Osocze i radiologiczne biomarkery odpowiedzi na ECP u biorców przeszczepu płuca z CLAD

I. Leczenie ECP Decyzja o przepisaniu ECP jest niezależna od badania i zostanie podjęta przez lekarza prowadzącego pacjenta. Zabiegi ECP będą wykonywane w odpowiednim ośrodku przeszczepu płuc pacjenta zgodnie ze standardowym schematem leczenia ECP uczestniczącego ośrodka i nie będą modyfikowane na potrzeby tego badania. Zazwyczaj procedury są wykonywane według harmonogramu leczenia obejmującego łącznie 24 zabiegi w ciągu 6 miesięcy. Dwa zabiegi są wykonywane co tydzień przez siedem tygodni (miesiące 1 i 2), a następnie pary zabiegów co drugi tydzień w miesiącu 3, a następnie raz w miesiącu w miesiącach 4, 5 i 6.

II. Wizyty w badaniu pobierania próbek krwi i parametry do pomiaru Kiedy pacjenci zgłaszają się na pierwszy zabieg ECP w swoim ośrodku przeszczepu płuc, zostanie potwierdzona wypełniona forma świadomej zgody na udział w badaniu. Próbki krwi będą pobierane przez ośrodek wykonujący zabiegi ECP pacjenta w trzech punktach czasowych w ciągu 6-miesięcznego cyklu leczenia ECP: 1) bezpośrednio przed pierwszym zabiegiem ECP, 2) bezpośrednio przed 15. zabiegiem ECP na początku miesiąca 3, oraz 3) bezpośrednio przed ostatnim zabiegiem ECP pełnego cyklu leczenia ECP.

a. Procedury i. Pobieranie próbek krwi: Próbki krwi (do 25 ml krwi żylnej, 15 ml do analizy dd-cfDNA i 10 ml do badań Treg) będą pobierane poprzez nakłucie żyły lub w momencie założenia/dostępu do cewnika dożylnego. Próbki niekliniczne będą oznaczane tylko numerem badania w celu zachowania poufności pacjenta.

ii. Analiza dd-cfDNA: Pełne próbki krwi będą pobierane do probówek cfDNA BCT (Streck Inc., Omaha, NE), a osocze zostanie wyizolowane. cfDNA zostanie wyizolowane przy użyciu dostosowanego protokołu i skontrolowane pod względem jakości za pomocą qPCR. Genomiczne DNA (gDNA) zostanie ekstrahowane, rozdrobnione i skontrolowane pod względem jakości. Biblioteki cfDNA z osocza zostaną przygotowane do sekwencjonowania shotgun i zsekwencjonowane na Illumina HiSeq. Surowe odczyty sekwencji zostaną przycięte, przefiltrowane i dopasowane do genomu ludzkiego w celu zbadania unikalnych SNP dawcy i biorcy w celu obliczenia % dd-cfDNA.

iii. Analiza metylacji cfDNA: cfDNA lub gDNA zostanie potraktowane bisulfitem, biblioteki zostaną skonstruowane i zsekwencjonowane za pomocą Illumina NovaSeq. Jakość surowych odczytów sekwencji zostanie sprawdzona, odczyty zostaną przycięte, a następnie dopasowane do ludzkiego genomu referencyjnego. Po deduplikacji zostaną wyodrębnione sygnały metylacji cytozyny. Skład komórkowy pochodzenia cfDNA z osocza zostanie zdekonwolucjonowany za pomocą algorytmu atlasu metylacji typów komórek ludzkich.

iv. Analiza Treg: Będą analizowane charakterystyki, funkcja i odpowiedź Treg przed, w trakcie i po ECP. Dziesięć (10) ml pełnej krwi zostanie pobrane do probówek heparynizowanych w określonych punktach czasowych w każdym ośrodku od pacjentów poddawanych ECP. Jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC) zostaną wyizolowane, a populacje Treg zostaną posortowane i wzbogacone do dalszych analiz funkcjonalnych i fenotypowych, w tym oceny zdolności supresyjnej, produkcji cytokin i ekspresji markerów powierzchniowych.

III. Wizyty w badaniu DCE-MRI i parametry do pomiaru Pacjenci zostaną przebadani, aby upewnić się, że spełniają podstawowe kryteria włączenia/wykluczenia do badania i nie mają przeciwwskazań do podania gadolinu lub MRI. Kobiety w wieku rozrodczym będą miały wykonany test ciążowy z moczu przed każdym skanem MRI w celu potwierdzenia kwalifikowalności. Wszyscy pacjenci zostaną poproszeni o wypełnienie formularza przesiewowego MRI przed jakimkolwiek badawczym MRI. Zostanie zmierzona waga.

MRI: MRI klatki piersiowej zostanie wykonane w dwóch punktach czasowych: 1) przed pierwszym zabiegiem ECP i 2) po ostatnim zabiegu ECP, najlepiej w ciągu 2 tygodni od ostatniego zabiegu ECP, ale nie później niż 4 tygodnie później.

Spirometria: Spirometria zostanie wykonana w dniu i przed MRI. Jeśli spirometria została uzyskana w ciągu ostatnich 4 tygodni w ramach opieki klinicznej, spirometria może nie być powtarzana w dniu MRI.

