Plasma- og radiologiske biomarkører for respons på ECP hos lungetransplantatmodtagere med CLAD

I. ECP-behandlinger Beslutningen om at ordinere ECP er uafhængig af studiet og vil blive bestemt af forsøgspersonens behandlende læge. ECP-behandlinger vil blive udført på forsøgspersonens respektive lungetransplantationscenter i henhold til standard deltagende centers ECP-behandlingsregime og vil ikke blive ændret med henblik på dette studie. Typisk udføres procedurerne ved hjælp af en behandlingsplan, der inkluderer i alt 24 procedurer over 6 måneder. To procedurer udføres ugentligt i syv uger (måned 1 og 2), efterfulgt af parrede procedurer hver anden uge i måned 3, derefter en gang om måneden i måned 4, 5 og 6.

II. Blodprøveindsamlingsstudiebesøg og parametre, der skal måles Når forsøgspersoner møder op til deres første ECP-behandling på deres respektive lungetransplantationscenter, vil et udfyldt informeret samtykkeformular blive bekræftet for deltagelse i studiet. Blodprøver vil blive indsamlet af centeret, der udfører forsøgspersonens ECP-behandlinger, på tre tidspunkter over 6-månedersforløbet af en ECP-behandlingscyklus: 1) umiddelbart før den første ECP-behandling, 2) umiddelbart før den 15. ECP-behandling ved starten af måned 3, og 3) umiddelbart før den sidste ECP-behandling af en fuld ECP-behandlingscyklus.

a. Procedurer i. Blodprøveindsamling: Blodprøver (op til 25 ml veneblod, 15 ml til dd-cfDNA-analyse og 10 ml til Treg-studier) vil blive indsamlet via venepunktur eller på tidspunktet for intravenøs kateterplacering/adgang. Ikke-kliniske prøver vil blive mærket kun med et studienummer for at opretholde patientkonfidentialitet.

ii. dd-cfDNA-analyse: Hele blodprøver vil blive indsamlet i cfDNA BCT-rør (Streck Inc., Omaha, NE), og plasma vil blive isoleret. cfDNA vil blive isoleret ved hjælp af en tilpasset protokol og kvalitetskontrolleret med qPCR. Genomisk DNA (gDNA) vil blive ekstraheret, fragmenteret og kvalitetskontrolleret. Plasma cfDNA-biblioteker vil blive forberedt til shotgun-sekventering og sekventeret på Illumina HiSeq. Rå sekvenslæsninger vil blive trimmet, filtreret og justeret til det humane genom for at undersøge for donor- og modtager-unikke SNPs for at beregne % dd-cfDNA.

iii. cfDNA-methyleringsanalyse: cfDNA eller gDNA vil blive behandlet med bisulfit, biblioteker konstrueret og sekventeret med Illumina NovaSeq. Rå sekvenslæsekvalitet vil blive kontrolleret, læsninger vil blive trimmet og derefter justeret til et humant referencegenom. Efter deduplikering vil cytosinmethyleringssignaler blive ekstraheret. Den cellulære sammensætning for oprindelsen af plasma cfDNA vil blive dekonvolveret ved hjælp af den humane celletype-methyleringsatlas-algoritme.

iv. Treg-analyse: Treg-egenskaber, funktion og respons før, under og efter ECP vil blive analyseret. Ti (10) ml helblod vil blive indsamlet i hepariniserede rør på specificerede tidspunkter på hvert center fra forsøgspersoner, der gennemgår ECP. Perifere blodmononukleære celler (PBMC'er) vil blive isoleret, og Treg-populationer vil blive sorteret og beriget til nedstrøms funktionelle og fænotypiske analyser, herunder vurderinger af suppressionskapacitet, cytokinproduktion og overflademarkørudtryk.

III. DCE-MRI-studiebesøg og parametre, der skal måles Forsøgspersoner vil blive screenet for at sikre, at de opfylder de grundlæggende inklusions-/eksklusionskriterier for studiet og ikke har kontraindikationer mod gadoliniumadministration eller MRI. Kvinder i den fødedygtige alder vil få udført en urin-graviditetstest før hver MR-scanning for at bekræfte berettigelse. Alle patienter vil blive bedt om at udfylde en MR-screeningformular før enhver forsknings-MR. Vægt vil blive målt.

MRI: MR-scanning af thorax vil blive udført på to tidspunkter: 1) før den første ECP-behandling og 2) efter den sidste ECP-behandling, ideelt set inden for 2 uger efter sidste ECP-behandling, men ikke mere end 4 uger senere.

Spirometri: Spirometri vil blive udført på dagen for og før MR-scanning. Hvis spirometri er blevet foretaget inden for de foregående 4 uger til klinisk pleje, behøver spirometri ikke at gentages på MR-scanningens dato.

