Plazma és radiológiai biomarkerek a válaszra ECP-vel kezelt CLAD-es tüdőtranszplantált betegekben

I. ECP-kezelések Az ECP előírásának döntése független a tanulmánytól, és a résztvevő kezelőorvosa határozza meg. Az ECP-kezeléseket a résztvevő megfelelő tüdőtranszplantációs központjában hajtják végre a szabványos részt vevő központi ECP-kezelési rendszer szerint, és e tanulmány céljából nem módosítják. A beavatkozásokat általában egy kezelési ütemterv szerint hajtják végre, amely összesen 24 eljárást foglal magában 6 hónap alatt. Heti két eljárást végeznek hét hétig (1. és 2. hónap), majd a 3. hónapban két hetente páros eljárásokat, majd a 4., 5. és 6. hónapban havonta egyszer.

II. Vérvétel Tanulmányi látogatások és mérni kívánt paraméterek Amikor a résztvevők megjelennek első ECP-kezelésükre a megfelelő tüdőtranszplantációs központjukban, egy kitöltött tájékoztatott beleegyezési nyilatkozatot igazolnak a tanulmányban való részvételhez. Vérvételt végeznek a résztvevő ECP-kezeléseit végző központ három időpontban az ECP-kezelési ciklus 6 hónapos folyamata alatt: 1) közvetlenül az első ECP-kezelés előtt, 2) közvetlenül a 15. ECP-kezelés előtt a 3. hónap elején, és 3) közvetlenül a teljes ECP-kezelési ciklus utolsó ECP-kezelése előtt.

a. Eljárások i. Vérvétel: Vérvételt (legfeljebb 25 ml vénás vér, 15 ml dd-cfDNS elemzéshez és 10 ml Treg vizsgálatokhoz) vénafelszúrással vagy intravénás katéter elhelyezése/hozzáférésekor gyűjtenek. A nem klinikai mintákat csak egy tanulmányi számmal jelölik meg a beteg adatainak védelme érdekében.

ii. dd-cfDNS elemzés: Teljes vér mintákat cfDNS BCT csövekbe (Streck Inc., Omaha, NE) gyűjtenek, és plazmát izolálnak. A cfDNS-t egy testreszabott protokollal izolálják és minőségellenőrzésen esnek át qPCR-vel. Genom DNS-t (gDNS) kinyernek, darabolják és minőségellenőrzésen esnek át. Plazma cfDNS könyvtárakat készítenek elő shotgun szekvenáláshoz és Illumina HiSeq-en szekvenálják. A nyers szekvencia olvasatokat vágják, szűrik és illesztik az emberi genomhoz, hogy adományozó és recipiens egyedi SNP-ket felmérjenek a % dd-cfDNS kiszámításához.

iii. cfDNS metiláció elemzés: A cfDNS-t vagy gDNS-t biszulfittal kezelik, könyvtárakat építenek és Illumina NovaSeq-gel szekvenálnak. A nyers szekvencia olvasatok minőségét ellenőrzik, az olvasatokat vágják, majd illesztik egy emberi referencia genomhoz. Deduplikáció után a citozin metilációs jeleket kinyerik. A plazma cfDNS eredetének sejtes összetételét az emberi sejt típusú metilációs atlas algoritmus segítségével dekonvolválják.

iv. Treg elemzés: A Treg jellemzőit, funkcióját és válaszát az ECP előtt, alatt és után elemzik. Tíz (10) ml teljes vért gyűjtenek heparinizált csövekbe meghatározott időpontokban minden központban az ECP-n áteső résztvevőktől. Perifériás vér mononukleáris sejteket (PBMC) izolálnak és Treg populációkat válogatnak és gazdagítanak a lefelé irányuló funkcionális és fenotípusos elemzésekhez, beleértve a gátló képesség, citokin termelés és felületi marker expresszió értékeléseit.

III. DCE-MRI Tanulmányi látogatások és mérni kívánt paraméterek A résztvevőket szűrik, hogy biztosítsák, megfelelnek a tanulmány alapvető bevonási/kizárási kritériumainak és nincsenek ellenjavallataik gadolínium beadására vagy MRI-re. Gyermekvállalásra képes nőknél vizelet terhességi tesztet végeznek minden MRI vizsgálat előtt a jogosultság megerősítéséhez. Minden betegtől megkérdezik, hogy töltse ki egy MRI szűrő űrlapot bármely kutatási MRI előtt. Súlyt mérnek.

MRI: A mellkas MRI-jét két időpontban végzik: 1) az első ECP-kezelés előtt és 2) az utolsó ECP-kezelés után, ideális esetben az utolsó ECP-kezeléstől 2 héten belül, de legfeljebb 4 héttel később.

Spirometria: Spirometriát végeznek az MRI napján és előtte. Ha spirometriát kaptak az előző 4 héten klinikai ellátás céljából, a spirometriát nem ismétlik meg az MRI dátumán.

