Plazmatické a radiologické biomarkery odpovědi na ECP u příjemců plicního transplantátu s CLAD

I. Léčba ECP Rozhodnutí předepsat ECP je nezávislé na studii a bude určeno ošetřujícím lékařem subjektu. Léčba ECP bude prováděna v příslušném transplantačním centru plic subjektu podle standardního léčebného režimu ECP účastnického centra a nebude pro účely této studie upravována. Postupy se obvykle provádějí podle léčebného plánu, který zahrnuje celkem 24 procedur během 6 měsíců. Dva postupy se provádějí týdně po dobu sedmi týdnů (měsíc 1 a 2), následované spárovanými postupy každý druhý týden v měsíci 3, poté jednou měsíčně v měsících 4, 5 a 6.

II. Návštěvy studie pro odběr vzorků krve a parametry k měření Když se subjekty dostaví na svou první léčbu ECP ve svém příslušném transplantačním centru plic, bude potvrzen podepsaný informovaný souhlas pro účast ve studii. Vzorky krve budou odebrány centrem provádějícím léčbu ECP subjektu ve třech časových bodech během 6měsíčního cyklu léčby ECP: 1) bezprostředně před první léčbou ECP, 2) bezprostředně před 15. léčbou ECP na začátku měsíce 3 a 3) bezprostředně před poslední léčbou ECP celého cyklu léčby ECP.

a. Postupy i. Odběr vzorků krve: Vzorky krve (až 25 ml venózní krve, 15 ml pro analýzu dd-cfDNA a 10 ml pro studie Treg) budou odebrány venepunkcí nebo při zavedení/intravenózního přístupu katétru. Neklinické vzorky budou označeny pouze studijním číslem, aby byla zachována důvěrnost pacienta.

ii. Analýza dd-cfDNA: Vzorky plné krve budou odebrány do zkumavek cfDNA BCT (Streck Inc., Omaha, NE) a plazma bude izolována. cfDNA bude izolována pomocí upraveného protokolu a kontrolována kvalitativně pomocí qPCR. Genomická DNA (gDNA) bude extrahována, fragmentována a kontrolována kvalitativně. Knihovny plazmatické cfDNA budou připraveny pro sekvenování shotgun a sekvenovány na Illumina HiSeq. Surové sekvenční čtení bude oříznuto, filtrováno a zarovnáno k lidskému genomu, aby se prozkoumaly jedinečné SNP dárce a příjemce pro výpočet % dd-cfDNA.

iii. Analýza metylace cfDNA: cfDNA nebo gDNA bude ošetřena bisulfitem, knihovny budou konstruovány a sekvenovány pomocí Illumina NovaSeq. Kvalita surového sekvenčního čtení bude zkontrolována, čtení bude oříznuto a poté zarovnáno k referenčnímu lidskému genomu. Po deduplikaci budou extrahovány signály metylace cytosinu. Buněčné složení pro původ plazmatické cfDNA bude dekonvoluováno pomocí algoritmu atlasu metylace lidských buněčných typů.

iv. Analýza Treg: Budou analyzovány charakteristiky, funkce a odpověď Treg před, během a po ECP. Deset (10) ml plné krve bude odebráno do heparinizovaných zkumavek ve stanovených časových bodech v každém centru od subjektů podstupujících ECP. Periferní mononukleární buňky krve (PBMC) budou izolovány a populace Treg budou tříděny a obohaceny pro následné funkční a fenotypové analýzy, včetně hodnocení supresivní kapacity, produkce cytokinů a exprese povrchových markerů.

III. Návštěvy studie DCE-MRI a parametry k měření Subjekty budou vyšetřeny, aby se zajistilo, že splňují základní kritéria pro zařazení/vyloučení do studie a nemají kontraindikace k podání gadolinia nebo MRI. Ženy v plodném věku budou mít před každým MRI vyšetřením proveden těhotenský test z moči, aby se potvrdila způsobilost. Všichni pacienti budou požádáni o vyplnění screeningového formuláře MRI před jakýmkoli výzkumným MRI. Bude zvážena hmotnost.

MRI: MRI hrudníku bude provedeno ve dvou časových bodech: 1) před první léčbou ECP a 2) po poslední léčbě ECP, ideálně do 2 týdnů po poslední léčbě ECP, ale ne později než 4 týdny.

Spirometrie: Spirometrie bude provedena v den MRI a před ním. Pokud byla spirometrie získána v předchozích 4 týdnech pro klinickou péči, nemusí být v den MRI opakována.

