Мобилизация мезенхимальных стволовых клеток при трансплантации печени

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) являются известным иммуномодулятором со значительным иммунодепрессивным действием. МСК стали перспективным рубежом в клинических испытаниях на людях. Было показано, что МСК неиммуногенны, что делает их пригодными для трансплантации через аллогенный барьер. Эти качества делают МСК идеальным кандидатом для изучения, если они участвуют в уменьшении отторжения трансплантата, в данном случае трансплантата печени. Если это так, то информация будет очень значимой, поскольку приведет к значительному сокращению использования иммунодепрессантов с заменой МСК. Это будет служить двум целям: уменьшить клинические проблемы, связанные с фармакологической иммуносупрессией (обсуждается в следующем абзаце); дополнительная помощь в защите трансплантированной печени МСК.

Использование иммунодепрессантов особенно важно при трансплантации органов, включая пациентов с трансплантацией печени. Однако их применение сопровождается многочисленными недостатками в виде реактивации вирусных гепатитов, оппортунистических инфекций и других осложнений. Если МСК можно использовать для снижения использования иммунодепрессантов у пациентов с трансплантацией печени, это может привести к значительному снижению заболеваемости и смертности в результате трансплантации печени.

Печеночные макрофаги, т.е. клетки Купфера, обладают известной функцией рекрутирования моноцитов в печень. Было показано, что они обладают провоспалительным эффектом, привлекая моноциты в печень. Они также взаимодействуют со звездчатыми клетками печени (ЗКП), которые выполняют профиброгенные функции. Однако было показано, что они также обладают противовоспалительным действием, что указывает на роль в регрессии фиброза. Печеночные макрофаги представляют собой интересную новую мишень для терапевтического вмешательства, а влияние стероидов на клетки Купфера, а также их взаимодействие с МСК полностью не изучены.

Пациент будет подключен к стандартным мониторам Американского общества анестезиологов (ASA), включая пульсоксиметрию, электрокардиограмму, неинвазивный мониторинг артериального давления, температуру и капнометрию. Пациенты будут помещены под общую анестезию с эндотрахеальной интубацией и контролируемой вентиляцией легких. Как это принято при всех операциях на печени, для контроля артериального давления и повторных заборов крови будет вставлена ​​артериальная линия. При наличии показаний будет вставлен катетер в легочную артерию.

Анестезия будет поддерживаться с использованием летучих агентов. Паралич будет обеспечен с использованием недеполяризующего нервно-мышечного блокатора по выбору анестезиолога.

В соответствии со стандартной практикой ежечасно из артериальной линии будут браться образцы крови для анализа Protime (PT)/международного нормализованного отношения (INR)/полного анализа крови/электролитов. При необходимости переливают эритроциты, свежезамороженную плазму и тромбоциты.

Как обычно, реципиентам трансплантата печени вводят обычную дозу метилпреднизолона для подавления иммунитета в беспеченочной фазе.

Во время операции у пациентов, перенесших трансплантацию, будут взяты три образца крови из артериальной линии для целей исследования. Каждый образец будет содержать 3 мл крови.

Сроки сдачи образцов крови следующие:

• Сразу после размещения артериальной линии в качестве базовой линии
• В беспеченочной стадии перед инъекцией стероидов
• Через два часа после введения стероидов. После операции член исследовательской группы возьмет два дополнительных образца крови по 3 мл. Первый будет в послеоперационный день 1 до введения иммунодепрессантов, а второй образец - на пятый послеоперационный день. Таким образом, у пациентов с трансплантацией печени для исследования будет собрано в общей сложности 15 миллилитров (мл) крови в течение 5 дней.

Введение иммунодепрессантов и/или дозировка не будут изменены в рамках исследовательского исследования.

Образец ткани донорского органа печени также будет взят для культивирования MCS (за исключением информированного согласия).

Пациентам контрольной группы будет выполнена резекция печени. Они не получат дозу метилпреднизолона. Во время операции образцы крови будут собираться в следующие моменты времени:

• сразу после установки артериальной линии
• через два часа после резекции печени. После операции будут взяты два дополнительных образца крови по 3 мл. Первую берут в первый послеоперационный день, а вторую — в пятый послеоперационный день или в день выписки, в зависимости от того, что наступит раньше. Эти образцы будут собраны членом исследовательской группы. В общей сложности 12 мл крови в течение 5 дней будут собирать у пациентов с резекцией печени для целей исследования.

Все образцы крови будут немедленно доставлены в лабораторию доктора Рамесвара, расположенную в MSB, E579. Относительную частоту МСК, присутствующих в крови двух групп, будут оценивать с помощью проточной цитометрии. Данные будут представлены в виде процента МСК/106 мононуклеарных клеток. Будет проведен статистический анализ, чтобы определить, есть ли различия между двумя группами испытуемых.

В дополнение к вышеуказанным исследованиям с донорской печенью мы также будем обрабатывать клетки печени глюкокортикоидами, а затем исследовать печень на предмет изменения аквапорина. Причина этой модификации заключается в том, чтобы определить, увеличивает ли аквапорин способность накапливать воду. Это дополнительное исследование не изменит образцы, поскольку будет достаточно только небольшого (<1 мг) образца ткани.