1. Lægemidler, der skal bruges Hver forsøgsperson vil modtage en enkelt dosis gadoteratmeglumin (Dotarem®), et FDA-godkendt, gadoliniumbaseret MR-kontrastmiddel. Gadoteratmeglumin vil blive givet i en dosis på 0,05 mmol/kg som en enkelt intravenøs administration.
2. Enheder, der skal bruges MR-billeder vil blive indhentet ved hjælp af kommercielle, FDA-godkendte 3 Tesla-scannere ved hjælp af konventionelle, FDA-godkendte og/eller under udvikling værende sekvenser til billedindhentning.
3. Procedurer

i. MR-kontrastadministration: En intravenøs kateter vil blive placeret, og forsøgspersoner vil få administreret gadoteratmeglumin (Dotarem®) som en enkelt intravenøs injektion på 0,05 mmol/kg, hvilket er halvdelen af den anbefalede dosis, med en hastighed på 4 cc/sekund efterfulgt af 20 cc saltvand. Gadoteratmeglumin er et FDA-godkendt, gadoliniumbaseret MR-kontrastmiddel. En studiemedarbejderlæge vil være til stede under kontrastadministration for at overvåge tegn og symptomer på overfølsomhed og hypotension.

ii. Lunge-MR-protokol: MR-billeder fokuseret på thorax vil blive indhentet ved hjælp af kommercielle, FDA-godkendte 3 Tesla-scannere ved hjælp af konventionelle, FDA-godkendte sekvenser og/eller under udvikling værende sekvenser til billedindhentning, som kan inkludere, men er ikke begrænset til, dynamisk kontrastforbedrede, ventilation/perfusions- og diffusionssekvenser samt sekvenser primært brugt til at vurdere anatomiske oplysninger. Før scanning vil forsøgspersoner blive bedt om at fjerne metal (inklusive smykker osv.) fra deres tøj og person. Forsøgspersoner vil bære ørepropper som høreværn under scanning. Forsøgspersoner vil ligge stille i ryglægende stilling i scanneren med deres hoved behageligt placeret på en pude i hele undersøgelsens varighed. Forsøgspersoner vil være i kommunikation med undersøger(e) via en tovejs samtaleanlæg til enhver tid under billedundersøgelsen. Forsøgspersoner vil blive opfordret til straks at kommunikere eventuelle følelser af ubehag til undersøgeren. Periodisk under MR-undersøgelsens varighed vil undersøgerne bekræfte, at forsøgspersonen er komfortabel og ønsker at fortsætte. Hele billedsessionen kan vare op til 60 minutter. En studiemedarbejderlæge vil være til stede under MR-billedindhentning.

iii. MR-billedanalyse: Undersøgerne vil udføre analyser af kontrastkinetik for at måle ændringer i mikrovaskulæret og det ekstravaskulære ekstracellulære rum. Yderligere analyser kan tilføjes baseret på de indhentede sekvenser. Nogen af ovenstående fund kan sammenlignes med brystbilleder, der er blevet klinisk indhentet på post-transplantationspatienterne.

Billederne vil ikke rutinemæssigt blive gennemgået af en radiolog. Hvis der ved billedanalyse tilfældigvis opdages en potentiel abnormitet, vil der blive anmodet om en formel konsultation af en radiolog. Hvis tilstedeværelsen af en abnormitet bekræftes, vil forsøgspersonen blive kontaktet af en af lægeundersøgerne. Lægeundersøgeren vil informere forsøgspersonen om abnormiteten, besvare alle spørgsmål og anbefale opfølgning eller yderligere test, hvis det er nødvendigt. Lægeundersøgeren vil også bede om tilladelse fra forsøgspersonen til at kontakte hans eller hendes primære læge eller pulmonolog, hvis relevant. Dokumentation af MR-abnormiteten kan blive placeret i forsøgspersonens medicinske journal.

III. Dataindsamling Ud over oplysninger indhentet fra cfDNA- og MR-billedanalyser som detaljeret ovenfor vil undersøgerne gennemgå og registrere kliniske data for de forsøgspersoner, der er indskrevet i studiet. Dette inkluderer gennemgang af patologirapporter fra lungebiopsier. De indsamlede oplysninger vil tillade os at bestemme forholdet, hvis nogen, mellem cfDNA- og lunge-MR-fund med resultater. Disse data vil blive opbevaret i en adgangskodebeskyttet REDCap (Research Electronic Data Capture) database. Til dette studie vil undersøgerne registrere grundlæggende demografiske data (alder, køn, kønsidentitet, race/etnicitet), kliniske data (inklusive patologirapporter, andre diagnoser, medicin, rygehistorie) samt målinger af lungefunktion (diffusionskapacitet for kulilte, FEV1, FVC, total lungekapacitet, præstation på seks-minutters gangtest) og forskellige blod- eller serologiske markører rutinemæssigt målt i den kliniske håndtering af lungetransplantationsmodtagere som tilgængelige. Undersøgerne kan også registrere resultaterne af klinisk indhentede lungebilledscanninger for at overvåge progressionen af lunge sygdom og/eller yderligere test (såsom ekkokardiogram eller kardiopulmonal belastningstest), der muligvis er blevet udført. Ud over at registrere ovenstående data ved studiestart (baseline) vil undersøgerne også få adgang til patientens elektroniske medicinske journaler periodisk for at registrere efterfølgende lungefunktionstest (PFT) resultater og andre relevante opfølgningsdata, såsom indlæggelser og vitalstatus cirka hver tredje måned op til en ubestemt mængde tid fra tidspunktet for studieafslutning.