석용 15ml 및 Treg 연구용 10ml)은 정맥천자 또는 정맥 카테터 삽입/접근 시 채취됩니다. 비임상 샘플은 환자 기밀을 유지하기 위해 연구 번호만으로 표시됩니다.

ii. dd-cfDNA 분석: 전혈 샘플은 cfDNA BCT 튜브(Streck Inc., Omaha, NE)에 채취되고, 혈장이 분리됩니다. cfDNA는 맞춤형 프로토콜을 사용하여 분리되고 qPCR로 품질 관리됩니다. 게놈 DNA(gDNA)가 추출, 분쇄 및 품질 관리됩니다. 혈장 cfDNA 라이브러리는 샷건 시퀀싱을 위해 준비되고 Illumina HiSeq에서 시퀀싱됩니다. 원시 시퀀스 리드는 트리밍, 필터링 및 인간 게놈에 정렬되어 기증자 및 수혜자 고유 SNP를 조사하여 % dd-cfDNA를 계산합니다.

iii. cfDNA 메틸화 분석: cfDNA 또는 gDNA는 비설파이트로 처리되고, 라이브러리가 구축되며 Illumina NovaSeq로 시퀀싱됩니다. 원시 시퀀스 리드 품질이 확인되고, 리드는 트리밍된 후 인간 참조 게놈에 정렬됩니다. 중복 제거 후, 시토신 메틸화 신호가 추출됩니다. 혈장 cfDNA 기원의 세포 구성은 인간 세포 유형 메틸화 아틀라스 알고리즘을 사용하여 분해됩니다.

iv. Treg 분석: ECP 전, 중, 후 Treg 특성, 기능 및 반응이 분석됩니다. ECP를 받는 대상자로부터 각 센터에서 지정된 시점에 헤파린 처리 튜브에 전혈 10mL가 채취됩니다. 말초혈액 단핵구(PBMCs)가 분리되고 Treg 집단이 분류 및 농축되어 억제 능력, 사이토카인 생산 및 표면 마커 발현 평가를 포함한 하류 기능 및 표현형 분석을 위해 사용됩니다.

III. DCE-MRI 연구 방문 및 측정 매개변수 대상자는 연구의 기본 포함/제외 기준을 충족하고 가돌리늄 투여 또는 MRI에 대한 금기 사항이 없는지 확인하기 위해 선별됩니다. 가임기 여성은 각 MRI 스캔 전 소변 임신 검사를 수행하여 적격성을 확인합니다. 모든 환자는 연구 MRI 전에 MRI 선별 양식을 작성하도록 요청받을 것입니다. 체중이 측정됩니다.

MRI: 흉부 MRI는 두 시점에서 수행됩니다: 1) 첫 ECP 치료 전 및 2) 최종 ECP 치료 후, 이상적으로는 최종 ECP 치료 후 2주 이내이지만 4주를 넘지 않습니다.

폐활량 측정: 폐활량 측정은 MRI 당일 및 전에 수행됩니다. 임상 치료를 위해 이전 4주 이내에 폐활량 측정이 수행된 경우, MRI 날짜에 폐활량 측정이 반복되지 않을 수 있습니다.

1. 사용될 약물 각 대상자는 FDA 승인, 가돌리늄 기반 MR 조영제인 가도테레이트 메글루민(Dotarem®) 단일 용량을 투여받을 것입니다. 가도테레이트 메글루민은 0.05 mmol/kg 용량으로 단일 정맥 내 투여됩니다.
2. 사용될 장치 MR 이미지는 상용, FDA 승인 3 테슬라 스캐너를 사용하여 이미지 획득을 위한 기존 FDA 승인 및/또는 진행 중인 시퀀스를 사용하여 획득됩니다.
3. 시절

i. MR 조영제 투여: 정맥 카테터가 삽입되고, 대상자는 가도테레이트 메글루민(Dotarem®)을 4cc/초 속도로 단일 정맥 내 주사로 0.05 mmol/kg(권장 용량의 절반) 투여받은 후 20cc의 생리식염수가 투여됩니다. 가도테레이트 메글루민은 FDA 승인, 가돌리늄 기반 MR 조영제입니다. 연구 직원 의사가 조영제 투여 동안 과민증 및 저혈압 징후 및 증상을 모니터링하기 위해 참석할 것입니다.

