Mobilisatie van mesenchymale stamcellen tijdens levertransplantatie

Mesenchymale stamcellen (MSC's) zijn een bekende immuunmodulator met significante immunosuppressieve effecten. MSC's zijn naar voren gekomen als een veelbelovende grens in klinische proeven bij mensen. Van MSC's is aangetoond dat ze niet-immunogeen zijn, waardoor ze in staat zijn tot transplantatie over de allogene barrière. Deze eigenschappen maken MSC's een ideale kandidaat om te bestuderen of ze betrokken zijn bij het verminderen van de afstoting van het transplantaat, in dit geval levertransplantatie. Als dat zo is, zou de informatie zeer significant zijn, aangezien het zou leiden tot een aanzienlijke vermindering van het gebruik van immunosuppressiva bij de vervanging van MSC's. Dit zal een tweeledig doel dienen: verminderde klinische problemen geassocieerd met farmacologische immunosuppressie (besproken in de volgende paragraaf); extra hulp bij de bescherming van de getransplanteerde lever door de MSC's.

Met name het gebruik van immunosuppressiva is van vitaal belang bij orgaantransplantaties, ook bij levertransplantatiepatiënten. Het gebruik ervan gaat echter gepaard met tal van nadelen, zoals reactivering van virale hepatitis, opportunistische infecties en andere complicaties. Als MSC's kunnen worden gebruikt om het gebruik van immunosuppressiva bij levertransplantatiepatiënten te verminderen, kan dit leiden tot een significante afname van morbiditeit en mortaliteit als gevolg van levertransplantatie.

Hepatische macrofagen, dwz Kupffer-cellen, hebben een bekende functie van het werven van monocyten in de lever. Er is aangetoond dat ze een ontstekingsbevorderend effect hebben door monocyten naar de lever te lokken. Ze werken ook samen met hepatische stellaatcellen (HSC's) die pro-fibrogene functies hebben. Er is echter aangetoond dat ze ook ontstekingsremmende effecten hebben, wat een rol speelt bij de regressie van fibrose. Hepatische macrofagen zijn een interessant nieuw doelwit voor therapeutische interventie en het effect van steroïden op kupffercellen en hun interactie met MSC's is nog niet volledig onderzocht.

De patiënt zal worden aangesloten op standaard monitoren van de American Society of Anesthesiologists (ASA), waaronder pulsoximetrie, elektrocardiogram, niet-invasieve bloeddrukbewaking, temperatuur en capnometrie. Patiënten worden onder algemene anesthesie geplaatst met endotracheale intubatie en gecontroleerde beademing. Zoals gebruikelijk bij alle leveroperaties, wordt er een arteriële lijn ingebracht voor bloeddrukmeting en voor herhaalde bloedafnames. Indien geïndiceerd, wordt een longslagaderkatheter ingebracht.

De anesthesie wordt gehandhaafd met behulp van een vluchtig middel. Verlamming wordt uitgevoerd met behulp van een niet-depolariserend neuromusculair blokkerend middel naar keuze van de anesthesioloog.

Zoals gebruikelijk zullen er elk uur bloedmonsters worden genomen uit de arteriële lijn om Protime(PT)/International Normalized Ratio (INR)/Complete Blood Count/elektrolyten te analyseren. Rode bloedcellen, vers ingevroren plasma en bloedplaatjes zullen indien nodig worden getransfundeerd.

Zoals gebruikelijk krijgen ontvangers van een levertransplantatie de gebruikelijke dosis methylprednisolon voor immuunsuppressie in de anhepatische fase.

Intraoperatief zullen bij patiënten die een transplantatie ondergaan drie bloedmonsters worden afgenomen uit de arteriële lijn voor studiedoeleinden. Elk monster bevat 3cc bloed.

De tijdstippen voor bloedmonsters zijn als volgt:

• Onmiddellijk na plaatsing van de arteriële lijn als basislijn
• In de anhepatische fase voorafgaand aan injectie met steroïden
• Twee uur na toediening van steroïden Postoperatief zullen twee extra bloedmonsters van 3 ml worden genomen door een lid van het onderzoeksteam. De eerste zal op postoperatieve dag 1 zijn voorafgaand aan de toediening van immunosuppressiva en het tweede monster op postoperatieve dag vijf. Voor levertransplantatiepatiënten wordt dus in totaal 15 milliliter (ml) bloed verzameld over een periode van 5 dagen voor het onderzoek.

De toediening van immunosuppressieve medicijnen en/of dosering zal niet worden gewijzigd als onderdeel van het onderzoek.

Er zal ook een weefselmonster van het leverdonororgaan worden genomen om MCS's te kweken (vrijgestelde geïnformeerde toestemming).

Patiënten in de controlegroep ondergaan een leverresectie. Ze zullen de dosis methylprednisolon niet krijgen. Intra-operatief worden bloedmonsters verzameld op deze tijdstippen:

• onmiddellijk na plaatsing van de arteriële lijn
• twee uur na leverresectie. Postoperatief worden twee extra bloedmonsters van 3 ml genomen. De eerste wordt ingenomen op dag één na de operatie en de tweede op dag vijf postoperatief of op de dag van ontslag, afhankelijk van wat zich het eerst voordoet. Deze monsters worden verzameld door een lid van het onderzoeksteam. Een totaal van 12 ml bloed over een periode van 5 dagen zal voor studiedoeleinden worden afgenomen bij de leverresectiepatiënten.

Alle bloedmonsters worden onmiddellijk afgeleverd bij het laboratorium van Dr. Rameswhar, gevestigd in MSB, E579. De relatieve frequentie van MSC's aanwezig in het bloed van de twee groepen zal bepaald worden door middel van flowcytometrie. De gegevens worden gepresenteerd als het percentage MSC's/106 mononucleaire cellen. Er zullen statistische analyses worden uitgevoerd om te bepalen of er verschillen zijn tussen de twee groepen proefpersonen.

Naast bovenstaande onderzoeken met de donorlever gaan we ook levercellen behandelen met glucocorticoïden en daarna de lever onderzoeken op veranderingen in aquaporine. De reden voor deze wijziging is om te bepalen of aquaporine het vermogen om water te verzamelen vergroot. Deze aanvullende studie zal de monsters niet veranderen, aangezien slechts een klein stukje (<1 mg) weefsel voldoende zal zijn.