1. Használandó gyógyszerek Minden résztvevő egyetlen adag gadoterát meglumint (Dotarem®) kap, egy FDA által jóváhagyott, gadolínium alapú MR kontrasztanyagot. A gadoterát meglumint 0,05 mmol/kg adagban adják be egyetlen intravénás beadásként.
2. Használandó eszközök MR képeket kereskedelmi, FDA által jóváhagyott 3 Tesla szkennerekkel rögzítenek, hagyományos, FDA által jóváhagyott és/vagy fejlesztés alatt álló szekvenciákat használva képfelvételhez.
3. Eljárások

i. MR kontraszt beadás: Intravénás katétert helyeznek el, és a résztvevők gadoterát meglumint (Dotarem®) kapnak egyetlen intravénás injekcióként 0,05 mmol/kg-ban, ami a javasolt adag fele, 4 cc/másodperc sebességgel, majd 20 cc fiziológiás sóoldattal. A gadoterát meglumin egy FDA által jóváhagyott, gadolínium alapú MR kontrasztanyag. Egy tanulmányi személyzeti orvos jelen lesz a kontraszt beadása alatt a túlérzékenység és hipotónia jeleinek és tüneteinek figyelésére.

ii. Tüdő MRI protokoll: MR képeket, amelyek a mellkasra összpontosítanak, kereskedelmi, FDA által jóváhagyott 3 Tesla szkennerekkel rögzítenek, hagyományos, FDA által jóváhagyott szekvenciákat és/vagy fejlesztés alatt álló szekvenciákat használva képfelvételhez, amelyek magukban foglalhatják, de nem korlátozódnak dinamikus kontrasztfokozott, ventiláció/perfúzió és diffúziós szekvenciákra, valamint elsősorban anatómiai információk értékelésére használt szekvenciákra. A szkennelés előtt megkérdezik a résztvevőket, hogy távolítsák el a fémet (beleértve ékszereket stb.) ruházatukról és személyükről. A résztvevők fülvédőt viselnek hallásvédelemként a szkennelés alatt. A résztvevők mozdulatlanul feküdnek hanyatt a szkennerben, fejük kényelmesen párnára helyezve a tanulmány időtartama alatt. A résztvevők kapcsolatban állnak a kutató(k)kal egy kétirányú kapcsolórendszeren keresztül az imaging tanulmány alatt mindig. A résztvevőket bátorítják, hogy azonnal közöljék a kutatóval bármilyen kényelmetlenség érzését. Időszakosan az MRI vizsgálat időtartama alatt a kutatók megerősítik, hogy a résztvevő kényelmesen érzi magát és folytatni kívánja. Az egész imaging munkamenet akár 60 percig is eltarthat. Egy tanulmányi személyzeti orvos jelen lesz az MR képfelvétel alatt.

iii. MR kép elemzés: A kutatók kontraszt kinetika elemzéseket végeznek a mikrovascularis és az extravascularis extracelluláris tér változásainak mérésére. További elemzéseket adhatnak hozzá a kapott szekvenciák alapján. A fenti megállapítások bármelyikét összehasonlíthatják a mellkas imaginggel, amelyet klinikailag kaptak a transzplantáció utáni betegeken.

A képeket nem értékelik rutinszerűen radiológus. Ha kép elemzés során véletlenül potenciális rendellenességet észlelnek, radiológus formális konzultációját kérik. Ha egy rendellenesség jelenlétét megerősítik, a résztvevőt felkeresi az egyik orvos kutató. Az orvos kutató tájékoztatja a résztvevőt a rendellenességről, megválaszol minden kérdést, és javasol követést vagy további tesztelést, ha szükséges. Az orvos kutató engedélyt is kér a résztvevőtől, hogy kapcsolatba lépjen az elsődleges ellátó orvosával vagy pulmonológusával, ha alkalmazható. Az MRI rendellenesség dokumentációja elhelyezhető a résztvevő orvosi nyilvántartásában.

III. Adatgyűjtés Az információkon kívül, amelyeket cfDNS és MR kép elemzésekből nyernek, ahogy fent részletezték, a kutatók áttekintik és rögzítik a tanulmányba bevont résztvevők klinikai adatait. Ez magában foglalja a tüdő biopsziák patológiai jelentéseinek áttekintését. Az összegyűjtött információ lehetővé teszi számunkra, hogy meghatározzuk a kapcsolatot, ha van ilyen, a cfDNS és tüdő MRI megállapítások között az eredményekkel. Ez az adat jelszóval védett REDCap (Research Electronic Data Capture) adatbázisban lesz tárolva. Ehhez a tanulmányhoz a kutatók rögzítik az alapvető demográfiai adatokat (életkor, nem, gender, faj/etnikum), klinikai adatokat (beleértve patológiai jelentéseket, egyéb diagnózisokat, gyógyszereket, dohányzási előzményeket), valamint a pulmonális funkció méréseit (szén-monoxid diffúziós kapacitás, FEV1, FVC, teljes tüdőkapacitás, hat perces séta teszt teljesítmény) és különböző vér vagy szerológiai markereket, amelyeket rutinszerűen mérnek a tüdőtranszplantált betegek klinikai kezelésében, ha rendelkezésre állnak. A kutatók rögzíthetik a klinikailag kapott pulmonális imaging szkennerek eredményeit is a tüdőbetegség előrehaladásának nyomon követésére és/vagy további tesztelést (mint echokardiogram vagy kardiopulmonális terheléses teszt), amelyet esetleg végeztek. Az említett adatok rögzítésén kívül a tanulmányba lépéskor (alapvonal), a kutatók időszakosan hozzáférnek a beteg elektronikus orvosi nyilvántartásaihoz a következő pulmonális funkció teszt (PFT) eredmények és egyéb releváns követési adatok rögzítésére, mint kórházi kezelések és létfontosságú állapot körülbelül három havonta a tanulmány befejezésétől határozatlan ideig.