ii. 폐 MRI 프로토콜: 흉부에 초점을 맞춘 MR 이미지는 상용, FDA 승인 3 테슬라 스캐너를 사용하여 이미지 획득을 위한 기존 FDA 승인 시퀀스 및/또는 진행 중인 시퀀스를 사용하여 획득되며, 이는 동적 조영증강, 환기/관류 및 확산 시퀀스뿐만 아니라 주로 해부학적 정보를 평가하는 데 사용되는 시퀀스를 포함할 수 있지만 이에 국한되지 않습니다. 대상자를 스캔하기 전에 금속(보석 등 포함)을 의복 및 신체에서 제거하도록 요청받을 것입니다. 대상자는 스캔 동안 청각 보호를 위해 귀마개를 착용할 것입니다. 대상자는 연구 기간 동안 편안하게 머리를 베개에 놓고 스캐너 내에서 등짐 자세로 가만히 누워 있을 것입니다. 대상자는 영상 연구 동안 항상 양방향 인터콤을 통해 연구자와 소통할 것입니다. 대상자는 불편함을 느끼면 즉시 연구자에게 알리도록 권장받을 것입니다. MRI 검사 기간 동안 주기적으로 연구자는 대상자가 편안하고 계속하기를 원하는지 확인할 것입니다. 전체 영상 세션은 최대 60분까지 지속될 수 있습니다. 연구 직원 의사가 MR 이미지 획득 동안 참석할 것입니다.

iii. MR 이미지 분석: 연구자는 미세혈관 및 혈관외 세포외 공간의 변화를 측정하기 위해 조영제 역학 분석을 수행할 것입니다. 획득된 시퀀스에 따라 추가 분석이 추가될 수 있습니다. 위의 발견 중 어느 것도 이식 후 환자에게 임상적으로 획득된 흉부 영상과 비교될 수 있습니다.

이미지는 일반적으로 영상의학과 의사에 의해 검토되지 않습니다. 이미지 분석 중에 잠재적 이상이 감지되는 경우, 영상의학과 의사의 공식 상담이 요청될 것입니다. 이상 존재가 확인되면, 대상자는 의사 연구자 중 한 명에게 연락받을 것입니다. 의사 연구자는 대상자에게 이상에 대해 알리고, 모든 질문에 답하며, 필요한 경우 후속 조치 또는 추가 검사를 권장할 것입니다. 의사 연구자는 또한 대상자로부터 해당되는 경우 주치의 또는 폐질환 전문의에게 연락할 수 있는 허가를 요청할 것입니다. MRI 이상에 대한 문서화는 대상자의 의무 기록에 포함될 수 있습니다.

III. 데이터 수집 위에 상세히 설명된 cfDNA 및 MR 이미지 분석에서 얻은 정보 외에도, 연구자는 연구에 등록된 대상자의 임상 데이터를 검토 및 기록할 것입니다. 이는 폐 생검의 병리 보고서 검토를 포함합니다. 수집된 정보를 통해 우리는 cfDNA 및 폐 MRI 소견과 결과 사이의 관계(있는 경우)를 결정할 수 있을 것입니다. 이 데이터는 암호로 보호된 REDCap(연구 전자 데이터 캡처) 데이터베이스에 저장됩니다. 이 연구를 위해, 연구자는 기본 인구통계학적 데이터(연령, 성별, 성 정체성, 인종/민족), 임상 데이터(병리 보고서, 기타 진단, 약물, 흡연력 포함) 및 폐 기능 측정(일산화탄소 확산 능력, FEV1, FVC, 총 폐용량, 6분 걷기 검사 수행)과 폐 이식 수혜자의 임상 관리에서 정기적으로 측정되는 다양한 혈액 또는 혈청학적 마커를 기록할 것입니다. 연구자는 또한 폐 질환 진행을 모니터링하기 위해 임상적으로 획득된 폐 영상 스캔 결과 및/또는 수행되었을 수 있는 추가 검사(예: 심초음파 또는 심폐 운동 검사)를 기록할 수 있습니다. 연구 시작 시(기준선) 위의 데이터를 기록하는 것 외에도, 연구자는 환자의 전자 의무 기록에 주기적으로 접근하여 연구 완료 시점부터 무기한까지 약 3개월마다 후속 폐 기능 검사(PFT) 결과 및 입원 및 생존 상태와 같은 기타 관련 후속 데이터를 기록할 것입니다.