1. Léky k použití Každý subjekt obdrží jednu dávku gadoterátu megluminu (Dotarem®), kontrastní látky pro MR na bázi gadolinia schválené FDA. Gadoterát meglumin bude podán v dávce 0,05 mmol/kg jako jednorázová intravenózní aplikace.
2. Zařízení k použití MR snímky budou pořizovány pomocí komerčních, FDA schválených 3 Tesla skenerů pomocí konvenčních, FDA schválených a/nebo rozpracovaných sekvencí pro akvizici obrazu.
3. Postupy

i. Podání MR kontrastu: Bude zaveden intravenózní katétr a subjektům bude podán gadoterát meglumin (Dotarem®) jako jednorázová intravenózní injekce 0,05 mmol/kg, což je polovina doporučené dávky, rychlostí 4 cc/sekundu následovaná 20 cc fyziologického roztoku. Gadoterát meglumin je kontrastní látka pro MR na bázi gadolinia schválená FDA. Během podání kontrastu bude přítomen lékařský pracovník studie, který bude sledovat příznaky a symptomy hypersenzitivity a hypotenze.

ii. Protokol plicního MRI: MR snímky zaměřené na hrudník budou pořizovány pomocí komerčních, FDA schválených 3 Tesla skenerů pomocí konvenčních, FDA schválených sekvencí a/nebo rozpracovaných sekvencí pro akvizici obrazu, které mohou zahrnovat, ale nejsou omezeny na dynamické kontrastem zvýrazněné, ventilační/perfuzní a difuzní sekvence, stejně jako sekvence primárně používané k hodnocení anatomických informací. Před skenováním budou subjekty požádány, aby odstranily kov (včetně šperků atd.) ze svého oblečení a osoby. Subjekty budou během skenování nosit špunty do uší jako ochranu sluchu. Subjekty budou ležet nehybně v poloze na zádech ve skeneru s hlavou pohodlně umístěnou na polštáři po dobu trvání studie. Subjekty budou během zobrazovací studie neustále v komunikaci s vyšetřovateli prostřednictvím obousměrného interkomu. Subjektům bude doporučeno, aby okamžitě sdělily vyšetřovateli jakékoli pocity nepohodlí. Během vyšetření MRI budou vyšetřovatelé pravidelně potvrzovat, že je subjekt spokojený a přeje si pokračovat. Celá zobrazovací sezení může trvat až 60 minut. Během akvizice MR snímků bude přítomen lékařský pracovník studie.

iii. Analýza MR obrazu: Vyšetřovatelé provedou analýzy kinetiky kontrastu, aby změřili změny v mikrovaskulárním a extravaskulárním extracelulárním prostoru. Další analýzy mohou být přidány na základě získaných sekvencí. Jakákoli z výše uvedených zjištění může být porovnána s hrudním zobrazením, které bylo klinicky získáno u pacientů po transplantaci.

Soubor obrázků nebude rutinně přezkoumáván radiologem. Pokud při analýze obrazu bude náhodou detekována potenciální abnormalita, bude požadována formální konzultace radiologem. Pokud bude přítomnost abnormality potvrzena, bude subjekt kontaktován jedním z lékařských vyšetřovatelů. Lékařský vyšetřovatel informuje subjekt o abnormalitě, odpoví na všechny otázky a v případě potřeby doporučí následnou péči nebo další testování. Lékařský vyšetřovatel také požádá subjekt o povolení kontaktovat jeho nebo jejího praktického lékaře nebo pneumologa, pokud je to možné. Dokumentace abnormality MRI může být umístěna do lékařské dokumentace subjektu.

III. Shromažďování dat Kromě informací získaných z analýz cfDNA a MR obrazu, jak je podrobně uvedeno výše, vyšetřovatelé přezkoumají a zaznamenají klinická data pro subjekty zařazené do studie. To zahrnuje přezkoumání patologických zpráv z biopsií plic. Shromážděné informace nám umožní určit vztah, pokud existuje, mezi nálezy cfDNA a plicního MRI s výsledky. Tato data budou uložena v databázi REDCap (Research Electronic Data Capture) chráněné heslem. Pro tuto studii vyšetřovatelé zaznamenají základní demografická data (věk, pohlaví, gender, rasa/etnicita), klinická data (včetně patologických zpráv, dalších diagnóz, léků, kouření), stejně jako měření plicních funkcí (difuzní kapacita pro oxid uhelnatý, FEV1, FVC, celková kapacita plic, výkon v šestiminutovém chůzovém testu) a různé krevní nebo sérologické markery rutinně měřené v klinické péči o příjemce plicní transplantace, jak jsou k dispozici. Vyšetřovatelé mohou také zaznamenat výsledky klinicky získaných plicních zobrazovacích vyšetření ke sledování progrese plicního onemocnění a/nebo dalšího testování (jako je echokardiogram nebo kardiopulmonální zátěžový test), které mohlo být provedeno. Kromě zaznamenání výše uvedených dat při vstupu do studie (výchozí stav) budou vyšetřovatelé také pravidelně přistupovat k elektronické zdravotní dokumentaci pacienta, aby zaznamenali následné výsledky testů plicních funkcí (PFT) a další relevantní následná data, jako jsou hospitalizace a vitální stav přibližně každé tři měsíce až na neurčitou dobu od dokončení studie.