1. Leki do użycia Każdy pacjent otrzyma pojedynczą dawkę gadoterianu megluminy (Dotarem®), zatwierdzonego przez FDA, opartego na gadolinie środka kontrastowego do MR. Gadoterian megluminy zostanie podany w dawce 0,05 mmol/kg jako pojedyncze podanie dożylne.
2. Urządzenia do użycia Obrazy MR zostaną pozyskane przy użyciu komercyjnych, zatwierdzonych przez FDA skanerów 3 Tesla przy użyciu konwencjonalnych, zatwierdzonych przez FDA i/lub sekwencji w trakcie opracowywania do pozyskiwania obrazów.
3. Procedury

i. Podanie środka kontrastowego do MR: Zostanie założony cewnik dożylny, a pacjentom zostanie podany gadoterian megluminy (Dotarem®) jako pojedynczy wstrzyknięcie dożylne w dawce 0,05 mmol/kg, co stanowi połowę zalecanej dawki, z szybkością 4 cc/sekundę, a następnie 20 cc soli fizjologicznej. Gadoterian megluminy jest zatwierdzonym przez FDA, opartym na gadolinie środkiem kontrastowym do MR. Lekarz personelu badawczego będzie obecny podczas podawania środka kontrastowego w celu monitorowania oznak i objawów nadwrażliwości i niedociśnienia.

ii. Protokół MRI płuc: Obrazy MR skupione na klatce piersiowej zostaną pozyskane przy użyciu komercyjnych, zatwierdzonych przez FDA skanerów 3 Tesla przy użyciu konwencjonalnych, zatwierdzonych przez FDA sekwencji i/lub sekwencji w trakcie opracowywania do pozyskiwania obrazów, które mogą obejmować, ale nie ograniczają się do dynamicznych z kontrastem, wentylacji/perfuzji i sekwencji dyfuzji, a także sekwencji używanych głównie do oceny informacji anatomicznych. Przed skanowaniem pacjenci zostaną poproszeni o usunięcie metalu (w tym biżuterii itp.) z odzieży i osoby. Pacjenci będą nosić zatyczki do uszu jako ochronę słuchu podczas skanowania. Pacjenci będą leżeć nieruchomo w pozycji leżącej na plecach w skanerze z głową wygodnie ułożoną na poduszce przez cały czas trwania badania. Pacjenci będą w kontakcie z badaczami za pośrednictwem dwukierunkowego interkomu przez cały czas trwania badania obrazowego. Pacjenci będą zachęcani do natychmiastowego zgłaszania badaczowi wszelkich uczuć dyskomfortu. Okresowo w trakcie trwania badania MRI badacze potwierdzą, że pacjent czuje się komfortowo i chce kontynuować. Cała sesja obrazowania może trwać do 60 minut. Lekarz personelu badawczego będzie obecny podczas pozyskiwania obrazów MR.

iii. Analiza obrazów MR: Badacze przeprowadzą analizy kinetyki kontrastu w celu pomiaru zmian w mikrokrążeniu i pozanaczyniowej przestrzeni zewnątrzkomórkowej. Dodatkowe analizy mogą zostać dodane w oparciu o uzyskane sekwencje. Każde z powyższych ustaleń może zostać porównane z obrazowaniem klatki piersiowej, które zostało uzyskane klinicznie u pacjentów po przeszczepie.

Obrazy nie będą rutynowo przeglądane przez radiologa. Jeśli podczas analizy obrazu przypadkowo zostanie wykryta potencjalna nieprawidłowość, zostanie zlecona formalna konsultacja z radiologiem. Jeśli obecność nieprawidłowości zostanie potwierdzona, pacjent zostanie skontaktowany przez jednego z lekarzy badaczy. Lekarz badacz poinformuje pacjenta o nieprawidłowości, odpowie na wszystkie pytania i zaleci dalszą obserwację lub dodatkowe badania, jeśli to konieczne. Lekarz badacz poprosi również pacjenta o zgodę na kontakt z jego lub jej lekarzem podstawowej opieki zdrowotnej lub pulmonologiem, jeśli ma to zastosowanie. Dokumentacja nieprawidłowości MRI może zostać umieszczona w dokumentacji medycznej pacjenta.

III. Zbieranie danych Oprócz informacji uzyskanych z analiz cfDNA i obrazów MR, jak szczegółowo opisano powyżej, badacze przejrzą i zarejestrują dane kliniczne dla pacjentów włączonych do badania. Obejmuje to przegląd raportów patologicznych z biopsji płuc. Zebrane informacje pozwolą nam określić związek, jeśli taki istnieje, między ustaleniami cfDNA i MRI płuc z wynikami. Dane te będą przechowywane w chronionym hasłem bazie danych REDCap (Research Electronic Data Capture). W tym badaniu badacze zarejestrują podstawowe dane demograficzne (wiek, płeć, rasa/pochodzenie etniczne), dane kliniczne (w tym raporty patologiczne, inne diagnozy, leki, historia palenia), a także pomiary czynności płuc (dyfuzyjność tlenku węgla, FEV1, FVC, całkowita pojemność płuc, wynik testu 6-minutowego marszu) oraz różne markery krwi lub serologiczne rutynowo mierzone w postępowaniu klinicznym u biorców przeszczepu płuc, jeśli są dostępne. Badacze mogą również rejestrować wyniki klinicznie uzyskanych skanów obrazowania płuc w celu monitorowania postępu choroby płuc i/lub dodatkowych badań (takich jak echokardiogram lub test wysiłkowy kardiopulmonologiczny), które mogły zostać wykonane. Oprócz rejestracji powyższych danych przy wejściu do badania (linia bazowa), badacze będą również okresowo uzyskiwać dostęp do elektronicznej dokumentacji medycznej pacjenta, aby rejestrować kolejne wyniki badań czynnościowych płuc (PFT) i inne istotne dane z obserwacji, takie jak hospitalizacje i stan życiowy, mniej więcej co trzy miesiące przez nieokreślony czas od momentu zakończenia badania.